两个人的电影免费视频_国产精品久久久久久久久成人_97视频在线观看播放_久久这里只有精品777_亚洲熟女少妇二三区_4438x8成人网亚洲av_内谢国产内射夫妻免费视频_人妻精品久久久久中国字幕

二肽Pro-Asp在促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1方面的應(yīng)用

文檔序號(hào):8933211閱讀:732來源:國知局
二肽Pro-Asp在促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1方面的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于動(dòng)物生長和代謝技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及Pr0-Asp對動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1的促進(jìn)作用及其在動(dòng)物生長和代謝中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]動(dòng)物生長受到生長軸(GHRH-GH-1GF-1)的調(diào)控,如何促進(jìn)肝臟IGF-1的分泌對于動(dòng)物生長和代謝具有重要的意義。研宄發(fā)現(xiàn),日糧中不同營養(yǎng)物質(zhì)對肝臟IGF-1的分泌有重要的影響。日糧蛋白經(jīng)過消化后會(huì)形成一些含有2個(gè)氨基酸殘基的肽,稱為二肽。二肽不僅能為蛋白質(zhì)合成提高氮骨架,發(fā)揮其營養(yǎng)性作用,還可參與動(dòng)物的些生理活動(dòng),如促進(jìn)礦物質(zhì)元素的吸收利用、提高動(dòng)物機(jī)體的免疫能力和促進(jìn)瘤胃微生物的生長等,發(fā)揮其功能性作用,在動(dòng)物生產(chǎn)實(shí)踐中廣泛應(yīng)用。除了活體層面研宄小肽功能外,小肽作為添加物處理細(xì)胞的試驗(yàn)也有報(bào)道。細(xì)胞培養(yǎng)基中添加肌肽和環(huán)二肽cyclo-[His-Pro] (CHP)均可以減緩缺血培養(yǎng)下PC12細(xì)胞的凋亡。
[0003]日糧經(jīng)小腸消化進(jìn)入腸道時(shí),由于小腸的首過代謝作用和胞液中的肽水解酶分解作用,二肽進(jìn)入肝臟中的種類和濃度會(huì)有所改變,有報(bào)道(LIU et al.,2014),二肽中連有脯氨酸(Pro)時(shí),其穩(wěn)定性升高,可以以一定濃度在血液中存在。另有報(bào)道,肝細(xì)胞凋亡的發(fā)生可能主要依賴于肝組織半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)活性的改變,抑制caspase_3能明顯減輕肝損傷。Caspase-3為天冬氨酸(Asp)特異性半胱氨酸蛋白酶,其活性與天冬氨酸的濃度有關(guān)。L-谷氨酰胺(Gln)作為DNA和谷胱甘肽等合成的氮前體,在肝組織再生,肝細(xì)胞增殖的過程中扮演著極其重要的角色。但是,目前有關(guān)二肽Pro-Asp對動(dòng)物肝細(xì)胞IGF-1分泌的影響尚未見研宄和報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供二肽Pro-Asp的一種新的生理功能,即二肽Pro-Asp (而非單體氨基酸Pro+Asp)能夠促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1。另外,Pro-Asp在促進(jìn)IGF-1分泌方面,具有類似生長激素(GH)的作用,因此可以應(yīng)用于動(dòng)物生長促進(jìn)劑。
[0005]本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明公開了二肽Pro-Asp在促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1方面的應(yīng)用,主要包括以下方面:
二肽Pro-Asp在作為或制備動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1的分泌促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。
[0006]二肽Pro-Asp在作為或制備體外H印G2細(xì)胞或仔豬原代肝細(xì)胞分泌IGF-1的分泌促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。
[0007]二肽Pro-Asp在作為或制備體內(nèi)小鼠肝細(xì)胞分泌IGF-1的分泌促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。
[0008]二肽P1-Asp作為或制備!fepG2細(xì)胞或仔豬原代肝細(xì)胞IGF-1 mRNA和蛋白的表達(dá)促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。
[0009]二肽Pro-Asp在作為或制備JAK2-STAT5信號(hào)通路激活劑方面的應(yīng)用,具體地,二肽P1-Asp是作為或制備小鼠肝臟細(xì)胞P-JAK2和P-STAT5蛋白表達(dá)促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。
[0010]二肽P1-Asp在作為或制備促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞JAK2和STAT5的磷酸化水平的促進(jìn)劑方面的應(yīng)用,以及二肽Pro-Asp和生長激素GH聯(lián)用在作為或制備促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞JAK2和STAT5的磷酸化水平的促進(jìn)劑方面的應(yīng)用;具體地,所述動(dòng)物肝細(xì)胞為HepG2細(xì)胞。
[0011]二肽Pro-Asp在作為或制備動(dòng)物生長促進(jìn)劑或飼料添加劑方面的應(yīng)用,優(yōu)選地,所述動(dòng)物為豬。
[0012]本發(fā)明經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)研宄發(fā)現(xiàn),二肽Pro-Asp,而非Pro+Asp,能夠促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1。Pro-Asp不僅能夠在體外促進(jìn)H印G2細(xì)胞和仔豬原代肝細(xì)胞分泌IGF-1,還能夠在體內(nèi)促進(jìn)小鼠肝細(xì)胞分泌IGF-1。另外,本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)二肽Pro-Asp在促進(jìn)IGF-1分泌方面,具有類似生長激素(GH)的作用,對于動(dòng)物生長有一定的促進(jìn)作用,因此,可用作動(dòng)物生長促進(jìn)劑或飼料添加劑使用。
[0013]本發(fā)明具有以下有益效果:
(I)本發(fā)明提供了 Pro-Asp的一種重要的新生理功能,首次公開了二肽Pro-Asp能夠在體外促進(jìn)H印G2細(xì)胞和仔豬原代肝細(xì)胞分泌IGF-1,同時(shí)能夠在體內(nèi)促進(jìn)小鼠肝細(xì)胞分泌IGF-10
[0014](2)本發(fā)明提供了二肽P1-Asp在促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞IGF-1分泌方面,具有類似生長激素(GH)的作用,可用作動(dòng)物生長促進(jìn)劑,具有很好的推廣應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0015]圖1為二肽Pro-Asp對H印G2細(xì)胞IGF-1分泌的影響。
[0016]圖2為二肽Pro-Asp對仔豬肝原代細(xì)胞IGF-1分泌的影響。
[0017]圖3為二肽Pro-Asp對H印G2細(xì)胞IGF-1 mRNA表達(dá)的影響。
[0018]圖4為二肽Pro-Asp對仔豬肝原代細(xì)胞IGF-1 mRNA表達(dá)的影響。
[0019]圖5為二肽Pro-Asp對H印G2細(xì)胞IGF-1 mRNA表達(dá)及蛋白的影響。
[0020]圖6為單體氨基酸Pro+Asp對H印G2細(xì)胞IGF-1 mRNA表達(dá)的影響。
[0021 ]圖7為二肽Pro-Asp對小鼠肝臟組織IGFs相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
[0022]圖8為二肽Pro-Asp與生長激素(GH)對IGF-1表達(dá)的作用比較。
【具體實(shí)施方式】
[0023]以下結(jié)合說明書附圖和具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明,但實(shí)施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明,本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。
[0024]除非特別說明,以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市購。
[0025]實(shí)施例1二肽Pro-Asp (而非氨基酸單體Pro+Asp)促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1 1、實(shí)驗(yàn)方法
(I)采用含有10%胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)H印G2細(xì)胞,!fepato ZYME-SFM無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)仔豬原代肝細(xì)胞。
[0026](2)分別用 Pro-Asp (50、200、500 μ M)和 Pro+Asp (500 μΜ)處理上述 H印G2 細(xì)胞和仔豬原代肝細(xì)胞24h。
[0027](3)收集細(xì)胞,提取RNA和蛋白,分別利用qPCR和western blot方法檢測IGF-1mRNA和蛋白表達(dá)。
[0028]收集細(xì)胞上清,RIA或ELSIA方法檢測細(xì)胞上清中IGF-1分泌量。
[0029]2、結(jié)果如附圖1?6所示。結(jié)果表明,500 μ M的Pro-Asp可顯著提高H印G2細(xì)胞(圖1)和仔豬原代肝細(xì)胞(圖2)分泌IGF-1,同時(shí)顯著促進(jìn)!fepG2細(xì)胞(圖3)和仔豬原代肝細(xì)胞(圖4) IGF-1 mRNA的表達(dá),顯著促進(jìn)H印G2細(xì)胞(圖5) IGF-1蛋白的表達(dá)。而單體氨基酸Pro+Asp則不具備Pro-Asp對肝細(xì)胞IGF-1分泌的促進(jìn)作用(圖6)。
[0030]實(shí)施例2尾靜脈注射二肽Pro-Asp對小鼠肝臟細(xì)胞IGF-1表達(dá)及信號(hào)通路的影響 1、實(shí)驗(yàn)方法
(I)動(dòng)物飼養(yǎng)條件只/箱,單養(yǎng);飼養(yǎng)溫度與濕度:20?26 °C,40?70% ;采用10h:14 h晝夜間斷照明;飼養(yǎng)室條件始終保持穩(wěn)定,以保證試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。自由進(jìn)食飲水,飼料和飲用水均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;檢疫:對購入SPF級(jí)C57BL BKS-DB小鼠預(yù)飼7 do期間每日檢查動(dòng)物一次。
[0031](2)動(dòng)物分組及處理:將4周齡大的小鼠隨機(jī)分為正常對照組、Tl組和T2組,每組6只,共3組。正常對照組小鼠尾靜脈注射生理鹽水,Tl組小鼠尾靜脈注射純度95%的Pro-Asp 100 mg/kg,T2 組小鼠尾靜脈注射 Pro+Asp (45+51) mg/kg。小鼠處理 30 min 時(shí)開始采樣。
[0032](3)血液樣品的采集:將處理后的小鼠迅速摘掉眼球取血,用2 mL離心管收集血液,靜置待血液凝固后,3000 rpm/min離心15 min,收集血清,_80°C冰箱保存?zhèn)溆?。血液中IGF-1含量采用試劑盒檢測,具體方法參見試劑說明書。
[0033](4)組織樣品的采集:試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天,采血完畢后頸椎脫臼處死小鼠,摘取肝臟、濾紙吸干,每只小鼠于固定位置剪一塊組織樣,放入2 mL離心管,迅速投入裝有液氮的容器中,采樣結(jié)束后轉(zhuǎn)移樣品至-80 °C冰箱中,保存?zhèn)溆?。組織樣品經(jīng)總蛋白提取后,采用Western Blot方法檢測IGF-1等相關(guān)基因蛋白水平的表達(dá)變化,綜合分析Pro-Asp對小鼠肝臟分泌IGF-1的影響。
[0034]2、結(jié)果如附圖7所示。由圖7可知,小鼠尾靜脈注射100 mg/kg Pro-Asp 30 min,Pro-Asp可以顯著上調(diào)小鼠肝臟組織IGF-1的表達(dá),同時(shí)顯著提高P-JAK2和p_STAT5的蛋白表達(dá),而單體氨基酸則無此促進(jìn)作用。結(jié)果提示Pro-Asp通過激活JAK2-STAT5信號(hào)通路促進(jìn)IGF-1蛋白的表達(dá)。
[0035]實(shí)施例3 Pro-Asp具有類似GH促進(jìn)IGF-1分泌的作用
1、采用含有10%胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)H印G2細(xì)胞,分別用Pro-Asp(500 μ Μ)或/和GH (20 nM)處理細(xì)胞24h,收集細(xì)胞,提取細(xì)胞蛋白,western blot方法分別進(jìn)行IGF-1蛋白和相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)。
[0036]2、結(jié)果如附圖8所示。圖8表明,單獨(dú)添加GH和Pro-Asp均能夠顯著促進(jìn)JAK2和STAT5的磷酸化水平和IGF-1蛋白表達(dá)水平;與單獨(dú)添加GH和Pro-Asp相比,同時(shí)添加二者同時(shí)能夠顯著促進(jìn)JAK2和STAT5的磷酸化水平,但并不能顯著升高IGF-1蛋白表達(dá)水平,提示Pro-Asp具有類似GH的作用。
[0037]綜上所述,試驗(yàn)表明,二肽Pro-Asp (而非單體氨基酸Pro+Asp)能夠促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1,且在促進(jìn)IGF-1分泌方面,Pro-Asp具有類似生長激素(GH)的作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.二肽Pro-Asp在作為或制備動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1的分泌促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。2.二肽Pro-Asp在作為或制備體外H印G2細(xì)胞或仔豬原代肝細(xì)胞分泌IGF-1的分泌促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。3.二肽Pro-Asp在作為或制備體內(nèi)小鼠肝細(xì)胞分泌IGF-1的分泌促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。4.二肽Pro-Asp作為或制備H印G2細(xì)胞或仔豬原代肝細(xì)胞IGF-1 mRNA和蛋白的表達(dá)促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。5.二肽Pro-Asp在作為或制備JAK2-STAT5信號(hào)通路激活劑方面的應(yīng)用。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述應(yīng)用,其特征在于,二肽Pro-Asp是作為或制備小鼠肝臟細(xì)胞P-JAK2和P-STAT5蛋白表達(dá)促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。7.二肽Pro-Asp在作為或制備促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞JAK2和STAT5的磷酸化水平的促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。8.二肽P1-Asp和生長激素GH聯(lián)用在作為或制備促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞JAK2和STAT5的磷酸化水平的促進(jìn)劑方面的應(yīng)用。9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述應(yīng)用,其特征在于,所述動(dòng)物肝細(xì)胞為HepG2細(xì)胞。10.二肽Pro-Asp在作為或制備動(dòng)物生長促進(jìn)劑或飼料添加劑方面的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了二肽Pro-Asp在促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1方面的應(yīng)用。本發(fā)明公開的是二肽Pro-Asp,而非Pro+Asp,能夠促進(jìn)動(dòng)物肝細(xì)胞分泌IGF-1,Pro-Asp不僅能夠在體外促進(jìn)HepG2細(xì)胞和仔豬原代肝細(xì)胞分泌IGF-1,還能夠在體內(nèi)促進(jìn)小鼠肝細(xì)胞分泌IGF-1。另外,本發(fā)明發(fā)現(xiàn)二肽Pro-Asp在促進(jìn)IGF-1分泌方面,具有類似生長激素(GH)的作用,對于動(dòng)物生長有一定的促進(jìn)作用,可用作動(dòng)物生長促進(jìn)劑或飼料添加劑。
【IPC分類】A61K38/05, C07K5/078, A61P5/06, A23K1/165
【公開號(hào)】CN104910254
【申請?zhí)枴緾N201510314607
【發(fā)明人】江青艷, 束剛, 王松波, 朱曉彤, 王麗娜, 高萍
【申請人】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年6月10日
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1
女同久久另类99精品国产91| 亚洲九九香蕉| 色精品久久人妻99蜜桃| 夜夜夜夜夜久久久久| 国精品久久久久久国模美| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲精品一二三| 国产伦人伦偷精品视频| 在线av久久热| 日日爽夜夜爽网站| 欧美日韩亚洲高清精品| 99re6热这里在线精品视频| 人成视频在线观看免费观看| 国产激情久久老熟女| av国产精品久久久久影院| 在线观看免费视频日本深夜| 精品乱码久久久久久99久播| 中国美女看黄片| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 精品久久久精品久久久| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲专区中文字幕在线| 久久青草综合色| 十分钟在线观看高清视频www| 中国美女看黄片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产成人精品在线电影| 成年人免费黄色播放视频| 他把我摸到了高潮在线观看 | 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美性长视频在线观看| 99国产精品一区二区三区| 中文字幕制服av| 一二三四社区在线视频社区8| 十八禁人妻一区二区| www.熟女人妻精品国产| 老司机在亚洲福利影院| 国产高清激情床上av| 久久久国产精品麻豆| 精品亚洲成a人片在线观看| 一区在线观看完整版| 性色av乱码一区二区三区2| 日本wwww免费看| 日日爽夜夜爽网站| videos熟女内射| 国产精品一区二区在线观看99| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产区一区二久久| 免费看十八禁软件| 久久精品成人免费网站| 日韩有码中文字幕| 久久青草综合色| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 岛国毛片在线播放| 女警被强在线播放| 亚洲欧美一区二区三区久久| 无遮挡黄片免费观看| 性色av乱码一区二区三区2| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲国产欧美网| 午夜免费鲁丝| 正在播放国产对白刺激| 午夜久久久在线观看| 不卡av一区二区三区| 国产在线观看jvid| 欧美在线一区亚洲| 亚洲综合色网址| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久亚洲精品不卡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 午夜免费鲁丝| 日本五十路高清| 亚洲九九香蕉| √禁漫天堂资源中文www| 在线 av 中文字幕| 久久久欧美国产精品| 夜夜爽天天搞| 国产一区二区 视频在线| 国产亚洲一区二区精品| 成年人免费黄色播放视频| 在线看a的网站| 亚洲av国产av综合av卡| 啪啪无遮挡十八禁网站| cao死你这个sao货| kizo精华| 在线观看免费视频网站a站| 国产主播在线观看一区二区| 91成人精品电影| 亚洲成人免费av在线播放| 乱人伦中国视频| 不卡一级毛片| 免费日韩欧美在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 美女福利国产在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲avbb在线观看| 热99re8久久精品国产| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 两性夫妻黄色片| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品偷伦视频观看了| 多毛熟女@视频| 午夜激情av网站| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产福利在线免费观看视频| 久久久精品94久久精品| 动漫黄色视频在线观看| 女人久久www免费人成看片| 免费在线观看黄色视频的| 精品第一国产精品| 激情视频va一区二区三区| 99久久人妻综合| 丰满饥渴人妻一区二区三| 日本欧美视频一区| 国产黄色免费在线视频| 久久青草综合色| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日本av免费视频播放| av片东京热男人的天堂| 色尼玛亚洲综合影院| 我的亚洲天堂| 亚洲 国产 在线| 色94色欧美一区二区| aaaaa片日本免费| 黑人操中国人逼视频| 十八禁高潮呻吟视频| 成在线人永久免费视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲专区字幕在线| 久久久欧美国产精品| 18在线观看网站| 国产精品一区二区在线不卡| 悠悠久久av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久9热在线精品视频| 久久青草综合色| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99国产综合亚洲精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 咕卡用的链子| 两个人免费观看高清视频| 麻豆av在线久日| 9色porny在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 满18在线观看网站| av片东京热男人的天堂| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 大型av网站在线播放| 国产成人一区二区三区免费视频网站| av网站在线播放免费| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久精品亚洲av国产电影网| 欧美精品一区二区免费开放| www.熟女人妻精品国产| 999久久久国产精品视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 操美女的视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久久久国内视频| 日韩有码中文字幕| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 丝袜美腿诱惑在线| 久久久精品94久久精品| 亚洲伊人色综图| 性色av乱码一区二区三区2| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | av有码第一页| 亚洲国产中文字幕在线视频| 老汉色∧v一级毛片| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲精华国产精华精| 在线观看免费午夜福利视频| 国产99久久九九免费精品| 黄色 视频免费看| 日韩视频一区二区在线观看| av天堂久久9| 欧美日韩亚洲高清精品| 免费观看人在逋| 国产精品免费大片| 另类精品久久| 亚洲人成77777在线视频| av网站在线播放免费| 亚洲精品在线美女| 国产福利在线免费观看视频| 大片免费播放器 马上看| 少妇精品久久久久久久| 午夜福利在线观看吧| 午夜免费鲁丝| 国产xxxxx性猛交| 亚洲av国产av综合av卡| 丰满少妇做爰视频| 人妻一区二区av| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日韩欧美免费精品| 狂野欧美激情性xxxx| 动漫黄色视频在线观看| 国产一区二区 视频在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成人国产一区最新在线观看| 午夜福利欧美成人| 91av网站免费观看| 高清在线国产一区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲av欧美aⅴ国产| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久人妻熟女aⅴ| 免费不卡黄色视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 多毛熟女@视频| 国产深夜福利视频在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 免费少妇av软件| 91成年电影在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 久久久久久久国产电影| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99九九在线精品视频| 热99久久久久精品小说推荐| 日韩大片免费观看网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 一级片免费观看大全| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产主播在线观看一区二区| 在线av久久热| 国产一区二区三区视频了| 极品教师在线免费播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产一区二区三区视频了| 男女无遮挡免费网站观看| 交换朋友夫妻互换小说| 中文字幕高清在线视频| 捣出白浆h1v1| 一级片'在线观看视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美日韩成人在线一区二区| 激情在线观看视频在线高清 | 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一二三四在线观看免费中文在| 国产不卡av网站在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 女同久久另类99精品国产91| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲av电影在线进入| 99热网站在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 青青草视频在线视频观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 午夜激情久久久久久久| 午夜福利视频在线观看免费| 日本wwww免费看| 国产日韩欧美视频二区| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲成人手机| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 老司机靠b影院| 精品福利永久在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 亚洲久久久国产精品| 国产精品免费大片| 免费看a级黄色片| 国产av又大| 757午夜福利合集在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 最新美女视频免费是黄的| 无遮挡黄片免费观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产视频一区二区在线看| 叶爱在线成人免费视频播放| 色播在线永久视频| 91精品三级在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| tube8黄色片| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产精品99久久99久久久不卡| 99国产综合亚洲精品| av国产精品久久久久影院| 另类亚洲欧美激情| 亚洲欧洲日产国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 欧美亚洲日本最大视频资源| 超色免费av| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成人免费观看视频高清| 亚洲精品av麻豆狂野| 成年动漫av网址| 性少妇av在线| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99国产精品一区二区三区| 久久精品人人爽人人爽视色| 日日摸夜夜添夜夜添小说| av视频免费观看在线观看| 亚洲免费av在线视频| 亚洲专区中文字幕在线| 免费观看a级毛片全部| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品av久久久久免费| 日日夜夜操网爽| 亚洲视频免费观看视频| 夫妻午夜视频| 国产又爽黄色视频| aaaaa片日本免费| 午夜精品国产一区二区电影| 桃红色精品国产亚洲av| 国产日韩欧美视频二区| 丝袜人妻中文字幕| 在线观看免费视频日本深夜| 视频在线观看一区二区三区| 久久久久网色| 大型av网站在线播放| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文字幕最新亚洲高清| 考比视频在线观看| 亚洲avbb在线观看| 美女午夜性视频免费| 精品一区二区三区四区五区乱码| 18禁观看日本| 极品人妻少妇av视频| 蜜桃国产av成人99| 国产黄频视频在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 18在线观看网站| 激情在线观看视频在线高清 | 夜夜爽天天搞| 手机成人av网站| 国产精品.久久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品免费一区二区三区在线 | 99国产精品99久久久久| 亚洲熟妇熟女久久| 真人做人爱边吃奶动态| 国产在线视频一区二区| 久久99热这里只频精品6学生| 国产欧美日韩一区二区三| 黄色丝袜av网址大全| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产97色在线日韩免费| av天堂在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品免费视频内射| 久久精品91无色码中文字幕| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品电影一区二区三区 | 一级片免费观看大全| 欧美黄色淫秽网站| 久久国产精品影院| 欧美激情极品国产一区二区三区| 两人在一起打扑克的视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲九九香蕉| 亚洲专区字幕在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 不卡av一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产在线免费精品| 色播在线永久视频| 极品教师在线免费播放| 精品高清国产在线一区| 国产午夜精品久久久久久| 怎么达到女性高潮| 女人久久www免费人成看片| 精品国内亚洲2022精品成人 | 午夜福利在线免费观看网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 免费高清在线观看日韩| av电影中文网址| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 大型黄色视频在线免费观看| 三级毛片av免费| 999久久久国产精品视频| 久久久国产成人免费| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久这里只有精品19| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩有码中文字幕| 丝瓜视频免费看黄片| 操出白浆在线播放| 大型黄色视频在线免费观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 乱人伦中国视频| 操美女的视频在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人三级做爰电影| 久久久欧美国产精品| 最新美女视频免费是黄的| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久青草综合色| av有码第一页| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 欧美日韩成人在线一区二区| 久久久久久人人人人人| aaaaa片日本免费| 色在线成人网| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产真人三级小视频在线观看| 成人三级做爰电影| 久久天堂一区二区三区四区| 一级毛片女人18水好多| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 欧美乱码精品一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品成人在线| 男人舔女人的私密视频| 操美女的视频在线观看| 国产高清激情床上av| 搡老乐熟女国产| 天堂动漫精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产激情久久老熟女| 亚洲国产看品久久| 视频区图区小说| 正在播放国产对白刺激| av天堂久久9| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久国产精品大桥未久av| 91大片在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久毛片免费看一区二区三区| bbb黄色大片| 国产精品九九99| 两个人看的免费小视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 9191精品国产免费久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 中国美女看黄片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲天堂av无毛| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲国产av影院在线观看| 乱人伦中国视频| 99热网站在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品人妻在线不人妻| 中文字幕最新亚洲高清| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产av国产精品国产| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品熟女久久久久浪| 一级片免费观看大全| 亚洲三区欧美一区| 国产黄频视频在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 性少妇av在线| 美女午夜性视频免费| 亚洲免费av在线视频| 美女午夜性视频免费| 搡老乐熟女国产| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲av第一区精品v没综合| 黄色成人免费大全| 最黄视频免费看| 免费看a级黄色片| 老司机福利观看| 热99久久久久精品小说推荐| 久久青草综合色| 露出奶头的视频| 岛国在线观看网站| 中文欧美无线码| 好男人电影高清在线观看| 成人国产av品久久久| 免费不卡黄色视频| 两个人免费观看高清视频| 日日夜夜操网爽| 国产成人精品在线电影| 欧美性长视频在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 纯流量卡能插随身wifi吗| 777米奇影视久久| 另类亚洲欧美激情| 窝窝影院91人妻| 丝袜美腿诱惑在线| 中文亚洲av片在线观看爽 | 国产精品电影一区二区三区 | 一本色道久久久久久精品综合| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品一区二区免费欧美| 成在线人永久免费视频| 久热爱精品视频在线9| 一进一出抽搐动态| 精品视频人人做人人爽| 日日爽夜夜爽网站| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲熟女毛片儿| 日本wwww免费看| 久久亚洲精品不卡| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日本a在线网址| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲成a人片在线一区二区| 一进一出好大好爽视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 婷婷丁香在线五月| 91精品三级在线观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 最新的欧美精品一区二区| 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品 欧美亚洲| av有码第一页| 下体分泌物呈黄色| 无人区码免费观看不卡 | 午夜免费鲁丝| 日韩欧美免费精品| 国产亚洲一区二区精品| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美黄色片欧美黄色片| 日韩免费高清中文字幕av| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲精品在线观看二区| 久久人妻av系列| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 性少妇av在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 美国免费a级毛片| 国产黄色免费在线视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av天堂久久9| 国产男女超爽视频在线观看| 国产视频一区二区在线看| 18禁美女被吸乳视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 超碰成人久久| 波多野结衣一区麻豆| tube8黄色片| 日本av手机在线免费观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲av美国av| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 男人操女人黄网站| 国产成人系列免费观看| 久久久久久久久免费视频了| 国产成人精品无人区| 日韩免费av在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产三级黄色录像| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲免费av在线视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美性长视频在线观看| 最黄视频免费看| 精品视频人人做人人爽| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产精品久久久久久精品古装| 成人三级做爰电影| av有码第一页| 97人妻天天添夜夜摸| 精品久久久久久电影网| kizo精华| 国产精品久久久久成人av| 久9热在线精品视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 亚洲少妇的诱惑av| 久久人妻av系列| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 动漫黄色视频在线观看| 成人三级做爰电影| 亚洲人成77777在线视频| 成人特级黄色片久久久久久久 | 午夜免费成人在线视频| 9色porny在线观看| 香蕉丝袜av| 日韩中文字幕欧美一区二区| av网站在线播放免费| videosex国产| 国产精品98久久久久久宅男小说| 操美女的视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 又黄又粗又硬又大视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| av欧美777| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久精品成人免费网站| 国产xxxxx性猛交|