專(zhuān)利名稱(chēng)：一種芘人工免疫原py-bsa的制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā) 明屬芘的多克隆抗體領(lǐng)域，特別是涉及一種芘人工免疫原PY-BSA的制備及用途。
背景技術(shù)：
多環(huán)芳烴是指含有兩個(gè)或兩個(gè)以上苯環(huán)的有機(jī)化合物，一般可分為非稠環(huán)型和稠環(huán)型兩類(lèi)。常見(jiàn)的多環(huán)芳烴有萘、蒽、菲、芘、苯并芘、熒蒽等。多環(huán)芳烴種類(lèi)繁多，目前已知的有400多種。這類(lèi)化合物性質(zhì)比較穩(wěn)定。它的來(lái)源包括自然來(lái)源和人為來(lái)源。自然來(lái)源主要是生物體內(nèi)的合成、森林及草原自然起火等。人為來(lái)源主要是來(lái)自化石燃料的燃燒、 汽車(chē)尾氣、秸稈焚燒以及石油提煉。多環(huán)芳烴在自然環(huán)境(水、土壤、大氣等)中普遍存在且能夠長(zhǎng)距離遷移。多環(huán)芳烴容易在生物體內(nèi)蓄積且具有“三致”的特點(diǎn)，即致癌性、致畸性、致突變性。因此，世界各國(guó)都十分重視對(duì)多環(huán)芳烴的監(jiān)控，對(duì)其在環(huán)境中的含量有嚴(yán)格的限制。美國(guó)EPA已將萘、蒽、芘等16種PAHs確定為環(huán)境優(yōu)先控制污染物，且總量要小于 0.2yg/L。中國(guó)將7種多環(huán)芳烴列為優(yōu)先控制污染物，規(guī)定飲用水中苯并[a]芘的質(zhì)量濃度應(yīng)小于0.01 μ g/L。目前，檢測(cè)環(huán)境中芘等PAHs常用的方法有氣相色譜法和高效液相色譜法。這些方法對(duì)樣品檢測(cè)的精密度和準(zhǔn)確度都較高，但是前處理過(guò)程繁瑣、耗時(shí)，不適于大批量快速檢測(cè)和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。因此，研究和開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏的分析方法成為當(dāng)務(wù)之急。免疫分析法是基于抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)而建立起來(lái)的分析方法。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)是免疫分析中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)在不僅應(yīng)用于多種疾病的免疫診斷，還應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定。ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。目前有關(guān)運(yùn)用ELISA來(lái)檢測(cè)芘的報(bào)道甚少。合成合格的芘人工抗原是獲得芘抗體的前提，而獲得芘抗體也是建立芘的ELISA分析方法的重要環(huán)節(jié)。
發(fā)明內(nèi)容
要解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種芘的人工免疫原PY-BSA的制備及用途，以克服現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)中對(duì)芘樣品預(yù)處理復(fù)雜、耗時(shí)、且需要大量有機(jī)溶劑萃取，以及在檢測(cè)過(guò)程中要用到精密昂貴的檢測(cè)儀器而不適宜推廣使用和不利于當(dāng)環(huán)境污染事件發(fā)生在野外時(shí)的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)等缺點(diǎn)。技術(shù)方案本發(fā)明的一種芘人工免疫原PY-BSA，結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1. 一種芘人工免疫原PY-BSA，其特征在于該芘人工免疫原具有如下結(jié)構(gòu)
2.一種制備如權(quán)利要求1所述的芘人工免疫原PY-BSA的方法，包含以下步驟(1)芘半抗原的合成在干燥燒瓶中，加入摩爾比為1 1芘和丁二酸酐，待固體全部溶解用冰-鹽浴冷卻反應(yīng)體系至_5°C，分三次加入摩爾比2. 2倍于芘的無(wú)水三氯化鋁。恒溫反應(yīng)半小時(shí)，然后再于25°C反應(yīng)Mh。反應(yīng)完畢，反應(yīng)物用鹽酸調(diào)至PH值至酸性，然后加 NaOH調(diào)PH值至堿性，回流3h。過(guò)濾，濾液用鹽酸調(diào)回至酸性。所得的粗產(chǎn)物用冰乙酸重結(jié)晶，活性炭脫色，干燥后得到淡黃色固體粉末。(2)芘人工免疫原的合成將溶有N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)和N，N’- 二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)的有機(jī)溶劑逐滴加入溶有芘半抗原的有機(jī)溶劑中，冰浴下攪拌反應(yīng)4小時(shí)，離心分出的上清液，加入到溶有BSA的磷酸鹽緩沖液(PBS)中，4°C反應(yīng)20個(gè)小時(shí)，將溶液裝入透析袋，用PH6 8磷酸鹽緩沖液透析3 6d ；透析后離心分出上清液，即得芘人工免疫原 PY-BSA偶聯(lián)物，分裝后-20°C保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種芘人工免疫原PY-BSA的制備方法，其特征在于，所述步
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的芘半抗原的化學(xué)名稱(chēng)為 Y -氧代-I-芘丁酸，分子量302，分子結(jié)構(gòu)式為
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟⑵中的有機(jī)溶劑是N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟O)中的半抗原、NHS、DCC摩爾比為1 1.5 1.5，半抗原、蛋白質(zhì)摩爾比分別為100 1。
7.一種芘人工免疫原PY-BSA的應(yīng)用，通過(guò)免疫動(dòng)物制備成芘特異性抗體，能與芘發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的免疫球蛋白IgG，用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)水體、土壤及大氣中痕量的芘。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種芘人工免疫原PY-BSA及其制備方法和用途，制備(1)以丁二酸酐、芘、無(wú)水三氯化鋁為原料，冰浴反應(yīng)半小時(shí)，然后于25℃反應(yīng)24h。加鹽酸終止反應(yīng)，再加NaOH回流，過(guò)濾，濾液中加入鹽酸，重結(jié)晶，活性炭脫色，干燥，得淡黃色芘半抗原；(2)以芘半抗原、N-羥基琥珀酸亞胺和N，N’-二環(huán)己基碳酰亞胺為原料，DMF為溶劑，冰浴下攪拌反應(yīng)4小時(shí)。然后將所得活化酯加入到牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液中，4℃下反應(yīng)20小時(shí)，透析后離心分出上清液，制得到芘人工免疫原PY-BSA。本發(fā)明制備簡(jiǎn)便，成本低；芘人工免疫原PY-BSA通過(guò)動(dòng)物制備成芘特異性抗體，從而用于環(huán)境中痕量芘的檢測(cè)與監(jiān)控。
文檔編號(hào)C07K14/765GK102241764SQ20111011501
公開(kāi)日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2011年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月5日
發(fā)明者李方實(shí), 陳洪巖 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)