專(zhuān)利名稱(chēng)：溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用生物敷料，具體涉及一種溶葡萄球菌復(fù)合酶(高科復(fù)合溶菌酶漱口水)殺菌紗布，目前，在臨床上使用的敷料，如醫(yī)用紗布，一般有以下幾種①普通型無(wú)菌紗布，常用作為包扎材料；②抗粘型紗布，由于經(jīng)過(guò)特殊處理，可防止傷口粘連，但無(wú)殺菌作用；③抗菌型紗布，因添加了抗生素，有一定的殺菌作用，但對(duì)一些大面積的傷口，殺菌作用差，并因長(zhǎng)期使用，易產(chǎn)生抗藥菌株。因此，臨床上尚無(wú)有效的殺菌紗布。
本發(fā)明的目的在于克服上述足之處，設(shè)計(jì)一種不易產(chǎn)生耐藥性，具有高效、廣譜殺菌作用的紗布。
本發(fā)明提供了一種溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布(溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布)，該紗布是由溶葡萄球菌復(fù)合酶及藥用輔料與紗布組成的，其中溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布原液為溶葡萄球菌酶(lysostaphin)0.008～0.01％和溶菌酶(lysozyme)10～20％；輔料為磷酸鉀7～15％、氯化鈉0.5～1％、抑菌肽2～3％和蒸餾水60～80％。
由于溶葡萄球菌復(fù)合酶中的一種成分溶葡萄球菌酶是一種革蘭氏陽(yáng)性菌的溶菌素。組成該類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性菌(例如金黃色葡萄球菌)細(xì)胞壁肽聚糖的四肽側(cè)鏈的氨基酸，依次為L(zhǎng)-丙氨酸，D-谷氨酸，L-賴(lài)氨酸，D-丙氨酸；而首位的L-丙氨酸通過(guò)一個(gè)酰胺鍵與胞壁酸相連，該聚糖鏈四肽側(cè)鏈第3位的L-賴(lài)氨酸，通過(guò)五肽(五個(gè)甘氨酸)交聯(lián)橋聯(lián)結(jié)到相鄰聚糖鏈四肽側(cè)鏈D-丙氨酸羧基上。由此縱橫交叉，左右聯(lián)結(jié)構(gòu)成十分堅(jiān)韌的三維立體多孔結(jié)構(gòu)，并聚合成較厚的肽聚糖層。溶葡萄球菌酶可切斷肽聚糖中的Gly-Gly鍵，而溶葡萄球菌復(fù)合酶中另一種生物酶可切斷N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之間的鍵，從而使殺菌活性更強(qiáng)，達(dá)到溶解并殺死細(xì)菌的目的，并可避免細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。
由于溶葡萄球菌復(fù)合酶獨(dú)特的殺菌機(jī)理，使其不同于一般抗生素，常用抗生素是抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，而該酶則是裂解細(xì)菌殺死細(xì)菌。上海市華山醫(yī)院抗生素研究所、第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院檢驗(yàn)科、上海市第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科、上海市第九人民醫(yī)院檢驗(yàn)科等單位曾將臨床各科收集到的400多株細(xì)菌進(jìn)行了溶葡萄球菌復(fù)合酶的抑殺菌實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明溶葡萄球菌復(fù)合酶對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌，如臨床上常見(jiàn)的金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、D群腸球菌、四聯(lián)球菌、產(chǎn)單核李斯特菌、鏈球菌以及胃幽門(mén)螺旋桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等均有明顯的抑殺作用。
實(shí)驗(yàn)還證明溶葡萄球菌酶對(duì)耐藥性菌株，如目前醫(yī)學(xué)臨床上最感棘手的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，耐藥性肺炎雙球菌、嗜麥芽窄食單孢菌的效果更優(yōu)于常用抗生素。
本發(fā)明的溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布，經(jīng)上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究院檢測(cè)毒性、皮膚刺激殺菌試驗(yàn)及穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果如下一、急性經(jīng)口毒試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康臋z測(cè)短時(shí)間經(jīng)口染毒時(shí)的毒性，其結(jié)果可作為毒性分級(jí)和確定亞慢性毒性等試驗(yàn)劑量的依據(jù)。(一)材料與方法1、受試樣品性狀白色紗布配制方法將樣品擠出液作為原液，取5g原蒸餾水至20ml，充分混勻后作為受試樣品。
2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，體重18-22克，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，合格證號(hào)02-22-1。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對(duì)濕度40-70％，動(dòng)物房合格證號(hào)02-28，小鼠飼養(yǎng)料，由蘇杭實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技發(fā)展公司提供。
3、劑量和分組將動(dòng)物分為雌雄各一組，每組10只，劑量為5g/kg體重。
4、試驗(yàn)步驟動(dòng)物禁食16小時(shí)后，根據(jù)不同體重，用灌胃針一次經(jīng)口灌服受試樣品，給樣容量按0.2ml/10g體重。觀察給樣后動(dòng)物的癥狀及死亡情況，觀察期為二周。
5、LD50計(jì)算方法用最大劑量限量法得出LD50，并確定急性經(jīng)口毒性分級(jí)。(三)試驗(yàn)結(jié)果；給樣后，動(dòng)物未見(jiàn)中毒癥狀和死亡。
受試樣品對(duì)小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物性別劑量動(dòng)物數(shù)死亡數(shù)死亡率(g/kg)(只) (只) (％)雌 510 0 0動(dòng)物性別 劑量 動(dòng)物數(shù)死亡數(shù)死亡率(g/kg)(只)(只) (％)雄 510 0 0LD50值雌性動(dòng)物L(fēng)D50＞5g/kg雄性動(dòng)物L(fēng)D50＞5g/kg(四)結(jié)論按急性經(jīng)口毒分級(jí)，屬實(shí)際無(wú)毒級(jí)。
二、皮膚刺激試驗(yàn)?zāi)康挠^察受試物對(duì)動(dòng)物一次接觸皮膚后可能產(chǎn)生的炎性反應(yīng)。
1、樣品性狀白色紗布2、受試樣品處理將樣品剪成2.5×2.5cm2小塊作為受試樣品。
3、受試動(dòng)物新西蘭種家兔，體重2.0-3.0kg，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，合格證號(hào)02-52-1。
4、測(cè)試依據(jù)消毒技術(shù)規(guī)范第三版(衛(wèi)生部1999.11)5、試驗(yàn)方法試驗(yàn)前將動(dòng)物背部?jī)蓚?cè)毛剪掉，去毛范圍左右各約3×3cm2，選左側(cè)完好皮膚劃出2.5×2.5cm2試驗(yàn)區(qū)，右側(cè)皮膚作對(duì)照。將受試樣品貼敷在試驗(yàn)區(qū)皮膚上，用一層油紙，膠布固定，貼敷4小時(shí)后，除去覆蓋物，用溫水清洗除去殘留物，并于除去受試樣品后1、24、48小時(shí)分別觀察皮膚反應(yīng)按消毒技術(shù)規(guī)范第三版(衛(wèi)生部1999.11)皮膚反應(yīng)積分和刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。
6、試驗(yàn)結(jié)果受試樣品對(duì)家兔皮膚刺激反應(yīng)積分表
7、結(jié)論試驗(yàn)結(jié)果表明受試物一次接觸動(dòng)物皮膚未引起皮膚刺激反應(yīng)，積分均值為0，按皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)屬無(wú)刺激性。
三、1、殺菌試驗(yàn)(1)對(duì)大腸桿菌(8099)的殺滅率不同作用時(shí)間(min)殺滅率％25 10 2099.9899.98100100注對(duì)照菌數(shù)為1.7×104cfu/片。(2)對(duì)金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)的殺滅率不同作用時(shí)間(min)殺滅率％25 10 2099.4799.96100 100注對(duì)照菌數(shù)為2.1×104cfu/片。(3)對(duì)白色念珠菌(ATCC 10231)的殺滅率不同作用時(shí)間(min)殺滅率％2 510 2099.20 99.92 100 100注對(duì)照菌數(shù)為2.0×104cfu/片。
2、穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品經(jīng)54℃水浴二周后，再次檢測(cè)其對(duì)大腸桿菌的殺滅情況不同作用時(shí)間(min)殺滅率％2 5 10 2099.94 99.42 100100注對(duì)照菌數(shù)為2.6×104cfu/片。中和劑試驗(yàn)中和劑3％吐溫-80+0.5％卵磷脂菌株大腸桿菌(8099)組別 殘留菌數(shù)(cfu/片)樣品染菌+中和劑 5.37×102染菌對(duì)照片+中和劑1.60×104樣片+中和劑+染菌對(duì)照片 1.41×104染菌對(duì)照片+PBS 1.60×104染菌樣片+PBS 0培養(yǎng)基對(duì)照 03、無(wú)菌試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo) 結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)值需氧菌 未檢出 不得檢出厭氧菌 未檢出 不得檢出霉菌 未檢出 不得檢出4、評(píng)價(jià)
該樣品經(jīng)檢測(cè)，作用2分鐘對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌均有殺菌作用；樣品經(jīng)54℃水浴二周后，再次檢測(cè)，作用2分鐘對(duì)大腸桿菌仍有殺菌作用；無(wú)菌試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果符合GB15980-1995。
本發(fā)明的另一目的是提供了上述溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布的制備方法，該方法是在無(wú)菌室中，按處方量將溶葡萄球菌酶(從美國(guó)Sigma公司購(gòu)買(mǎi))，溶菌酶，磷酸鉀，氯化鈉，按比例依次加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，輕輕攪拌，充分混和均勻后，再加入所示比例的抑菌肽和蒸餾水，充分混勻，即為原液。將無(wú)菌紗布置于原液中，浸透，靜置10分鐘，將紗布包裝于無(wú)菌塑本發(fā)明的溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布為含溶葡萄球菌酶和另一種溶菌酶、增效劑、穩(wěn)定劑輔酶復(fù)方新型殺菌紗布，作用物體表面2-10分鐘可迅速殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌等，殺滅率達(dá)99.9％。廣泛適用于燒傷及灼傷皮膚創(chuàng)口的敷貼和手術(shù)中的腹腔及腸道粘膜消毒等，具有對(duì)創(chuàng)口和粘膜無(wú)任何刺激，殺菌效果好使用方便等特點(diǎn)，有很高的臨床使用價(jià)值。
溶葡球菌復(fù)合酶殺菌紗布在使用過(guò)程中，由于其作用成分為酶制劑，是一類(lèi)蛋白質(zhì)，不會(huì)對(duì)皮膚產(chǎn)生任何刺激，溶葡球菌酶有一定的組織修復(fù)作用，可促進(jìn)傷口的愈合。因其作用機(jī)理是直接溶解細(xì)菌細(xì)胞壁而致細(xì)菌死亡，不易產(chǎn)生耐藥性菌株。又因該酶的殺菌活性高，又有促進(jìn)組織粘膜生長(zhǎng)的作用可減輕病人的痛苦。
實(shí)例1、每制造1片溶葡球菌復(fù)合酶殺菌紗布的配制方法(每片殺菌紗布需原液10克)。分別將溶葡萄球菌酶0.0008克，溶菌酶2克，磷酸鉀1.4克，氯化鈉0.1克，混勻再加入抑菌肽0.2克和蒸餾水6.3ml，混合均勻，放入一片無(wú)菌紗布靜置10分鐘，包裝封口。
實(shí)例2、分別將溶葡萄球菌酶0.00085克，溶菌酶1.5克，磷酸鉀6.3克，氯化鈉0.1克，混勻再加入抑菌肽0.2克和蒸餾水6.9ml，混合均勻，放入一片無(wú)菌紗布靜置10分鐘，包裝封口。
實(shí)例3、分別將溶葡萄球菌酶0.0009克，溶菌酶1.5克，磷酸鉀1.3克，氯化鈉0.1克，混勻再加入抑菌肽0.2克和蒸餾水6.9ml，混合均勻，放入一片無(wú)菌紗布靜置10分鐘，包裝封口。
權(quán)利要求
1.一種溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布，其特征在于該紗布是由溶葡球菌復(fù)合酶及藥用輔料與紗布組成的，其中溶葡球菌復(fù)合酶為溶葡萄球菌酶0.008～0.01％和溶菌酶10～20％；輔料為磷酸鉀7～15％、氯化鈉0.5～1％、抑菌肽2～3％和蒸餾水60～80％。
2.一種如權(quán)利要求1所述的溶葡球菌復(fù)合酶殺菌紗布的制備方法，其特征在于該方法是在無(wú)菌室中，按處方量將溶葡萄球菌酶，溶菌酶，磷酸鉀，氯化鈉，按比例依次加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，輕輕攪拌，充分混和均勻后，再加入所示比例的抑菌肽bacitracin和蒸餾水，充分混勻，即為原液，將無(wú)菌紗布置于原液中，浸透，靜置10分鐘，將紗布包裝于無(wú)菌塑料袋中，封口。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種溶葡萄球菌復(fù)合酶殺菌紗布。該紗布為含溶葡萄球菌酶和另一種溶菌酶的復(fù)方新型殺菌紗布,作用物體表面2～10分鐘可迅速殺滅大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌等,殺滅率達(dá)99.9%,并且對(duì)創(chuàng)口和粘膜無(wú)任何刺激,有很高的臨床使用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61L15/16GK1360949SQ0013720
公開(kāi)日2002年7月31日 申請(qǐng)日期2000年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月28日
發(fā)明者陸婉英 申請(qǐng)人:上海高科生物工程有限公司