專利名稱：一種等電點測定用電泳槽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及生物試驗設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域，更具體的講是一種等電點測定用電泳槽。
背景技術(shù)：
等電點(pI)是兩性電解質(zhì)所帶凈電荷為零時的一種解離狀態(tài)。一種兩性電解質(zhì)pI值的大小為該兩性電解質(zhì)所帶凈電荷為零時所在緩沖溶液的pH值。在兩性電解質(zhì)的分離和純化操作中，等電點是一個重要參數(shù)。所以，創(chuàng)建一種合適的等電點測定方法具有重要意義。目前，通用的等電點測定方法是等電聚焦法，包括柱狀凝膠等電聚焦法和薄層凝膠等電聚焦法兩種，其原理是將人工合成的商品兩性載體加到聚丙烯酰胺凝膠中，在電場中，兩性載體形成一個pH梯度，兩性電解質(zhì)在等于其等電點處聚集，從而達到測定等電點或分離兩性電解質(zhì)的目的。等電聚焦法的不足之處在于凝膠形成時間長，一般需要較長時間的通電過程，分離的樣品區(qū)帶往往被兩性載體所污染，最后尚需通過測量或估算才能求得近似pI值。
發(fā)明內(nèi)容
為克服上述缺點，本實用新型的目的是設(shè)計一種等電點測定用電泳槽。它的技術(shù)方案為外槽壁7內(nèi)設(shè)置有兩列電極槽3，每列電極槽3共用一根鉑金絲電極10，鉑金絲電極10與接線柱8連接，每列電極槽3中的相鄰電極槽由內(nèi)槽外壁5、內(nèi)槽間隔壁4和膜支撐壁2-1隔開，膜支撐壁2-1之間為間隔槽1，外槽壁7與內(nèi)槽外壁5之間為冷卻室6，自來水出口9-2和自來水進口9-1分別與冷卻室6連接相通。該實用新型的優(yōu)點是結(jié)構(gòu)設(shè)計合理實用，構(gòu)思巧妙新穎，本電泳槽的主要特點是本實用新型是由若干可盛放系列pH梯度緩沖液的電極槽對所組成，利用醋酸纖維薄膜作為樣品支持物，根據(jù)兩性電解質(zhì)所帶靜電荷為零時在電場中靜止不動的特點來確定其等電點。本設(shè)計可用于氨基酸、核苷酸、多肽、蛋白質(zhì)和酶等多類兩性電解質(zhì)等電點的測定。測定等電點時不使用兩性載體和不使用凝膠是本設(shè)計的另一特點。使用本設(shè)計測定等電點具有微量、簡便、快速和精確等優(yōu)點。
圖1為去掉電泳槽蓋的立體圖，圖2俯視圖，圖3為圖2的具體尺寸圖，圖4為在圖1A-A處剖視圖并帶有電泳槽蓋，圖5為圖4的具體尺寸圖，圖6為電泳槽蓋斜面坡度圖，圖7為繪圖法求算等電點圖例。附圖中1、間隔槽，2-1、膜支撐壁，2-2、膜支撐壁凸起，3、電極槽，4、內(nèi)槽間隔壁，5、內(nèi)槽外壁，6、冷卻室，7、外槽壁，8、接線柱，9-1、自來水進口，9-2、自來水出口，10、鉑金絲電極。
具體實施方式
外槽壁7內(nèi)設(shè)置有兩列電極槽3，每列電極槽3共用一根鉑金絲電極10，鉑金絲電極10與接線柱8連接，每列電極槽3中的相鄰電極槽由內(nèi)槽外壁5、內(nèi)槽間隔壁4和膜支撐壁2-1隔開，膜支撐壁2-1之間為間隔槽1，外槽壁7與內(nèi)槽外壁5之間為冷卻室6，自來水出口9-2和自來水進口9-1分別與冷卻室6連接相通。使用該電泳槽時，分別將若干種一定離子強度的不同pH值的緩沖液按照pH大小順次加入不同的電極槽對，將待測樣品以線狀或點狀點樣于醋酸纖維薄膜中間，點樣后的醋酸纖維薄膜搭放于相對位置的膜支持壁凸起上，通過位于電極槽內(nèi)的濾紙橋而形成閉合回路。若樣品中某兩性電解質(zhì)的等電點小于相應(yīng)槽室內(nèi)緩沖液的pH值，則該兩性電解質(zhì)樣品帶負電荷，在電場中向正極泳動；若樣品的等電點大于所處緩沖液的pH值，則帶正電荷，在電場中向負極泳動；若等電點等于緩沖液的pH值，則該兩性電解質(zhì)樣品所帶靜電荷為零而靜止于點樣處。本設(shè)計用于兩性電解質(zhì)等電點測定的原理是基于等電點的定義，即，根據(jù)兩性電解質(zhì)在電場中所帶靜電荷為零時靜止于電場中(在此為靜止于點樣處)，此時，兩性電解質(zhì)的等電點等于其所處緩沖液的pH值。使用本設(shè)計所測定的等電點值可精確到pH0.1。首先使用本設(shè)計進行預(yù)實驗，將待測樣品的等電點限定于差值為1的兩個pH值之間，配制差值為0.1的系列緩沖液(配制方法1)；或根據(jù)預(yù)實驗已經(jīng)基本確定的樣品的等電點，配制差值在0.3至0.5之間的系列緩沖液5至6種，并盡量使樣品等電點的預(yù)測值處于該系列緩沖液總pH梯度的中間值處(配制方法2)。通過如下所述方法進行操作。
(1)濾紙橋的制作裁剪合適尺寸的雙層濾紙條，使其一端與膜支持壁凸起2-2的前沿對齊，另一端浸入電極槽3的緩沖液中，用緩沖液將濾紙全部潤濕，驅(qū)除氣泡，并使濾紙緊貼于膜支持壁2-1上；同法制作相對位置電極槽3的濾紙橋。根據(jù)需要來決定應(yīng)制作的濾紙橋數(shù)。
(2)醋酸纖維膜的浸泡裁剪若干1-2×8cm大小的醋酸纖維膜條，在其無光澤面的兩端用鉛筆輕輕標注正、負極符號和用阿拉伯數(shù)字標明該膜條所代表的緩沖液pH值，在膜條中央位置輕輕地劃一點樣線，并使之與膜條縱長方向相垂直。注明電極槽3各個槽室所盛裝緩沖液的序號，然后按序號將膜條分別浸入相應(yīng)pH值的緩沖液中浸泡20分鐘。
應(yīng)根據(jù)需要來選擇緩沖液的種類。離子強度的選擇可參照一般的醋酸纖維薄膜電泳方法。緩沖液的pH值須是經(jīng)由酸度計準確標定?？稍谌舾蛇m當大小的條形器皿內(nèi)進行膜條浸泡，并先使膜條一端接觸緩沖液，使緩沖液沿膜條向另一端擴展，然后輕輕蕩動器皿，使漂浮在液面上的膜條浸入液面以下。
(3)點樣選擇浸泡均勻的醋酸纖維膜條，用濾紙吸去多余的緩沖液，用微量吸管或蓋玻片將樣品呈線狀或點狀點于膜條無光澤面的點樣線處。
浸泡后的膜條上若出現(xiàn)深淺不一的條紋或斑點，說明質(zhì)地不均勻，應(yīng)棄之不用。應(yīng)使用經(jīng)透析除鹽的樣品。點樣時不可用力過猛。點樣量一般可控制在0.3至5μL之間，也可根據(jù)預(yù)實驗來確定。點樣后膜條上的樣品寬度或點狀樣品直徑以不超過4mm為宜。
(4)電泳按醋酸纖維膜上標注的序號和電極符號，使點樣面朝下，將膜條搭放于相應(yīng)電極槽3的濾紙橋上，驅(qū)除氣泡，平衡10分鐘左右，待膜條被來自濾紙橋的緩沖液均勻潤濕后，加蓋電泳。調(diào)節(jié)電流強度為0.4至0.5mA/厘米膜寬，通電10至30分鐘。具體通電時間宜根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果來確定。
為防止電泳之前在緩沖液潤濕薄膜過程中樣品被緩沖液拖動而偏離點樣線，也可先潤濕薄膜，后點樣，這樣做很重要。
(5)染色關(guān)閉電源，取出醋酸纖維薄膜，將其浸入適當?shù)娜旧褐?，染色一定時間后，漂洗膜條，直至背景為無色。根據(jù)電泳圖譜，判斷待測兩性電解質(zhì)樣品的等電點大小。
染色液不應(yīng)是可溶解醋酸纖維薄膜的溶劑。染色液的種類以及染色時間，應(yīng)根據(jù)樣品的性質(zhì)而定。對于某些可進行活性顯色檢測的酶類，可直接將電泳后的膜條浸入含有相應(yīng)酶作用底物的反應(yīng)緩沖液中進行顯色。
特別需要說明的是，可利用繪圖法進行樣品等電點的求算(尤其適用于緩沖液配制方法2)以緩沖液pH值為橫坐標，以樣品遷移率為縱坐標(往正極遷移的標為正值，往負極遷移的標為負值)，將坐標上各個點連接起來，連線與橫坐標的交點即為所要測定的樣品的等電點。在一定的pH值范圍內(nèi)，遷移率與pH梯度呈正相關(guān)(見圖7)。圖7表明待測樣品的等電點為pH4.7。
權(quán)利要求1.一種等電點測定用電泳槽，其特征是外槽壁(7)內(nèi)設(shè)置有兩列電極槽(3)，每列電極槽(3)共用一根鉑金絲電極(10)，鉑金絲電極(10)與接線柱(8)連接，每列電極槽(3)中的相鄰電極槽由內(nèi)槽外壁(5)、內(nèi)槽間隔壁(4)和膜支撐壁(2-1)隔開，膜支撐壁(2-1)之間為間隔槽(1)，外槽壁(7)與內(nèi)槽外壁(5)之間為冷卻室(6)，自來水出口(9-2)和自來水進口(9-1)分別與冷卻室(6)連接相通。
專利摘要一種等電點測定用電泳槽，屬于生物試驗設(shè)備技術(shù)領(lǐng)域。等電聚焦法的不足之處在于凝膠形成時間長，一般需要較長時間的通電過程，分離的樣品區(qū)帶往往被兩性載體所污染。該實用新型的技術(shù)方案為外槽壁7內(nèi)設(shè)置有兩列電極槽3，每列電極槽3共用一根鉑金絲電極10，鉑金絲電極10與接線柱8連接，每列電極槽3中的相鄰電極槽由內(nèi)槽外壁5、內(nèi)槽間隔壁4和膜支撐壁2－l隔開，膜支撐壁2－l之間為間隔槽1，外槽壁7與內(nèi)槽外壁5之間為冷卻室6，自來水出口9－2和自來水進口9－1分別與冷卻室6連接相通。它的優(yōu)點是本設(shè)計可用于氨基酸、核苷酸、多肽、蛋白質(zhì)和酶等多類兩性電解質(zhì)等電點的測定。
文檔編號G01N27/447GK2784927SQ20042000954
公開日2006年5月31日 申請日期2004年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月11日
發(fā)明者孫迅 申請人:菏澤學院