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一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法

文檔序號:5888169閱讀:255來源:國知局
專利名稱:一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法,屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy, PVR)是孔源性視網(wǎng)膜脫離復(fù)位手術(shù)失敗的主要原因,其發(fā)病機制是視網(wǎng)膜表面和玻璃體后面廣泛纖維增殖膜收縮、牽拉而引起視網(wǎng)膜脫離。其發(fā)生率為8%-10%,據(jù)臨床調(diào)查,無晶狀體眼PVR的發(fā)生率為11. 1%,再次手術(shù)后為19.5%,視網(wǎng)膜裂孔大,發(fā)生率較高,如裂孔大小在70° 90°范圍時發(fā)生率為23%;90° 180°為50%;大于180°,為73%。目前中醫(yī)治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的藥物較少,西醫(yī)則主要以手術(shù)和藥物治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變,且效果均不明顯,手術(shù)術(shù)后恢復(fù)差,且容易復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)后再次手術(shù),成功率更低,以往手術(shù)的次數(shù)越多手術(shù)效果會越差,西藥治療主要是依賴糖皮質(zhì)激素類藥物治療,該類藥物副作用較大。本發(fā)明所述ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑是由水蛭、三棱、山楂、昆布、海藻五味中藥組方,經(jīng)提取加工制成的復(fù)方中藥制劑,其功能主治為活血化瘀、軟堅散結(jié)、消積導(dǎo)滯,用于痰瘀互結(jié)所致的增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變,癥見視物昏朦,眼前黒影遮擋,甚或視物不見,神膏混濁,視衣僵硬,舌紫暗,苔白,脈弦澀的治療,其功重在活血化瘀,軟堅散結(jié),對增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變具有良好的治療作用,2010年8月11日中國專公報公開了 “ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥,公開號為CN 101797348A的專利申請,該發(fā)明所述中成藥的各味藥物原料的重量配比為水蛭62. 5-187. 5g、三棱187. 5562. 5g、山楂250-750g、昆布250-750g、海藻250_750g,經(jīng)檢索,目前尚無該中成藥的質(zhì)量檢測方法的報道和發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法,該質(zhì)量檢測方法穩(wěn)定可靠、操作簡便,且準(zhǔn)確度高。為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案I.本發(fā)明所述的ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法鑒別(I)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑4 40 ym,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝;或者表皮細(xì)胞呈棕黃色,細(xì)胞界限不明顯,布有暗棕色的色素顆粒,剛毛少見,常碎斷散在,淡棕色或黃棕色,直徑24 32 ii m,先端多鈍圓,有的表面可見縱裂紋;淀粉粒甚多,單粒類圓形、類多角形或橢圓形,直徑2 10 y m,較大粒隱約可見點狀或裂縫狀臍點,分泌細(xì)胞內(nèi)含紅棕色分泌物,纖維多成束,壁較厚,微木化或木化,有稀疏單斜紋孔,木化薄壁細(xì)胞呈類長方形、長橢圓形或不規(guī)則形,壁呈連珠狀,微木化;(2)取相當(dāng)于生藥材I. 6 4. 8g的該中藥制劑,研細(xì),加水25 75ml,浸泡數(shù)小吋,濾過,濾液濃縮至約5 15ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解;(3)取相當(dāng)于生藥材3. 2 24g的該中藥制 劑,研細(xì),加こ醇20 60ml,超聲處理20 35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材Ig,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5 15 y 1,分別點于同一娃膠G薄層板上,以環(huán)己燒-こ酸こ酯3 9 0. I 2為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點;(4)取相當(dāng)于生藥材3. 2 16g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇15 45ml,超聲處理20 35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各2 8 y 1,分別點于同娃膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 15 : 2 4為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光主斑點;(5)取山楂對照藥材lg,加水25 75ml,加熱回流30分鐘 2小時,濾過,濾液蒸至近干,殘渣趁熱加こ醇10 30ml,超聲處理20 35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各5 15 yl,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇甲酸15 20 : I 4 : 0. I 0.5為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點;含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氫銨溶液2 10 80 97為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ;對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含0. 8
2.Omg的溶液,即得;供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材3.2 9. 6g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水50 150ml,密塞,稱定重量,超聲處理10 35分鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心5 15分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液25 75ml,通過陰離子交換樹脂柱,用水25 75ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液60 180ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 15iU,注入液相色譜儀,測定,即得;相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于3 30mg ;上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。2.本發(fā)明所述的ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法
鑒別(I)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 y m,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝;(2)取相當(dāng)于生藥材3. 2g的該中藥制劑,研細(xì),加水50ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約10ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解;(3)取相當(dāng)于生藥材16g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇40ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10 U 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-こ酸こ酯6 I為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點;(4)取相當(dāng)于生藥材9. 6g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯10 3為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點;(5)取山楂對照藥材lg,加水50ml,加熱回流I小時,濾過,濾液蒸至近干,殘渣趁熱加こ醇20ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各lOul,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸18 2 0.2為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光主斑點;含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3.0的0.5%磷酸ニ氫銨溶液7 93為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ;對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含0. 8mg的溶液,即得;
供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材6. 4g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水100ml,密塞,稱定重量,超聲處理30分鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心10分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液50ml,通過717型陰離子交換樹脂柱,樹脂柱內(nèi)徑為I. 8cm、柱高為6cm,用水50ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液120ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 yl,注入液相色譜儀,測定,即得;相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于5mg ;上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。3.本發(fā)明所述的ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法鑒別(I)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 y m,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝;(2)取相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑,研細(xì),加水25ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約5ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解;(3)取相當(dāng)于生藥材3. 2g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇20ml,超聲處理35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-こ酸こ酯3 0. I為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點;(4)取相當(dāng)于生藥材3. 2g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇15ml,超聲處理35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各2 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 2為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點;(5)取山楂對照藥材lg,加水25ml,加熱回流2小時,濾過,濾液蒸至近干,殘渣趁熱加こ醇IOml,超聲處理35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各5 u 1,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸15 I 0. I為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光主斑點;含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氫銨溶液2 80為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ;對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含0. 8mg的溶液,即得;供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材3. 2g的該中藥制齊U,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水50ml,密塞,稱定重量,超聲處理35分鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心5分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液25ml,通過717型陰離子交換樹脂柱,樹脂柱內(nèi)徑為I. 8cm、柱高為6cm,用水25ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液60ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5iU,注入液相色譜儀,測定,即得;相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于3mg ;上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。4.本發(fā)明所述的ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法鑒別(I)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 y m,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝;(2)取相當(dāng)于生藥材4. Sg的該中藥制劑,研細(xì),加水75ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約15ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解;(3)取相當(dāng)于生藥材24g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇60ml,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各15 U 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-こ酸こ酯9 2為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點;(4)取相當(dāng)于生藥材16g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇45ml,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各8 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯15 4為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點;(5)取山楂對照藥材lg,加水75ml,加熱回流30分鐘,濾過,濾液蒸至近干,殘洛趁熱加こ醇30ml,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各15ul,分別點于同一娃膠GF254薄層板上,以三氯甲燒-甲醇-甲酸20 : 4 : 0.5為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相 同顏色的熒光主斑點;含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3.0的0.5%磷酸ニ氫銨溶液10 97為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ;對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含2mg的溶液,即得;供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材9. 6g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水150ml,密塞,稱定重量,超聲處理10分鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心15分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液75ml,通過717型陰離子交換樹脂柱,樹脂柱內(nèi)徑為I. 8cm、柱高為6cm,用水75ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液180ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15 yl,注入液相色譜儀,測定,即得;相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于30mg ;上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。本發(fā)明提供了一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的制劑的質(zhì)量檢測方法,該制劑處方中水蛭性平,味咸、苦,歸肝經(jīng)。功在破血通經(jīng),逐瘀消癥,消積導(dǎo)滯。用于血瘀經(jīng)閉,癥瘕痞塊之治療,為君藥。三棱性平,味辛、苦,歸肝、脾經(jīng)。具有破血行氣,消積止痛之功效;昆布、海藻均性寒,味咸,歸肝、胃、腎經(jīng)。具有消痰軟堅散結(jié),利水消腫之功效。“三棱能治一切凝結(jié)停滯有形之堅積也”,與昆布、海藻一道同為臣藥,以助君活血化瘀,并重點加強軟堅散結(jié)之力。山楂,味酸、甘,性微溫,具消食健胃,行氣散瘀,化濁降脂之功?!侗静菥V目》載“山楂化飲食,消肉積癥瘕,痰飲痞滿,吞酸,滯血痛脹”,《隨息居飲食譜》載“由楂醒脾氣,消肉食,破瘀血,散結(jié)消脹,解救化痰,除疳積,止瀉痢”。故為佐使藥。諸藥合用,具有破血行氣、活血化瘀、軟堅散結(jié)、消積導(dǎo)滯之功,從而消除瘀血、濁滯之邪。用于痰瘀互結(jié)所致的增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變,癥見視物昏朦,眼前黒影遮擋,甚或視物不見,神膏混濁,視衣僵硬等的治療。針對本處方所提供的質(zhì)量檢測方法可以有效的檢測出該制劑是否合格穩(wěn)定,確保了人們用藥的安全性和有效性。
具體實施例方式方法學(xué)考察實驗(I)樣品的制備取水蛭100g、三棱300g、山楂400g、昆布400g、海藻400g,將水蛭粉碎成極細(xì)粉,三棱150g粉碎成細(xì)粉,過篩,備用,剩余三棱與其余山楂等三味,加水煎煮三次,第一次加10倍量水,煎煮I. 5小時,第二、三次各加4倍量水,各煎煮I小時,合并煎液,濾過,濾液濃縮至溫度為80°C、相對密度為I. 10 I. 15的浸膏,噴霧干燥成細(xì)粉,與上述細(xì)粉、極細(xì)粉混勻,淀粉IOg制成漿,噴入上述混勻細(xì)粉中噴霧制粒,加入硬脂酸鎂5g,混勻,壓制成1000 片,包薄膜衣,即得化瘀散結(jié)片。(2)考察方法鑒別(I)取樣品,研細(xì),取約lg,加熱水洗滌至水洗液近無色,棄去洗液,取藥渣少許,置載玻片上,加水合氯醛于酒精燈上透化2 3次,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 y m,邊緣多不平整,有的局部膨大,此為方中水蛭的顯微鑒別特征。薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝。此為方中三棱的顯微鑒別特征。另取除去水蛭和三棱的空白樣品,取約lg,按上述方法制備,裝片,置顯微鏡下觀察均未檢出上述顯微鑒別特征。上述為方中水蛭、三棱的顯微鑒別。該方法簡便易行,各鑒別特征明顯易辨,空白無干擾,專屬性強,重復(fù)性好。(2)取樣品2片,除去包衣,研細(xì),加水50ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約10ml。取濃縮液ニ份各2ml,各加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,離心,棄去上清液,其中一份沉淀中加入氨試液數(shù)滴,振搖,沉淀極微溶解;另ー份加硝酸,振搖,沉淀不溶解。此為方中昆布、海藻的理化反應(yīng)鑒別。其反應(yīng)原理是,昆布、海藻中含有碘成分,碘在強酸性條件下轉(zhuǎn)化為碘離子,碘離子與硝酸銀試液中的銀離子結(jié)合生成碘化銀黃色沉淀,該沉淀在氨試液中極微溶解,在硝酸中不溶解。化學(xué)反應(yīng)式為r+Ag+HN°3 ^ AgI I (黃色)。另取除去昆布和海藻的空白樣
品約lg,按上述方法制備成空白供試液,依法鑒別,其不產(chǎn)生黃色乳狀沉淀。上述為方中昆布、海藻的理化反應(yīng)鑒別。該方法簡便易行,反應(yīng)靈敏,結(jié)果明顯易辨,空白無干擾,專屬性強,重復(fù)性好。(3)取樣品10片,除去包衣,研細(xì),加こ醇40ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液。另取水蛭對照藥材lg,按供試品溶液制法制成對照藥材溶液。再取除去水蛭的模擬處方,制成不含水蛭的空白樣品,按供試品溶液制法制成空白對照液。照薄層色譜法試驗,吸取上述三種溶液各lOul,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-こ酸こ酯(6 I)為展開系統(tǒng)A,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,分別置目光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的顔色主斑點和熒光主斑點。而空白對照液色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顔色的斑點或熒光斑點。再以三氯甲烷-甲醇(18 0.2)為展開系統(tǒng)B,展開,取出,晾干,紫外光燈(365nm)下,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點。再噴以2%香草醛硫酸溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,日光下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的主斑點。而空白對照液色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顔色的熒光斑點或斑點。對兩種展開劑系統(tǒng)進(jìn)行比較,其中展開效果以A系統(tǒng)較好,故選之。此為方中水蛭藥材的薄層色譜鑒別。該方法切實可行,分離效果好,斑點顯色清晰易辨,空白無干擾,專屬性強,重復(fù)性好。(4)取樣品6片,除去包衣,研細(xì),加こ醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干, 殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液。另取三棱對照藥材2g,按供試品溶液制法制成對照藥材溶液。再取除去三棱的模擬處方,制成不含三棱的空白樣品,按供試品溶液制法制成空白對照液。照薄層色譜法試驗,吸取上述三種溶液各5 yl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60 90°C)_こ酸こ酯(10 3)為展開系統(tǒng)A,取出,晾干,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點。而空白對照液色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顔色的熒光斑點。再以環(huán)己烷-こ酸こ酯(4 I)為展開系統(tǒng)B,其他條件同上。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,紫外光燈(365nm)下,顯相同顔色的熒光主斑點。而空白對照液色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顔色的熒光斑點。對兩種展開劑系統(tǒng)進(jìn)行比較,其中展開效果以A系統(tǒng)較好,故選之。此為方中三棱藥材的薄層色譜鑒別。該方法簡便易行,分離效果好,斑點顯色清晰易辨,空白無干擾,專屬性強,重復(fù)性好。(5)取鑒別(4)項下的供試品溶液作為供試品溶液。另取山楂對照藥材lg,加水50ml,加熱回流I小吋,濾過,濾液蒸至近干,殘渣趁熱加こ醇20ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液。再取除去山楂的模擬處方,制成小含山楂的空白樣品,按鑒別(4)項下的供試品溶液制法制成空白對照液。照薄層色譜法試驗,吸取上述三種溶液各10 yl,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(18 : 2 : 0.2)為展開系統(tǒng)A,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的主斑點。而空白對照液色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顔色的主斑點。再以こ酸こ酷-水-甲酸(8 I 0.1)上層溶液為展開系統(tǒng)B,以三氯甲烷-甲醇-甲酸(10 I 0. I)為展開系統(tǒng)C,分別進(jìn)行展開,其他條件同上。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,紫外光燈(254nm)下,分別顯相同顔色的主斑點。而空白對照液色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,均不顯相同顔色的主斑點。對三種展開劑系統(tǒng)進(jìn)行比較,其中展開效果以A系統(tǒng)較好,故選之。此為方中山楂藥材的薄層色譜鑒別。該方法簡便易行,分離效果好,斑點顯色清晰易辨,空白無干擾,專屬性強,重復(fù)性好。
(6)取樣品10片,研細(xì),加水60ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加水2ml使溶解,作為供試品溶液。另取海藻糖對照品2mg,加水2ml使溶解成每Iml含Img的溶液,作為對照品溶液。再取除去昆布、海藻的模擬處方,制成不含昆布、海藻的空白樣品,按供試品溶液制法制成不含昆布、海藻的空白對照溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述三種溶液各10 yl,分別點于同一以0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上,以正丁醇こ醇-水(2 : I : I)為展開劑,預(yù)飽和10分鐘后展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,于105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,背景色較重,圖譜斑點不明顯。而空白對照液色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,背景色亦較重,圖譜斑點不明顯。取樣量從10片增加到20片,仍出現(xiàn)相同的結(jié)果再取本品10片,研細(xì),加こ醚40ml,浸潰2小時,時時振搖,濾過,藥渣揮盡こ醚,加80%こ醇60ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加水2ml使溶解,作為供試品溶液。取上述海藻糖對照品溶液作為對照品溶液。再取上述不含昆布、海藻的空白樣品5g,按供試品溶液制法制成不含昆布、海藻的空白對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述三種溶液各10 yl,分別點于同一含0. IM磷酸氫ニ鈉的硅膠G薄層板上,以正丁醇異丙醇こ酸-水(3 20 3 2)為展開劑,預(yù)飽和10分鐘后展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,于105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,不顯相同顏色的斑點。而空白對照液色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,亦不顯相同顔色的斑點。上述兩種方法對昆布、海藻的海藻糖成分薄層色譜鑒別均未獲得成功。也未找到符合規(guī)定的昆布、海藻對照藥材,其薄層鑒別方面可參考的文獻(xiàn)資料較少,昆布、海藻的鑒別留待日后作進(jìn)ー步研究,故此項暫不列入質(zhì)量檢測方法中。含量測定水蛭為方中君藥,主含蛋白質(zhì),小分子肽類,糖蛋白,氨基酸,次黃嘌呤,磷脂。另含肝素,抗血栓素以及ー種組胺樣物質(zhì)。還含有28種微量元素?!吨袊幍洹匪嗡幉囊钥鼓富钚宰鳛樗幉馁|(zhì)量控制指標(biāo)。文獻(xiàn)報道,水蛭主要含量測定指標(biāo)成分為次黃嘌呤,其藥材含量分布在0. 1% 0. 18%之間。經(jīng)預(yù)實驗研究結(jié)果表明,水蛭空白樣品對抗凝血酶活性測定干擾較大,不宣作為成品的含量指標(biāo);次黃嘌呤的含量采用HPLC法進(jìn)行測定,因受處方中其它藥材干擾,專屬性不強,故不宜選其作為本品的含測指標(biāo)成分。三棱中的黃酮芒柄花素及皂苷類成分為其活血化瘀的主要成分,但因總黃酮含量太低(僅為0. 03% ),比色法測定效果差,誤差大,因此,亦不宜選作本品的含測指標(biāo)成分。昆布、海藻的定量測定指標(biāo)成分主要為碘和多糖,在復(fù)方制劑中采用滴定法和比色法因受干擾嚴(yán)重而難以測定。因而我們對本品中山楂的水溶性有機酸成分進(jìn)行定量測定的試驗研究。山楂中水溶性的有機酸成分主要有枸櫞酸、蘋果酸、山楂酸、琥珀酸、甲酸、草酸等,中國藥典規(guī)定以枸櫞酸計總酸含量為由楂的定量指標(biāo)成分,采用滴定法進(jìn)行測定,但在本復(fù)方制劑中,受其他成分和制劑顔色的干擾和影響而無法測定。我們結(jié)合自己的摸索實踐、探索研究,確定采用高效液相色譜(HPLC)法測定本品中枸櫞酸的含量。先進(jìn)的HPLC測定法具有取樣量少,測定結(jié)果準(zhǔn)確,可靠,精密度高,重復(fù)性好,專屬性強等特點。I.原理枸櫞酸為有機酸類,經(jīng)紫外測定在210nm處具有強吸收,可用紫外檢測器進(jìn)行檢測。而樣品中枸櫞酸與其他組分因分子結(jié)構(gòu)和特性的不同,經(jīng)HPLC水相柱層析后,其各保留時間不同而被分離,通過檢測峰面積積分值可進(jìn)行定量測定。
2.主要儀器與試劑Agilent 1100型高效液相色譜儀,G1314A型紫外檢測器,安捷倫科技公司出品;BP211D型電子分析天平,德國賽多利斯集團(tuán)公司出品;KQ250B型超聲波清洗器(功率250W,頻率40kHz),昆山市超聲儀器有限公司出品;800型離心機,鹽城市科學(xué)儀器廠出品;UV-1800型紫外可見分光光度計,日本島津公司出品。甲醇為色譜純,美國Honeywell出品;水為超純水,其它試劑均為分析純。3.供試樣品化瘀散結(jié)片,批號200711001、200711002、200711003。規(guī)格每片重0.5g。由西安碑林藥業(yè)股份有限公司中試生產(chǎn)提供。4.對照品來源及純度檢查枸櫞酸對照品(批號1000396-200301,供含量測定用,購自中國藥品生物制品檢定所)。經(jīng)HPLC歸ー化法測定含量為98. 65%。
5.測定波長的選擇取枸櫞酸對照品溶液,用紫外可見分光光度計,在190 400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描測定。掃描結(jié)果表明,枸櫞酸最大吸收波長在190nm處,為末端吸收,但在210nm波長下吸收亦較強,參照有關(guān)文獻(xiàn)資料,確定210nm處為檢測枸櫞酸的檢測波長。6.色譜條件色譜柱Agilent ZORBAX SB-Aq, 250 X 4. 6mm, 5 u m ;流動相甲醇-0.5%磷酸ニ氫銨溶液(用磷酸調(diào)pH3.0) (7 93),流速0.5ml/分;檢測波長為21Onm ;柱溫室溫。在此條件下,枸櫞酸色譜峰與其它組分均能達(dá)到基線分離,理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算不低于3000。7.色譜柱選擇取同一份樣品(批號200711001) 10片,研細(xì),取細(xì)粉約2g,精密稱定,按供試品溶液制法制成供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 u 1,按擬定的條件和方法,選用不同型號的色譜柱,分別注入液相色譜儀測定,計算,統(tǒng)計,結(jié)果請見表I。表I不同型號色譜柱枸櫞酸含量測定考察及結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法,其特征在于該質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法 鑒別 (1)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑4 .40 ym,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝; 或者表皮細(xì)胞呈棕黃色,細(xì)胞界限不明顯,布有暗棕色的色素顆粒,剛毛少見,常碎斷散在,淡棕色或黃棕色,直徑24 32 ii m,先端多鈍圓,有的表面可見縱裂紋;淀粉粒甚多,單粒類圓形、類多角形或橢圓形,直徑2 IOy m,較大粒隱約可見點狀或裂縫狀臍點,分泌細(xì)胞內(nèi)含紅棕色分泌物,纖維多成束,壁較厚,微木化或木化,有稀疏單斜紋孔,木化薄壁細(xì)胞呈類長方形、長橢圓形或不規(guī)則形,壁呈連珠狀,微木化; (2)取相當(dāng)于生藥材I.6 4. 8g的該中藥制劑,研細(xì),加水25 75ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約5 15ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解; (3)取相當(dāng)于生藥材3.2 24g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇20 60ml,超聲處理20 .35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同.法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5 15 y 1,分別點于同ー硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-こ酸こ酯3 9 0.1 2為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點; (4)取相當(dāng)于生藥材3.2 16g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇15 45ml,超聲處理20 35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各2 8 y 1,分別點于同硅膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 15 2 4為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點; (5)取山楂對照藥材lg,加水25 75ml,加熱回流30分鐘 2小時,濾過,濾液蒸至近干,殘渣趁熱加こ醇10 30ml,超聲處理20 35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各5 15 ii I,分別點于同一娃膠GF254薄層板上,以三氯甲燒-甲醇-甲酸15 .20 : I 4 : 0. I 0.5為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點; 含量測定方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氫銨溶液2 10 80 97為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ; 對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含0. 8 2. Omg的溶液,即得; 供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材3. 2 9. 6g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水50 150ml,密塞,稱定重量,超聲處理10 35分 鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心5 15 分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液25 75ml,通過陰離子交換樹脂柱,用水25 75ml 洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液60 180ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至 25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 15 y 1,注入液相色譜儀,測 定,即得;相當(dāng)于生藥材1. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H807)計,不得少于3 30mg ;上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的一種或幾種溶劑性質(zhì)與 之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開 劑替換,替換后展開作用相同;上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成, 采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。
2.如權(quán)利要求1所述的一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方 法,其特征在于該質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法鑒別(1)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 ym,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及 孔溝;(2)取相當(dāng)于生藥材3.2g的該中藥制劑,研細(xì),加水50ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮 至約10ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸1滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試 液中微溶解,在硝酸中不溶解;(3)取相當(dāng)于生藥材16g的該中藥制劑,研細(xì),加乙醇40ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾 液蒸干,殘渣加乙醇1ml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同法制成對照藥 材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各10 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以 環(huán)己烷-乙酸乙酯6 1為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105°C加 熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑 點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點;(4)取相當(dāng)于生藥材9.6g的該中藥制劑,研細(xì),加乙醇30ml,超聲處理30分鐘,濾過, 濾液蒸干,殘渣加乙醇1ml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照 藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上, 以60 90°C石油醚-乙酸乙酯10 3為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢 視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光主斑點;(5)取山楂對照藥材lg,加水50ml,加熱回流1小時,濾過,濾液蒸至近干,殘洛趁熱加 乙醇20ml,超聲處理30分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇1ml使溶解,作為對照藥材溶液, 照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各10 yl,分別點于同 一硅膠6F254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇甲酸18 2 0.2為展開劑,展開,取出,晾干, 置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光主斑點; 含量測定方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3. O的0. 5%磷酸ニ氫銨溶液7 93為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ; 對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量, 精密稱定,加水制成每Iml含0. 8mg的溶液,即得; 供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材6. 4g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水100ml,密塞,稱定重量,超聲處理30分鐘 ,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心10分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液50ml,通過717型陰離子交換樹脂柱,樹脂柱內(nèi)徑為I. 8cm、柱高為6cm,用水50ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液120ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得; 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOul,注入液相色譜儀,測定,SP得; 相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于5mg ; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。
3.如權(quán)利要求I所述的ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法,其特征在于該質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法 鑒別 (1)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 ym,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝; (2)取相當(dāng)于生藥材I.6g的該中藥制劑,研細(xì),加水25ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約5ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解; (3)取相當(dāng)于生藥材3.2g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇20ml,超聲處理35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5 yl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以壞己烷-こ酸こ酯3 0. I為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點; (4)取相當(dāng)于生藥材3.2g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇15ml,超聲處理35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各2 yl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯5 2為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點; (5)取山楂對照藥材Ig,加水25ml,加熱回流2小時,濾過,濾液蒸至近干,殘渣趁熱加こ醇10ml,超聲處理35分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各5 u 1,分別點于同ー硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸15 I 0. I為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點; 含量測定方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)PH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氫銨溶液2 80為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ; 對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含0. 8mg的溶液,即得; 供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材3. 2g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水50ml,密塞,稱定重量,超聲處理35分鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心5分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液25ml,通過717型陰離子交換樹脂柱,樹脂柱內(nèi)徑為I. 8cm、柱高為6cm,用水25ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液60ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得; 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 yl,注入液相色譜儀,測定,即得; 相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于3mg ; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。
4.如權(quán)利要求I所述的ー種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法,其特征在于該質(zhì)量檢測方法包括鑒別和含量測定方法 鑒別 (1)取該中藥制劑,置顯微鏡下觀察斜紋肌纖維多無色,散離或相互絞結(jié),直徑10 40 ym,邊緣多不平整,有的局部膨大;薄壁細(xì)胞呈類圓形或多角形、非木化,有稀疏紋孔及孔溝; (2)取相當(dāng)于生藥材4.8g的該中藥制劑,研細(xì),加水75ml,浸泡數(shù)小時,濾過,濾液濃縮至約15ml,取濃縮液2 3ml,加硝酸I滴與硝酸銀試液數(shù)滴,即生成黃色乳狀沉淀,在氨試液中微溶解,在硝酸中不溶解;(3)取相當(dāng)于生藥材24g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇60ml,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取水蛭對照藥材lg,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各15 yl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-こ酸こ酯9 2為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸こ醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的紫紅色主斑點;365nm紫外光燈下顯相同的橙紅色熒光主斑點; (4)取相當(dāng)于生藥材16g的該中藥制劑,研細(xì),加こ醇45ml,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為供試品溶液,另取三棱對照藥材2g,同法制成對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各8 u 1,分別點于同一硅膠G薄層板上,以60 90°C石油醚-こ酸こ酯15 4為展開劑,展開,取出,晾干,置365nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點; (5)取山楂對照藥材Ig,加水75ml,加熱回流30分鐘,濾過,濾液蒸至近干,殘洛趁熱加こ醇30ml,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加こ醇Iml使溶解,作為對照藥材溶液,照薄層色譜法試驗,吸取對照藥材溶液及三棱鑒別項下的供試品溶液各15 yl,分別點于同ー硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-甲酸20 4 0.5為展開劑,展開,取出,晾干,置254nm紫外光燈下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的熒光主斑點; 含量測定方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以烷基反相鍵合硅膠為填充劑的SB-Aq色譜柱;以甲醇用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0的0. 5%磷酸ニ氫銨溶液10 97為流動相;流速為每分鐘0. 5ml ;檢測波長為210nm ;理論板數(shù)按枸櫞酸峰計算應(yīng)不低于3000 ; 對照品溶液的制備取枸櫞酸對照品適量,精密稱定,加水制成每Iml含2mg的溶液,即得; 供試品溶液的制備將該中藥制劑研細(xì),取約相當(dāng)于生藥材9. 6g的該中藥制劑,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加水150ml,密塞,稱定重量,超聲處理10分鐘,功率為250W,頻率為40kHz,放冷,再稱定重量,用水補足減失的重量,搖勻,離心15分鐘,每分鐘4000轉(zhuǎn),精密吸取上清液75ml,通過717型陰離子交換樹脂柱,樹脂柱內(nèi)徑為I. 8cm、柱高為6cm,用水75ml洗脫,棄去洗脫液,繼用稀鹽酸溶液洗脫,收集洗脫液180ml,水浴濃縮至適量,轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中并用水稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得; 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各15 yl,注入液相色譜儀,測定,SP得; 相當(dāng)于生藥材I. 6g的該中藥制劑含山楂以枸櫞酸(C6H8O7)計,不得少于30mg ; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的提取溶劑可以被藥劑學(xué)上所述的ー種或幾種溶劑性質(zhì)與之相同的溶劑或混合溶劑替換,替換后提取作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的展開劑可以被藥劑學(xué)上所述的展開性質(zhì)與之相同的展開劑替換,替換后展開作用相同; 上述質(zhì)量檢測方法中所述的中藥制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布和海藻五味主藥組成,采用藥劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制成任何一種藥劑學(xué)上所述的劑型。全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的中藥制劑的質(zhì)量檢測方法,該制劑由水蛭、三棱、山楂、昆布、海藻五味中藥組方,經(jīng)提取加工制成復(fù)方中藥制劑,該制劑具有活血化瘀、軟堅散結(jié)、消積導(dǎo)滯的功能,用于痰瘀互結(jié)所致的增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變,癥見視物昏朦,眼前黑影遮擋,甚或視物不見,神膏混濁,視衣僵硬。本發(fā)明所提供的質(zhì)量檢測方法穩(wěn)定可靠、操作簡便,且準(zhǔn)確度高,對水蛭、三棱、昆布、海藻和山楂進(jìn)行了檢測,保證了藥品的安全性和有效性。
文檔編號G01N30/02GK102645510SQ20121014673
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月11日
發(fā)明者付彬, 張 浩, 耿小秀, 黃小華 申請人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司
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