一種玫煙色棒束孢菌株的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種玫煙色棒束孢菌株（Isariafumosorosea）。該菌株是從江西九連山國家級自然保護(hù)區(qū)被蟲生真菌自然侵染的家白蟻蟲體上分離獲得的野生菌株，將野生菌株回接于家白蟻蟲體上復(fù)壯獲得本發(fā)明玫煙色棒束孢菌株，對該菌株采用單孢子分離獲得純化菌株。該純化菌株為玫煙色棒束孢菌株SCAU-IFCF02，于2013年11月1日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO：M2013526。經(jīng)長期的侵染生物學(xué)研究和室內(nèi)生物測定，表明該菌株在小菜蛾和家白蟻生物防治中具有非常強(qiáng)的應(yīng)用潛力。
【專利說明】一種玫煙色棒束孢菌株
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。更具體地，涉及一種玫煙色棒束孢菌株。
【背景技術(shù)】
[0002]昆蟲病原真菌是殺蟲微生物的重要組成部分，約占昆蟲病原微生物種類的60%以上。微生物農(nóng)藥的大量開發(fā)利用可有效降低和消除目前化學(xué)農(nóng)藥普遍存在的殘留、毒性和抗藥性等諸多負(fù)面作用。玫煙色棒束孢(/saria /i/fflosoriosea)是一種重要的昆蟲病原真菌，廣泛分布于熱帶、亞熱帶和溫帶地區(qū)，能寄生包括同翅目、雙翅目、鱗翅目、半翅目、鞘翅目和膜翅目等多種蔬菜、果樹及茶樹害蟲。玫煙色棒束孢對害蟲高效、對環(huán)境友好、不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，因此成為國內(nèi)外生物防治研究的熱點(diǎn)。用真菌微生物農(nóng)藥防治植物病蟲害是無公害農(nóng)產(chǎn)品可持續(xù)生產(chǎn)中的重要手段之一，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003]玫煙色棒束孢作為一種常見的昆蟲病原真菌應(yīng)用于害蟲防治，其生長發(fā)育受多種生態(tài)因子影響，對寄主昆蟲的致病過程復(fù)雜，并涉及多種基因及其產(chǎn)物的調(diào)控，實(shí)踐應(yīng)用防效不穩(wěn)定，限制了其應(yīng)用。菌株改良雖可提高毒力并擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，但仍存在很多待解決或未知的問題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有玫煙色棒束孢菌株防治害蟲效果差及防效不穩(wěn)定等缺陷和技術(shù)不足，提供一種玫煙色棒束孢菌株。
[0005]本發(fā)明目的是提供上述玫煙色棒束孢菌株及其培養(yǎng)方法。
[0006]本發(fā)明上述目的通過`以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明提供了一種玫煙色棒束孢菌株，所述菌株為玫煙色棒束孢(hariafumosorosea (Wize) Brown & Smith)菌株 SCAU-1FCF02,該菌株于 2013 年 11 月 I 日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2013526，保藏地址為中國武漢市武漢大學(xué)。
[0007]所述玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02屬絲孢目、棒束孢屬。
[0008]所述玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的形態(tài)學(xué)特征描述如下:
菌落形態(tài):菌落正面絨毛狀，初白色，產(chǎn)孢后呈淡玫煙色，凹凸蓬松粉層；背面乳黃色，中心至邊緣半徑15mm圓內(nèi)多條丘狀隆起。
[0009]菌絲和孢子形態(tài):通過顯微觀察，可以看到分生孢子梗著生在營養(yǎng)菌絲上。菌絲分隔，透明，光滑，寬1.5~2.5Mm。分生孢子梗單生或者聚集成孢梗束，100X 1.5~100X2.0Mm，壁光滑，透明，大多由著生4~6個瓶梗組成輪生體的輪狀分枝組成。瓶梗基部球形，或擬橢圓形膨大，上部細(xì)長，5.7~8.0X 1.0~2.0Mm。分生孢子球形至近梭形,光滑，透明至微淡紅色，3.0~4.0X1.0~2.0Mm,無厚垣孢子。
[0010]本發(fā)明獲得玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的步驟如下:
S1.采樣:從江西九連山國家級自然保護(hù)區(qū)采取被蟲生真菌自然侵染的家白蟻；52.分離:從采回的被蟲生真菌感染的家白蟻蟲尸樣品上分離病原菌。利用5%的次氯酸鈉溶液對樣品進(jìn)行表面消毒，消毒后的樣品在滅菌水中洗滌3次，并放入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板中，置于25土 1°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待菌落形成后,轉(zhuǎn)移到PDA斜面，再轉(zhuǎn)入4°C冰箱內(nèi)保存；
53.復(fù)壯:將分離到的菌株在PDA平板上培養(yǎng)15天，待形成菌落后加入含有0.03%吐溫-80的無菌水洗下孢子，然后移入燒杯中，將孢子懸浮液在磁力攪拌器上攪拌30分鐘，稀釋為IX IO7個孢子/mL的孢子懸浮液，用小型手動噴霧器均勻噴于家白蟻工蟻體表，保濕90%~100%，7 d后挑取感染的家白蟻，按照前面所述的方法分離得到A分離株；
54.純化:A分離株在PDA平板上培養(yǎng)15d，待形成玫煙色孢子后，挑取分生孢子制成
IX IO3個孢子/mL的孢子懸浮液，將懸浮液滴于放有蓋玻片的載玻片上，在生物顯微鏡下觀察，將一個液滴中只有一個分生孢子的玻片插入PDA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，獲得B、C、D、E、F共5個分尚株；
55.鑒定:根據(jù)病原菌的培養(yǎng)形狀、菌絲、分生孢子和產(chǎn)孢器的形態(tài)進(jìn)行初步鑒定；
56.篩選:分別測定5個分離株對靶標(biāo)害蟲的致病力、菌株產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和菌落生長速率，比較結(jié)果篩選出活性強(qiáng)、對害蟲防效最好的玫煙色棒束孢菌株。經(jīng)美國農(nóng)業(yè)部歐洲生物防治實(shí)驗(yàn)室昆蟲病理學(xué)專家Guy Mecardier鑒定為Jsaria fumosorosea (Wize)Brown & Smith，菌株命名為SCAU-1FCF02，于2013年11月I日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2013526，保藏地址為中國武漢市武漢大學(xué)。
[0011]本發(fā)明所用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)配方為:200g馬鈴薯，17~20g瓊脂，20g葡萄糖，1000mL水,分裝,高壓滅菌鍋滅菌(121°C, 30min)。
`[0012]蟲生真菌在遺傳、生態(tài)及生物學(xué)特性方面具有多樣性，同種真菌的不同菌株對目標(biāo)害蟲的致病力存在著顯著的差異，菌株不同，其LD5(1、LT5tl可相差數(shù)倍甚至數(shù)十倍。篩選和獲得高產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率高和致病力強(qiáng)的優(yōu)質(zhì)菌株，是取得良好防治效果的前提和必要環(huán)節(jié)。在已報道的對小菜蛾毒力比較強(qiáng)的病原真菌中，球孢白僵菌CS-1在處理濃度為IXlO5孢子/ml時，在溫室條件下對小菜蛾2齡幼蟲的LT5tl為3.61天(Yoon et al.,1999);綠僵菌在處理濃度為I X IO8孢子/ml時，小菜蛾2齡幼蟲的LT5tl為4.97天，對小菜蛾 2 齡幼蟲的 LC5tl 為 2.03 X IO4 孢子/ml (Ma，2000)。
[0013]菌株篩選常用的4個指標(biāo)分別是菌株對靶標(biāo)害蟲的致病力、菌株產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和菌落生長速率。本發(fā)明以上述指標(biāo)為依據(jù)，篩選得到玫煙色棒束孢的優(yōu)良菌株SCAU-1FCF02。接種玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02后第2天，各處理中2齡幼蟲均開始發(fā)病死亡，表明所述菌株對小菜蛾具有非常強(qiáng)的致病力。在最高濃度I X IO7個孢子/mL時，小菜蛾2、3和4齡幼蟲的累計校正死亡率分別為100%,98.93%,87.23%。在小菜蛾2、3和4齡幼蟲接種后第7天，致死中濃度LC50分別為7.63 X IO3個孢子/mL、1.05 X IO4個孢子/mL和2.40 X IO4個孢子/mL。接種玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02后小菜蛾2、3和4齡幼蟲的LC50分別為7.63X 103、1.05X 104、2.40父104個孢子/11^。在處理濃度為I X IO7個孢子/mL時，2、3和4齡幼蟲的LT50分別為1.61天、1.66天和1.80天。相比于目前常用的玫煙色棒束孢菌株，本發(fā)明所述玫煙色棒束孢SCAU-1FCF02菌株對小菜蛾幼蟲具有顯著的高致病力，這從其對小菜蛾的致死中濃度和致死中時兩方面均可以表現(xiàn)出來。玫煙色棒束孢SCAU-1FCF02菌株是目前為止所報道的對小菜蛾幼蟲具最低的致死濃度和最快的致死速度的昆蟲病原真菌，表現(xiàn)出該菌株在小菜蛾生物防治中具有較強(qiáng)的應(yīng)用潛力。
[0014]本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明提供了一種玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02，該菌株能夠防治十字花科蔬菜害蟲，尤其是對家白蟻和小菜蛾的防治效果非常顯著，是目前為止所報道的對小菜蛾幼蟲致死濃度最低和致死速度最快的昆蟲病原真菌，在家白蟻和小菜蛾生物防治中具有較強(qiáng)的應(yīng)用潛力。
[0015]另外，玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02是一種昆蟲病原真菌，作為一種活體生物農(nóng)藥，具有不同于現(xiàn)有化學(xué)殺蟲劑的全新的作用機(jī)理，對環(huán)境無污染、無殘留，對人類和家畜安全，適應(yīng)了有機(jī)食品生產(chǎn)的要求；且該菌株是從江西九連山國家級自然保護(hù)區(qū)被侵染的家白蟻蟲體上分離獲得，為中國本土的菌株，并非從國外引進(jìn)，能適應(yīng)本地的自然環(huán)境。在家白蟻和小菜蛾等十字花科蔬菜害蟲的生物防治中具有很強(qiáng)的推廣應(yīng)用價值。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本【技術(shù)領(lǐng)域】常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。
[0017]除非特別說明，本發(fā)明所用試劑均為常規(guī)方法配制或市購，玫煙色棒束孢菌株的培養(yǎng)均按照本領(lǐng)域常規(guī)方法進(jìn)行培養(yǎng)。
[0018]實(shí)施例中所用的含有0.03%吐溫-80的無菌水，所述的0.03%指的是體積比。
[0019]實(shí)施例1玫煙色棒束孢菌株SCAU_IFCR)2的獲得
1、實(shí)驗(yàn)材料和條件
(I)在江西九連山國家級自然`保護(hù)區(qū)采集到一種被蟲生真菌侵染的家白蟻(Cop to termes formosanus ) 尸3。
[0020](2)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA):200g馬鈴薯，17~20g瓊脂，20g葡萄糖，1000mL水,分裝,高壓滅菌鍋滅菌(121°C, 30min)。
[0021](3)無菌操作條件:所有器皿和用具均須經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌(121°C，30min)，接種等操作均在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行。
[0022](4)菌株培養(yǎng)條件:置于25± 1°C光照恒溫箱(14L: 10D)中培養(yǎng),待菌落形成后,轉(zhuǎn)移到PDA斜面，再轉(zhuǎn)入4°C冰箱內(nèi)保存。
[0023]2、病原菌的分離與鑒定
(I)分離:從采回的被蟲生真菌感染的家白蟻蟲尸樣品上分離病原菌。利用5%的次氯酸鈉溶液對樣品進(jìn)行表面消毒，消毒后的樣品在滅菌水中洗滌3次，并放入PDA平板中，置于25±1°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌落形成后，轉(zhuǎn)移到PDA斜面，再轉(zhuǎn)入4°C冰箱內(nèi)保存。
[0024](2)復(fù)壯:將分離到的菌株在PDA平板上培養(yǎng)15天，待形成菌落后用含有0.03%吐溫-80的無菌水洗下孢子，獲得孢子懸浮液，移入燒杯中，將孢子懸浮液在磁力攪拌器上攪拌30分鐘，稀釋為IX IO7個孢子/mL的孢子懸浮液，用小型手動噴霧器均勻噴于家白蟻工蟻體表，保濕90%~100%，7d后挑取感染的家白蟻，按照(I)所述的方法分離得到A分離株。
[0025](3)純化:對A分離株分別在PDA平板上培養(yǎng)15d，待形成玫煙色孢子后，挑取分生孢子制成IXlO3個孢子/mL的孢子懸浮液，將懸浮液滴于放有蓋玻片的載玻片上，在生物顯微鏡下觀察，將一個液滴中只有一個分生孢子的玻片插入PDA培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，獲得B、C、D、E、F共5個分離株。
[0026](4)鑒定:根據(jù)病原菌的培養(yǎng)形狀、菌絲、分生孢子和產(chǎn)孢器的形態(tài)進(jìn)行初步鑒定。
[0027]菌落形態(tài)描述:菌落正面絨毛狀，初白色，產(chǎn)孢后呈淡玫煙色，凹凸蓬松粉層；背面乳黃色，中心至邊緣半徑15_圓內(nèi)多條丘狀隆起。
[0028]菌絲和孢子形態(tài)描述:通過顯微觀察，可以看到分生孢子梗著生在營養(yǎng)菌絲上。菌絲分隔，透明，光滑，寬1.5~2.5Mm。分生孢子梗單生或者聚集成孢梗束，100X1.5~100X2.0Mm,壁光滑，透明，大多由著生4~6個瓶梗組成輪生體的輪狀分枝組成。瓶?；壳蛐?，或擬橢圓形膨大，上部細(xì)長，5.7~8.0X 1.0~2.0Mm。分生孢子球形至近梭形,光滑，透明至微淡紅色，3.0~4.0X1.0~2.0Mm,無厚垣孢子。
[0029]3、玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的篩選
蟲生真菌在遺傳、生態(tài)及生物學(xué)特性方面具有多樣性，同種真菌的不同菌株對目標(biāo)害蟲的致病力存在著顯著的差異，菌株不同，其LD5(1、LT5tl可相差數(shù)倍甚至數(shù)十倍。篩選和獲得高產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率高和致病力強(qiáng)的優(yōu)質(zhì)菌株，是取得良好防治效果的前提和必要環(huán)節(jié)。菌株篩選常用的4個指標(biāo)分別是菌株對靶標(biāo)害蟲的致病力、菌株產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和菌落生長速率。本發(fā)明以上述指標(biāo)為依據(jù)，篩選玫煙色棒束孢的優(yōu)良菌株。
[0030]( I)供試菌株的處理
經(jīng)純化后獲得的玫煙色棒束孢B、C、D、E、F共5個分離株，在PDA平板上于25± I °〇的恒溫箱(光照周期為光照:黑暗=14:10)中培養(yǎng)。
[0031](2)供試蟲源` 家白蟻采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)校園，室內(nèi)利用松木塊飼養(yǎng)工蟻和白蟻，實(shí)驗(yàn)挑取健康的工蟻供室內(nèi)毒力測定。
[0032](3)菌落生長速率和產(chǎn)孢量的測定
將5個分離株分別配制成I X IO7個孢子/mL的分生孢子懸浮液，分別取500μ?懸浮液滴入PDA培養(yǎng)基上，用三角玻璃棒涂勻，待2~3d長出菌絲后用直徑為5mm的打孔器鉆取新鮮菌落，并接種于PDA平板上，然后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(14L:10D)。每菌株5個重復(fù)。每2天定時定方向測量菌落直徑的增長量，共測4次，計算生長速率(mm/天)。繼續(xù)培養(yǎng)至第15d，測定各菌株的產(chǎn)孢量。具體操作如下:用直徑13_的滅菌打孔器在菌落中心至邊緣1/2處打孔取樣，樣品放入IOmL含有0.03%吐溫-80的無菌水中，在磁力攪拌器上攪拌20分鐘，使孢子分散均勻，制成孢子懸浮液，用血球計數(shù)板計數(shù)測定產(chǎn)孢量。結(jié)果如表1所示。
[0033](4)孢子萌發(fā)率的測定
將5個分離株分別培養(yǎng)15d后，用含有0.03%吐溫-80的無菌水收集孢子并制成懸浮液(每視野內(nèi)100個左右分生孢子)，用載玻片萌發(fā)法試驗(yàn)，將孢子懸浮液直接滴在無菌載玻片上，置于底部鋪有滅菌濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，在皿內(nèi)滴加4~5滴無菌水以保持100%的相對濕度(RH)，培養(yǎng)18h后鏡檢。每個處理5個重復(fù)。結(jié)果如表1所示。
[0034](5)分離株對家白蟻工蟻的致病力測定。
[0035]制備各供試菌株的孢子懸浮液:將各供試菌株接種于PDA平板上培養(yǎng)15d，用含有
0.03%吐溫-80的無菌水洗下孢子，用磁力攪拌器攪拌30min，雙層滅菌紗布濾去菌絲，制成孢子懸浮液，并用血球計數(shù)板調(diào)整孢子濃度為I X IO7個孢子/mL。[0036]試蟲處理:采用浸蟲法測定各分離株對家白蟻工蟻的致病力。選取健康的工蟻，用軟鑷子將供試工蟻挑入各分離株孢子懸浮液的稀釋液(用含有0.03%吐溫-80的無菌水進(jìn)行稀釋)中，浸潰IOs后挑出，將工蟻置于滅菌的濾紙上吸干多余水分后，移至底部襯有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿(直徑為9cm)內(nèi)，培養(yǎng)皿用保鮮膜封口，在薄膜上扎孔通氣，每個處理20頭工蟻，重復(fù)5次，共100頭工蟻。另以含有0.03%吐溫-80的無菌水作為對照，操作方法同上，重復(fù)5次。接種后，將各處理置于人工智能箱中內(nèi)，25± I°C，相對濕度90%，光照周期為光照:黑暗=14:10。12小時后開始觀察，用濾紙飼養(yǎng)處理的工蟻，視皿內(nèi)濾紙被取食情況更換新鮮的濾紙。記錄工蟻感病癥狀和死亡蟲數(shù)，共計錄7天。統(tǒng)計校正死亡率。結(jié)果如表I所示。
[0037](6)玫煙色棒束孢分離株的篩選
在篩選優(yōu)良分離株時，致病性和產(chǎn)孢量是重要的參考指標(biāo)，孢子萌發(fā)率和菌落平均生長速率次之。在本發(fā)明中，從表1可以看出，菌株B的菌落平均生長速率顯著高于其余菌株，B菌株的菌落生長速率最快，為15.79mm/天，并且菌株B的產(chǎn)孢量在5個分菌株中也是最高的，達(dá)到2.71 X IO7個孢子/mL。菌株D次之為2.32 X IO7個孢子/mL。在孢子萌發(fā)率方面，各分離株孢子萌發(fā)率差異顯著，其中以菌株B和C孢子萌發(fā)率最高為92.11%和90.39%。生測結(jié)果顯示:菌株B感染家白蟻的校正死亡率最高，達(dá)到100%，顯示出超強(qiáng)的致病力。
[0038]表1菌株生物學(xué)特性及其對家白蟻工蟻的校正死亡率
【權(quán)利要求】
1.一種玫煙色棒束孢菌株(/saria /i/fflosariosea),其特征在于,所述菌株為玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02，該菌株于2013年11月I日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為 CCTCC NO:M 2013526。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫煙色棒束孢菌株(/saria/i/fflosariosea),其特征在于,所述的玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02屬絲孢目、棒束孢屬。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫煙色棒束孢菌株(/saria/i/fflosariosea),其特征在于,所述的玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的形態(tài)學(xué)特征描述如下: 菌落正面絨毛狀，初白色，產(chǎn)孢后呈淡玫煙色，凹凸蓬松粉層；背面乳黃色，中心至邊緣半徑15mm的圓內(nèi)有多條丘狀隆起； 菌絲分隔，透明，光滑，寬1.5~2.5Mm； 分生孢子梗單生或者聚集成孢梗束，100X1.5~100X2.0Mm，壁光滑，透明，大多由著生4~6個瓶梗組成輪生體的輪狀分枝組成；瓶?；壳蛐危驍M橢圓形膨大，上部細(xì)長，5.7 ~8.0 X 1.0 ~2.0Mm ； 分生孢子球形至近梭形，光滑，透明至微淡紅色，3.0~4.0X 1.0~2.0Mm,無厚垣孢子。
4.權(quán)利要求1、2或3所述的玫煙色棒束孢菌株的分離方法，其特征在于，包括以下步驟: 51.采樣:從江西九連山國家級自然保護(hù)區(qū)采取被蟲生真菌自然侵染的家白蟻； 52.分離:從采回的被蟲生真菌感染的家白蟻蟲尸樣品上分離病原菌，利用5%的次氯酸鈉溶液對樣品進(jìn)行表面消毒，消毒后的樣品在滅菌水中洗滌，并放入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板中，置于25°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌落形成后，轉(zhuǎn)移到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板斜面，冷藏保存； 53.復(fù)壯:將分離到的菌株在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，待形成菌落后加入含有0.03%吐溫-80的無菌水洗下孢子獲得孢子懸浮液，將孢子懸浮液在磁力攪拌器上攪拌30分鐘后，稀釋為I X IO7個孢子/mL的孢子懸浮液，均勻噴于家白蟻工蟻體表，保濕90%~100%，7 d后挑取感染的家白蟻，按照S2所述的方法分離得到A分離株； 54.純化:A分離株在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，待形成玫煙色孢子后，挑取分生孢子制成IXlO3個孢子/mL的孢子懸浮液，將懸浮液滴于放有蓋玻片的載玻片上，在生物顯微鏡下觀察，將一個液滴中只有一個分生孢子的玻片插入馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，獲得B、C、D、E、F共5個分離株； 55.鑒定:根據(jù)病原菌的培養(yǎng)形狀、菌絲、分生孢子和產(chǎn)孢器的形態(tài)進(jìn)行初步鑒定； 56.篩選:分別測定5個分離株對靶標(biāo)害蟲的致病力、菌株產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和菌落生長速率，比較結(jié)果篩選出活性強(qiáng)、對害蟲防效最好的玫煙色棒束孢菌株，即玫煙色棒束孢菌株 SCAU-1FCF02。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離方法，其特征在于，所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的配制方法為:0.2g/mL的馬鈴薯，0.017~0.02g/mL的瓊脂，0.02g/mL的葡萄糖，加水定容，分裝，121°C滅菌。
【文檔編號】C12N1/14GK103756913SQ201310721109
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】何余容, 呂利華, 念曉歌 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)