專(zhuān)利名稱(chēng)：端粒酶抑制劑及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制端粒酶活性的噻唑烷酮類(lèi)化合物，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物及藥物組合物單獨(dú)或與其它藥物活性劑結(jié)合在治療由端粒酶介導(dǎo)的病癥或疾病如癌癥方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
端粒酶催化端粒的合成。端粒是特征性串聯(lián)重復(fù)(在哺乳動(dòng)物中為T(mén)TAGGG)，它們?cè)诖蠖鄶?shù)真核生物染色體的端部。它們?cè)谌说呐呒?xì)胞中可能長(zhǎng)達(dá)15-25千堿基。隨著每個(gè)細(xì)胞的分裂，大約有60-100個(gè)堿基從染色體的端部丟失，同時(shí)隨著端粒的變短，細(xì)胞最終到了危險(xiǎn)期且細(xì)胞程序性死亡被激發(fā)。參看Harley等人，(1991)突變研究256:271-282。端粒酶使端粒的長(zhǎng)度恰好保持在危險(xiǎn)水平之上，因此負(fù)責(zé)染色體的穩(wěn)定性并參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)。
端粒酶是一種核糖核蛋白反轉(zhuǎn)錄酶，它含有特有的用于端粒DNA合成的RNA模板。參看Blackbum,1992，生物化學(xué)年度評(píng)論，61:113-129。端粒酶出現(xiàn)在普通組織的干細(xì)胞和胚細(xì)胞中，且在85％以上的腫瘤中以更高含量存在(Kim等人，1994，科學(xué)，266:2011-2014)。由此，靶向端粒酶的藥物將會(huì)對(duì)腫瘤從正常組織中分離出去具有很高的選擇性。因此，已有人提出抑制端粒酶作為治療癌癥的新方法。
曾有報(bào)導(dǎo)，通過(guò)以端粒酶的RNA片段如肽核酸(Norton等人(1996)，自然生物技術(shù)，14:615-619)和硫代磷酸低聚核苷酸為目標(biāo)的反義方法來(lái)抑制端粒酶的活性。由于端粒酶是一個(gè)反轉(zhuǎn)錄酶，使用反轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑如AZT、以及其它核苷均有報(bào)導(dǎo)。通過(guò)可能由于端粒重復(fù)序列的交聯(lián)造成的順鉑抑制端粒酶的活性也有過(guò)報(bào)道(Burger等人，(1997)Eur.J.Cancer 33:638-644)。
噻唑烷二酮包括一組結(jié)構(gòu)相近的抗糖尿病化合物。這些化合物提高了耐胰島素動(dòng)物中靶組織(骨骼肌、肝、脂肪)的胰島素敏感性。除這些對(duì)于高血糖的影響外，噻唑烷二酮也降低了NIDDM動(dòng)物模型中脂肪和胰島素的水平。近來(lái)，噻唑烷二酮--曲格列酮顯現(xiàn)出對(duì)遭受葡萄糖耐受性損害的病人與遭受NIDDM的病人有相同的有益效果。這種葡萄糖耐受性損害是一種在NIDDM發(fā)展前產(chǎn)生的代謝病癥(Nolan等人，(1994)N.Eng.J.Med.331,1188-1193)。盡管噻唑烷二酮的作用機(jī)制還不清楚，但有一點(diǎn)是知道的，那就是它們不會(huì)增加胰島素分泌，或增大胰島素受體結(jié)合部位的數(shù)量或親和力，顯示出噻唑烷二酮擴(kuò)大了胰島素信號(hào)發(fā)生中的后受體事件(Colca,J.R和Morton,D.R.(1990)新抗糖尿病藥物(C.J.Bailey和P.RFlatt編輯)Smith-Gordon，紐約，255-261；Chang等人(1983)糖尿病32，839-845)。
噻唑烷酮被發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞系的有效誘因(Hiragun等人(1988)J.Cell Physiol.134,124-30；Sparks等人(1991)J.Cell.Physiol.146,101-109；Kleitzien等人(1992)Mol.Pharmacol.41,393-398)。此外，噻唑烷二酮與食欲控制紊亂(參看WO94/25026A1)及骨髓脂肪含量增加也有連帶關(guān)系。除此之外，噻唑烷二酮化合物被建議用于牛皮癬(第5,824,694號(hào)美國(guó)專(zhuān)利)、更年期綜合癥和間質(zhì)腫瘤(第5,814,647號(hào)美國(guó)專(zhuān)利)的治療。
我們已經(jīng)了解了對(duì)于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明方法有用的一些化合物，以及制造這些化合物的方法。例如，以下專(zhuān)利公開(kāi)了其中一些化合物WO91/07107；WO92/02520；WO94/01433；WO89/08651；JP Kokai69383/92；EP0155848；EP0193256；EP0295828；以及USP4,287,200；4,340,605；4,376,777；4,438,141；4,444,779；4,461,902；4,486,594；4,572,912；4,582,839；4,687,777；4,703,052；4,725,610；4,738,972；4,775,687；4,791,125；4,812,570；4,873,255；4,897,393；4,897,405；4,918,091；4,948,900；5,002,953；5,023,085；5,053,420；5,061,717；5,120,754；5,132,317；5,143,928；5,194,443；5,223,522；5,232,925；5,252,735；5,260,445；5,814,647；5,824,694；和5,874,454。
識(shí)別這些抑制端粒酶活性的化合物對(duì)于人類(lèi)疾病的治療有著非常重要的益處。抑制端粒酶的化合物可用于治療端粒酶介導(dǎo)的疾病，如癌癥，這是因?yàn)榘┘?xì)胞表達(dá)端粒酶活性，而正常人體細(xì)胞在生物相關(guān)水平(即，維持細(xì)胞分裂后端粒長(zhǎng)度的足夠水平)不具有端粒酶活性。不幸的是，僅有很少的化合物被識(shí)別和表征，尤其是那些有高潛力或活性且可口服的生物可利用的化合物。因此，仍有對(duì)作為端粒酶抑制劑的有高潛力或活性的口服性生物可利用化合物的需要，以及對(duì)治療癌癥及其它端粒酶活性異常疾病的藥物組合物和方法的需要。本發(fā)明滿(mǎn)足這些及其它的需要。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一些方法、化合物及組合物，其通過(guò)靶向有端粒酶活性細(xì)胞而對(duì)于治療端粒酶介導(dǎo)的疾病，如惡性病癥，有著特異且有效的作用。本發(fā)明的這些方法、化合物及組合物可被用于廣譜惡性細(xì)胞類(lèi)型，以及避免目前癌癥治療模式不具有特異性且有極大毒性的問(wèn)題。
本發(fā)明的第一方面以下發(fā)現(xiàn)某些已知的噻唑烷酮化合物以及在此揭示的新噻唑烷酮衍生物對(duì)于在體外、ex vivo和體內(nèi)抑制端粒酶活性是有效的。因此，在某些方面，本發(fā)明提供了通過(guò)使端粒酶接觸在此描述的化合物來(lái)抑制端粒酶的方法。在具體的實(shí)施例中，要被抑制的端粒酶是哺乳動(dòng)物的端粒酶，如人的端粒酶。本發(fā)明的一個(gè)相關(guān)的方面是發(fā)現(xiàn)噻唑烷酮化合物抑制具有端粒酶活性的細(xì)胞，如許多癌細(xì)胞的增殖。因此，本發(fā)明的這方面提供抑制患有端粒酶介導(dǎo)之病癥或疾病的病人、優(yōu)選哺乳動(dòng)物中端粒酶活性的方法，其包括向病人給藥治療有效量的抑制端粒酶的噻唑烷酮化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一方面提供抑制端粒酶的方法、化合物和藥物組合物，包括使端粒酶接觸具有下式(Ⅰ)的藥物組合物或化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽 其中X是氧或硫， 是一個(gè)單鍵或雙鍵；A是芳基或雜芳基；R1是氫或低級(jí)烷基；R2、R3和R4獨(dú)立地從以下組中選擇氫、鹵素、烷基、芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、氰基、硝基、烷基脲基、芳香基脲基、二烷基脲基、二芳基脲基、烷基芳基脲基、烷基硫脲基、芳基硫脲基、二烷基硫脲基、二芳基硫脲基、烷基芳基硫脲基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、芳基烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、二烷基氨基羰基、二芳基氨基羰基、芳基烷基氨基羰基、烷羰氧基、芳羰氧基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、磺基、烷磺酰氨基、芳磺酰氨基、烷基磺酰基、芳基磺?；?、烷基亞硫?；?、芳基亞硫?；碗s芳基；L是一個(gè)直接的鍵或一個(gè)連接基團(tuán)，其具有1-3個(gè)原子，并獨(dú)立地選自于非取代或取代的碳、氮、氧或硫；以及n等于1或2。
本發(fā)明的再一方面提供了抑制端粒酶的方法、化合物和組合物，包括使端粒酶接觸具有式(Ⅳ)的化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽 其中X是O或S； 是一個(gè)單鍵或雙鍵；R5是H或低級(jí)烷基；以及Ar是取代或非取代的芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、芳基鏈烯基、雜芳基鏈烯基、芳基炔基或雜芳基炔基。
本發(fā)明的另一方面提供了抑制端粒酶的方法、化合物和組合物，包括使端粒酶接觸具有式(Ⅴ)的組合物或化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽 其中X是O或S；R6是H或低級(jí)烷基；W是CH=CH、S或-N=C-；R7是OH、鹵素、巰基、硝基、氰基、低級(jí)烷硫基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷酰氧基、NR11R12(其中R11和R12獨(dú)立地選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷?；?、芳基、雜芳基、雜芳烷基、或R11和R12形成取代或非取代雜環(huán))、CO2R13(其中R13選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、芳烷基和雜芳烷基)、CONR11R12、取代或非取代芳基、取代或非取代雜芳基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、低級(jí)烷?；?、芳酰基、低級(jí)鏈烯基、芳硫基或低級(jí)炔基；而且當(dāng)W代表S,R7也可以是氫；L是O、S、SO、SO2、OCH2、SCH2、SOCH2、SO2CH2或N(R10)(CH2)m(其中R10是取代或非取代芳基、雜芳基、芳烷基、或雜芳烷基，m是0或1)、(CH2)N(R10)(CH2)m或CR13R14(其中R13和R14獨(dú)立地選自于以下組中氫、羥基、芳基和雜芳基)；以及A1是以下式(A1)的環(huán)烷基 其中Z1到Z5獨(dú)立選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)烷酰氧基、巰基、烷硫基、NR11R12、硝基、氰基、CO2R13、CONR11R12、芳基、雜芳基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、鹵素和低級(jí)烷?；?；其條件是當(dāng)W是CH=CH時(shí)，A也可以是吡啶基。
本發(fā)明的新化合物作為有害的端粒酶的活性抑制劑有著許多有價(jià)值的應(yīng)用，例如在哺乳動(dòng)物如人中治療癌癥。本發(fā)明的藥物組合物可被用于在體內(nèi)殺死癌細(xì)胞或被用于ex vivo殺死癌細(xì)胞。因此，本發(fā)明提供在人和其它哺乳動(dòng)物(如，牛、馬、羊、鹿、豬和獸醫(yī)們關(guān)注的貓和狗)中治療癌癥的化合物和組合物，以及治療癌癥和其它由端粒酶介導(dǎo)的病癥或疾病。詳細(xì)描述Ⅰ、定義除非下面另外定義，此處使用的術(shù)語(yǔ)具有通常被接受的科學(xué)意義。標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)術(shù)語(yǔ)的定義可在參考書(shū)中找到，包括Carey和Sundberg(1992)“高級(jí)有機(jī)化學(xué)第三版”第A和B卷，Plenum出版社，紐約。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“噻唑烷酮”或“噻唑烷酮衍生物”具有下列結(jié)構(gòu)通式 其中X是O或S。當(dāng)X是O，衍生物為噻唑烷二酮衍生物。當(dāng)X是S，衍生物是噻唑烷酮硫酮衍生物，同時(shí)也被叫做繞丹寧(參看下面實(shí)施例25-28)。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是一個(gè)直的、支鏈的或環(huán)狀的烴鏈片段或原子團(tuán)，包含1至約20個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至約10個(gè)碳原子(例如，甲基、乙基、正丙基、異丙基、環(huán)丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、環(huán)丁基、金剛烷基、noradamantyl、等等)。含8個(gè)或更少的碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴鏈在此也叫作“低級(jí)烷基”。烴鏈可進(jìn)一步包括一個(gè)或更多個(gè)不飽和鍵，即、一個(gè)或更多個(gè)雙或三鍵(例如，乙烯基、炔丙基、烯丙基、2-丁烯-1-基、2-環(huán)戊烯-1-基、1,3-環(huán)己二烯-1-基、3-環(huán)己烯-1-基、等等)。含雙鍵的烷基基團(tuán)例如剛提到的也叫作“烯”。同樣，含三鍵的烷基基團(tuán)也叫作“炔”。但是，對(duì)于環(huán)烷基基團(tuán)，雙鍵和/或三鍵的組合不包括那些使環(huán)狀烴鏈具有芳香性的鍵聯(lián)設(shè)置。
此外，在此使用的“烷基”進(jìn)一步包括在烴片段或環(huán)中的一個(gè)或更多的碳原子中的一個(gè)或更多的取代。這些取代包括但不限于芳基；雜芳基；鹵素(例如形成三氟甲基，-CF3)；硝基(-NO2)；氰基(-CN)；羥基；烷氧基或芳氧基(-OR)；硫基或巰基，烷基硫基或芳硫基(-SR)；氨基，烷基氨基，芳基氨基，二烷基或二芳基氨基，或芳基烷基氨基(-NRR′)；氨基羰基，烷氨基羰基，芳氨基羰基，二烷基氨基羰基，二芳基氨基羰基或芳基烷基氨基羰基(-C(O)NRR′)；羧基，或烷基-或芳基氧基羰基(-C(O)OR)；甲醛基(carboxaldehyde)，芳基羰基或烷基羰基(-C(O)R)；亞氨基(iminyl)，芳基亞氨基或烷基亞氨基(-C(=NR)R')；磺基(-SO2OR)；烷基磺?；蚍蓟酋；?-SO2R)；脲基(-HNC(=O)NRR′)；硫代脲基(-HNC(=S)NRR′)；其中，R和R′獨(dú)立地為氫、芳基、或烷基。包括取代基的雜環(huán)基團(tuán)(如雜環(huán)、雜芳基和雜芳烷基)類(lèi)似于上面描述的術(shù)語(yǔ)被限定。例如，術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)氧基”指-OR，其中R是如下所定義的雜環(huán)。
“低級(jí)烷?；?、“低級(jí)烷氧基”、“低級(jí)烷酰氧基”、“低級(jí)烷硫基”的烷基部分同上面定義的“烷基”相同。
術(shù)語(yǔ)“亞甲基”指-CH2-。
術(shù)語(yǔ)“次甲基”指亞甲基中的一個(gè)氫原子被如上面所描述的取代基替代。術(shù)語(yǔ)“次甲基”也可以指亞甲基中的一個(gè)氫原子被化合鍵替代以形成sp2-雜化碳中心(即＞C=O)。
術(shù)語(yǔ)“鹵”或“鹵素”指取代基氟、溴、氯和碘。
術(shù)語(yǔ)“羰基”指管能團(tuán)-(CO)-。但是，它可被具有類(lèi)似電子和/或結(jié)構(gòu)特性的已知基團(tuán)代替，例如硫代羰基(-C(S)-)、亞硫?；?-S(O)-)、磺?；?-SO2-)、膦?；?-PO2-)、和亞甲基(-C(=CH2)-)。其它羰基的等同基團(tuán)為醫(yī)藥和有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指具有20或更少碳原子的環(huán)芳香烴鏈，例如苯基、萘基、聯(lián)苯基和蒽基。芳基基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)碳原子也可以被取代，例如烷基；芳基；雜環(huán)；甲?；?；鹵素；硝基；氰基；羥基；烷氧基或芳氧基；硫或巰基、烷基硫基或芳基硫基；氨基、烷基氨基、芳基氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、或芳基烷基氨基；氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、二烷基氨基羰基、二芳基氨基羰基、或芳基烷基氨基羰基；羧基、烷氧基羰基或芳氧基羰基；甲醛基，芳基羰基或烷基羰基；亞氨基、芳基亞氨基或烷基亞氨基；磺基；烷基磺酰基或芳基磺?；?；羥基亞氨基、芳氧基亞氨基或烷氧基亞氨基；脲基；或硫脲基。此外，芳基基團(tuán)的兩個(gè)或更多的烷基或雜烷基取代基可以結(jié)合起來(lái)構(gòu)成稠合芳基-烷基或芳基-雜烷基環(huán)(如四氫萘基)。包括取代基的雜環(huán)基團(tuán)(例如雜環(huán)氧基、雜芳氧基和雜芳烷基硫基)按照類(lèi)似上面所描述的定義。
術(shù)語(yǔ)“芳烷基”指通過(guò)一個(gè)上面描述的烷基基團(tuán)連接到母體結(jié)構(gòu)上的芳基基團(tuán)，如芐基、α-甲基芐基、苯乙基、等等?！胺纪榛酋；狈纪檠趸械姆纪榛糠滞鲜觥胺纪榛倍x相同。
術(shù)語(yǔ)“芳?；薄ⅰ胺蓟溝┗?、“芳基磺?；?、“芳基硫基”、“芳氧基”、“芳基鏈烯基磺?；?、“芳基炔基磺?；敝械姆蓟糠峙c上述“芳基”定義相同。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”指上面定義的環(huán)烷基基團(tuán)或芳基基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子被非碳原子取代，特別是氮、氧、或硫。非芳香雜環(huán)也指“環(huán)雜烷基”。芳香雜環(huán)也指“雜芳基”。例如，這樣的基團(tuán)包括呋喃基、四氫呋喃基、吡咯基、吡咯烷基、噻吩基、四氫噻吩基、惡唑基、異惡唑基、三唑基、噻唑基、異噻唑基、吡唑基、吡唑烷基、惡二唑基、噻二唑基、咪唑基、咪唑啉基、吡啶基、噠嗪基、三嗪基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡嗪基、哌嗪基、嘧啶基、1,5-二氮雜萘基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、二氫吲哚基、中氮茚基、吲唑基、喹嗪基、喹啉基、異喹啉基、噌啉基、2,3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、喋啶基、奎寧環(huán)基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩惡嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、和苯并惡唑基。
“雜芳烷基”、“雜鏈烯基”、“雜芳炔基”、“雜芳磺?；薄ⅰ半s芳烷基磺?；?、“雜芳鏈烯基磺酰基”、“雜芳炔基磺?；?、“雜芳氧基”和“雜芳烷氧基”的雜芳基部分與上述“雜芳基”定義相同。
上述雜環(huán)基團(tuán)可進(jìn)一步在雜芳基的一個(gè)或多個(gè)碳和/或非碳原子處包括一個(gè)或多個(gè)取代基，例如烷基；芳基；雜環(huán)；甲酰基；鹵素；硝基；氰基；羥基；烷氧基或芳氧基；硫或巰基、烷基硫基或芳基硫基；氨基、烷基氨基、芳基氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、或芳基烷基氨基；氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、二烷基氨基羰基、二芳基氨基羰基、或芳基烷基氨基羰基；羧基、烷氧基羰基或芳氧基羰基；甲醛基，芳基羰基或烷基羰基；亞氨基、芳基亞氨基或烷基亞氨基；磺基；烷基磺?；蚍蓟酋；?；羥基亞氨基、芳氧基亞氨基或烷氧基亞氨基；脲基；或硫脲基。此外，兩個(gè)或更多的烷基取代基可以結(jié)合起來(lái)構(gòu)成稠合雜環(huán)-烷基或雜環(huán)-芳基環(huán)。包括取代基的雜環(huán)基團(tuán)(例如雜環(huán)氧基、雜芳氧基和雜芳烷基硫基)按照類(lèi)似上面所描述的定義。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)烷基”是指通過(guò)一個(gè)或多個(gè)上述烷基基團(tuán)結(jié)合到母體結(jié)構(gòu)上的雜環(huán)基團(tuán)，例如2-哌啶基甲基等。在此使用的術(shù)語(yǔ)“雜芳烷基”指通過(guò)一個(gè)或多個(gè)上述烷基基團(tuán)與母體結(jié)構(gòu)連接的雜芳基，如2-噻吩甲基等。
本發(fā)明的化合物可用來(lái)抑制或降低端粒酶活性和/或具有端粒酶活性的細(xì)胞的增殖。在這里，這些酶或細(xì)胞增殖的抑制和降低是指相對(duì)于對(duì)照實(shí)驗(yàn)有更低水平的活性。對(duì)照實(shí)驗(yàn)中酶和細(xì)胞沒(méi)有用測(cè)試化合物處理。在特定的實(shí)施例中，該被測(cè)活性至少被抑制或降低了10％。對(duì)于本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員，具體的應(yīng)用中被測(cè)活性至少被抑制或降低20％、50％、75％、90％或100％是優(yōu)選的。Ⅱ、端粒酶抑制劑如上所述，細(xì)胞的不死性涉及端粒酶的激活。更具體地說(shuō)，端粒酶活性與許多腫瘤細(xì)胞系保持不死的能力之間的聯(lián)系已通過(guò)端粒酶活性的分析得以證實(shí)(Kim等人)，這些細(xì)胞系包括皮膚、結(jié)締組織、脂肪、乳腺、肺、胃、胰、卵巢、子宮頸、子宮、腎、膀胱、結(jié)腸、前列腺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)、視網(wǎng)膜和血癌細(xì)胞系。表明端粒長(zhǎng)度縮短的數(shù)據(jù)以及本分析可以提供給正常細(xì)胞復(fù)制衰老的信號(hào)(參看WO93/23572)，顯示出抑制端粒酶活性可以是一種有效的抗癌療法。“抑制作用”簡(jiǎn)單地說(shuō)就是一種能在體內(nèi)或體外降低端粒酶活性的藥劑、藥物或化學(xué)藥品。這些抑制劑用標(biāo)準(zhǔn)篩選方法能很容易地被辯別，其中細(xì)胞提取物或其它有端粒酶活性的制劑與潛在的抑制劑相接觸，然后在有和沒(méi)有抑制劑、或抑制劑量變化的情況下測(cè)定端粒酶活性的水平。通過(guò)這種方法，不僅有用的抑制劑被識(shí)別出，此種抑制劑的優(yōu)選水平也能在體外被測(cè)定，但是在體內(nèi)有待于進(jìn)一步測(cè)定。
在一相關(guān)的方面，本發(fā)明提供一種抑制細(xì)胞增殖或復(fù)制能力的方法。在這種方法中，在細(xì)胞復(fù)制過(guò)程期間，提供本發(fā)明的一種或多種能抑制端粒酶活性的噻唑烷酮化合物。如上所述，端粒酶對(duì)于線(xiàn)形染色體DNA的端部完全復(fù)制而不丟失每條鏈5′端的末端堿基起著關(guān)鍵的作用。不死的細(xì)胞和快速增殖的細(xì)胞用端粒酶在染色體末端加上端粒DNA重復(fù)。端粒酶的抑制作用會(huì)導(dǎo)致增殖的細(xì)胞不能增加端粒，且它們將最終停止分裂。對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，這種抑制細(xì)胞增殖能力的方法對(duì)于治療與細(xì)胞增殖率上升有關(guān)的病癥是非常有效的，例如癌癥(惡性細(xì)胞中端粒酶活性)、以及紅細(xì)胞生成(紅細(xì)胞生成的干細(xì)胞中端粒酶活性)。
因此在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供防止或治療許多類(lèi)型癌癥的組合物和化合物。特別是，正如在不同的人腫瘤細(xì)胞系和有端粒酶活性的腫瘤中所顯示的，本發(fā)明的化合物可以提供一種普遍的治療許多癌的方法。更重要地，本發(fā)明的噻唑烷酮化合物可以在很大程度上有效地區(qū)分惡性和正常的細(xì)胞，同時(shí)避免了目前化學(xué)療法中存在的用藥劑不加區(qū)分地殺死分裂細(xì)胞的許多有害的副作用。代表性的噻唑烷酮化合物包括glitazones，例如曲格列酮(也叫作CS-045(Sankyo)和CI-991(Park-Davis))、吡格列酮(也叫作AD-4833和U-72107E)、rosiglitazone(也叫作BRL49653)、恩格列酮(也叫作CP-68,722)、和環(huán)格列酮。
在另一方面，本發(fā)明提供了抑制端粒酶活性的新的化合物，有關(guān)新化合物或其藥物學(xué)上可接受的性鹽的藥物組合物和方法，包括使端粒酶接觸具有式(Ⅰ)的化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽 其中X是氧或硫， 是一個(gè)單鍵或雙鍵；A是芳基或雜芳基；R1是氫或低級(jí)烷基；R2、R3和R4獨(dú)立地從以下組中選擇氫、鹵素、烷基、芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、氰基、硝基、烷基脲基、芳香基脲基、二烷基脲基、二芳基脲基、烷基芳基脲基、烷基硫脲基、芳基硫脲基、二烷基硫脲基、二芳基硫脲基、烷基芳基硫脲基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、芳基烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、二烷基氨基羰基、二芳基氨基羰基、芳基烷基氨基羰基、烷羰氧基、芳羰氧基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、磺基、烷磺酰氨基、芳磺酰氨基、烷基磺酰基、芳基磺?；?、烷基亞硫?；?、芳基亞硫?；碗s芳基；L是一個(gè)直接的鍵或一個(gè)連接基團(tuán)，其具有1-3個(gè)原子，并獨(dú)立地選自于非取代或取代的碳、氮、氧或硫；以及n等于1或2。
在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的新的化合物具有式Ⅱ所示的一般結(jié)構(gòu) 和其藥物學(xué)上可接受的鹽，其中X是O或S，且R2、R3、R4、L和n如上所限定。
在式Ⅰ的化合物中，A可以是芳基，以形成例如苯環(huán)部分?；蛘?，A可以是雜芳基，如吡啶、喹啉、異喹啉、噻吩、呋喃、咪唑、苯并咪唑和吡唑等。優(yōu)選的實(shí)施方案中，A是苯基，如式(Ⅱ)。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)n是1,R1不可以是氫。在仍?xún)?yōu)選的實(shí)施方案中，R2和R3中至少有一個(gè)不是氫。在其它特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2和R3中至少有一個(gè)為鹵素，最優(yōu)選的是，R2和R3都是鹵素以形成雙鹵素取代的苯環(huán)部分。
如上所述，L可以是一個(gè)直接的鍵，或者是1-3個(gè)原子的連接基團(tuán)，其中連接基團(tuán)的原子獨(dú)立地選自于非取代或取代的碳、氮、氧或硫。本發(fā)明化合物有用的代表性的連接基團(tuán)包括例如-O-、-S-、-NH-、-CH2-、-OCH2-、-OC(O)-、-CO2-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-OC(O)CH2-、-OC(O)NH-和-NHC(O)NH-。
代表化合物包括但不限于5-(2-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(3-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯苯甲酰氨基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(3-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(N-3,4-二氯苯基氨甲酰氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(3-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(3-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(3,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(4-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2,5-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮、5-(2-(3,4-二氯芐硫基)-3H-嘧啶-4-酮-6-基次甲基)繞丹寧、5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧、5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧、5-(3-氰基-2-(3,4-二氯芐硫基)吡啶-6-基次甲基)噻唑烷-2,4-二酮、以及5-(3-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的新化合物具有以下式Ⅲ所示的結(jié)構(gòu) 以及它們的藥物學(xué)上可接受的鹽，其中X是氧或硫，R1、R2、R3、R4和L如上所限定。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制端粒酶的方法、化合物和組合物，包括使端粒酶接觸具有式(Ⅳ)的化合物或其藥物學(xué)上可接受的鹽 其中X是氧或硫； 是單鍵或雙鍵；R5是氫或低級(jí)烷基；以及Ar是取代或非取代芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、芳基鏈烯基、雜芳基鏈烯基、芳基炔基或雜芳基炔基。
具有雙鍵的式(Ⅳ)化合物可以通過(guò)噻唑烷衍生物與芳香族羰基化合物反應(yīng)來(lái)得到。該反應(yīng)可選擇地在堿性催化劑以及溶劑中進(jìn)行。堿性催化劑的用量通常在大約0.1到1當(dāng)量，且可以是哌啶、哌啶嗡乙酸鹽、二乙胺、吡啶、乙酸鈉、碳酸鉀、碳酸鈉及類(lèi)似物。溶劑可以是醇類(lèi)，如甲醇、乙醇、丙醇等，醚類(lèi)，如乙醚、四氫呋喃、二惡烷等，或碳?xì)浠衔铮绫?、甲苯、二甲苯等，和它們的混合物。反?yīng)在室溫到大約200℃內(nèi)進(jìn)行，優(yōu)選在50-100℃，且在約1小時(shí)至約50小時(shí)內(nèi)完成。式(Ⅳ)的化合物中 為單鍵時(shí)，它可通過(guò)還原上述化合物的雙鍵形成。通常，氫化反應(yīng)需要貴金屬催化劑，如鈀、鉑、銠等，這些是本領(lǐng)域所公知的。
在另一方面，本發(fā)明提供抑制端粒酶的方法、化合物和藥物組合物，包括使端粒酶接觸具有式(Ⅴ)的化合物或其可接受的鹽 其中，X為氧或硫；R6為氫或低級(jí)烷基；W為CH=CH、S、或-N=C-；R7為H、OH、鹵素、巰基、硝基、氰基、低級(jí)烷硫基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷酰氧基、NR11R12(其中R11和R12獨(dú)立地選自于以下組中氫、低級(jí)烷?；⒎蓟?、雜芳基、雜芳烷基，或者R11和R12形成取代和非取代的雜環(huán))、CO2R13(其中R13選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、芳烷基、和雜芳烷基)、CONR11R12、取代或非取代芳基、取代或非取代雜芳基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、低級(jí)烷?；⒎减；?、低級(jí)鏈烯基、芳硫基或低級(jí)炔基；L為O、S、SO、SO2、OCH2、SCH2、SOCH2、SO2CH2或N(R10)(CH2)m(其中R10為取代或非取代芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基，且m為0或1)、(CH2)N(R10)(CH2)m或者CR13R14(其中R13和R14獨(dú)立地選自于以下組中氫、羥基、芳基、雜芳基)；以及A1為具有式(A1)的環(huán)芳烷基 其中，Z1到Z5獨(dú)立地選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)烷酰氧基、巰基、烷硫基、NR11R12、硝基、氰基、CO2R13、CONR11R12、芳基、雜芳基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、鹵素和低級(jí)烷酰氧基，其條件是，當(dāng)W為CH=CH時(shí)，A1可以為吡啶基。
式Ⅰ到Ⅴ代表的本發(fā)明化合物的例子在表1到表6顯示，但本發(fā)明的化合物不限制于此。
表1
表2
p-Tol:4-甲基苯基表3
表4
表5
表5(續(xù))
表5(續(xù))
表5(續(xù))
表6
Ⅲ、端粒酶抑制劑的合成本發(fā)明的化合物可以采用本領(lǐng)域所熟知的技術(shù)和材料合成，例如，高級(jí)有機(jī)化學(xué)第四版(Wiley1992)；Carey和Sundberg，高級(jí)有機(jī)化學(xué)第三版，第A和B卷(Plenum1992)；以及Green和Wuts，有機(jī)合成中的保護(hù)基第二版(Wiley1991)。本發(fā)明化合物的起始物可通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和市場(chǎng)上可買(mǎi)得到的前體原料來(lái)制備，如可從Aldrich Chemical Co.(Milwaukee,Wis.),Sigma Chemical Co.(St.Louis,Mo.),Lancaster Synthesis(Windham,N.H.),Apin Chemicals,Ltd.(New Brunswick,N.J.),Ryan Scientific(Columbia,S.C.),Maybridge(Cornwall,England),Arcos(Pittsburgh,Pa.)，和Trans WorldChemicals(Rockville,Md.)得到。
在此描述的合成本發(fā)明化合物的過(guò)程可能包括一步或多步保護(hù)和去保護(hù)過(guò)程(如縮醛基的形成和脫除)。此外，以下公開(kāi)的合成過(guò)程可能包括不同的提純方法，例如柱色譜法、快速色譜法、薄層色譜法(TLC)、重結(jié)晶、蒸餾、高壓液相色譜法(HPLC)等。同時(shí)，鑒定和定量化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物的多種多樣的技術(shù)在化學(xué)領(lǐng)域廣泛被了解，如質(zhì)子和碳-13核磁共振(1H和13CNMR)、紅外和紫外光譜儀(IR和UV)、X射線(xiàn)晶體學(xué)、元素分析、HPLC和質(zhì)譜儀(MS)。保護(hù)、去保護(hù)、提純、鑒定和定量的方法在化學(xué)領(lǐng)域也是眾所周知的。
式Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ代表的各類(lèi)化合物可以通過(guò)在以下的實(shí)施例中詳細(xì)描述的通用過(guò)程1和通用過(guò)程2進(jìn)行合成。合成上述各種化合物的具體方法在實(shí)施例中也被提供。其中L為SO或SO2的式Ⅳ化合物可通過(guò)在惰性溶劑中氧化相應(yīng)的含S化合物來(lái)合成。惰性溶劑可以是二氯甲烷、甲醇、四氫呋喃、醚、己烷、甲苯、環(huán)己烷等以及它們的混合物。氧化劑可以為m-氯過(guò)苯甲酸、過(guò)氧化氫等。反應(yīng)溫度在大約-78℃至液體的沸點(diǎn)，優(yōu)選從0℃到約30℃，反應(yīng)時(shí)間約在0.5至12小時(shí)。Ⅳ、本發(fā)明中端粒酶抑制劑的抗腫瘤活性本發(fā)明的化合物顯示出體內(nèi)抑制端粒酶活性的活性。本發(fā)明的化合物在體外的活性也可以用在此描述的方法證實(shí)。正如在此所用的術(shù)語(yǔ)“exvivo”是指在組織培養(yǎng)中使用活的細(xì)胞進(jìn)行測(cè)試。
用于識(shí)別本發(fā)明中抑制端粒酶活性的化合物的一種方法涉及使細(xì)胞、組織、或者優(yōu)選含有端粒酶的細(xì)胞提取物或其它制劑與己知幾個(gè)濃度的測(cè)試化合物在與端粒酶活性相容的緩沖液中相接觸。測(cè)出對(duì)應(yīng)于每一個(gè)濃度的測(cè)試化合物的端粒酶活性水平，且用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對(duì)化合物的IC50(在樣品制劑活性降至其最初或?qū)φ战M水平一半時(shí)的被測(cè)化合物濃度)進(jìn)行測(cè)定。使用其它測(cè)定本發(fā)明抑制端粒酶化合物的抑制濃度的方法以在此公開(kāi)的作為基礎(chǔ)，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。
用上述方法測(cè)定了本發(fā)明的幾種化合物的IC50值，發(fā)現(xiàn)它們都低于100μm。
通過(guò)使用在此描述的化合物治療惡性疾病，本發(fā)明的化合物會(huì)導(dǎo)致端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系的危機(jī)。使用本發(fā)明的化合物治療端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞系，如HEK-293和HeLa細(xì)胞，也將會(huì)使被處理細(xì)胞中端粒的長(zhǎng)度縮短。
本發(fā)明的化合物還將會(huì)導(dǎo)致人腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞分裂過(guò)程中端粒酶縮短，所述細(xì)胞系例如是卵巢腫瘤細(xì)胞系OVCAR-5和SK-OV-3。但重要的是，以正常的人細(xì)胞作對(duì)照組，如成纖維細(xì)胞組織的BJ細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)端粒酶長(zhǎng)度的縮短與對(duì)照物質(zhì)如二甲亞砜(DMSO)沒(méi)有區(qū)別。本發(fā)明的化合物在低于5μM的量時(shí)對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有顯著的細(xì)胞毒性影響。
此外，本發(fā)明化合物對(duì)于端粒酶的專(zhuān)一性可以通過(guò)比較端粒酶與其它酶的活性(IC50)來(lái)確定，這些其他酶與端粒酶的核酸結(jié)合相似或與體外端粒酶修正活性相似。這些酶包括DNA聚合酶Ⅰ、HeLa RNA聚合酶Ⅱ、T3RNA聚合酶、MMLV反轉(zhuǎn)錄酶、局部異構(gòu)酶Ⅰ、局部異構(gòu)酶Ⅱ、終端轉(zhuǎn)移酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)。相對(duì)于其它被篩選的酶，對(duì)端粒酶具有較低IC50值的化合物對(duì)端粒酶有專(zhuān)一性。
在體內(nèi)，也可通過(guò)異種移植的小鼠模型進(jìn)行測(cè)定，如將OVCAR-5腫瘤細(xì)胞移植入裸鼠，將小鼠用本發(fā)明的化合物處理，在最初劑量后的一段時(shí)間可能會(huì)增加腫瘤塊，但是繼續(xù)處理后腫瘤將會(huì)大量減少。相反，用對(duì)照物(如DMSO)處理的小鼠中腫瘤塊預(yù)期將會(huì)繼續(xù)增加。
通過(guò)以上所述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明還可提供選擇涉及給藥本發(fā)明化合物的治療方案的方法。為此目的，應(yīng)用末端限制片段(TRF)分析法是很有幫助的，其中腫瘤細(xì)胞中的DNA用對(duì)除端粒序列以外的序列特異性的限制酶消化來(lái)進(jìn)行分析。消化DNA后，通過(guò)凝膠電泳根據(jù)大小將限制片段分離。然后，被分離的片段用專(zhuān)一性針對(duì)端粒序列的核酸探針進(jìn)行探測(cè)，以測(cè)定樣品細(xì)胞中含有端粒DNA的末端片段的長(zhǎng)度。通過(guò)測(cè)定端粒的DNA長(zhǎng)度，可估計(jì)端粒酶抑制劑的作用時(shí)間和是否還應(yīng)用其它的療法(如手術(shù)、化學(xué)療法和/或輻射)。此外，在處理過(guò)程中，可通過(guò)測(cè)定在進(jìn)行細(xì)胞分裂后端粒長(zhǎng)度是否變短來(lái)顯示治療的有效性。Ⅴ、治療疾病的端粒酶抑制藥物組合物和方法本發(fā)明還提供能有效地抑制端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞增殖、治療癌癥和其它通過(guò)抑制端粒酶來(lái)有效治療的病癥的藥物組合物。這些藥物組合物包括在藥物學(xué)上可接受的載體或鹽中含有治療有效劑量的本發(fā)明的端粒酶抑制化合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制端粒酶、同時(shí)抑制端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞的增殖、以及治療哺乳動(dòng)物癌癥的方法、化合物和組合物。本發(fā)明的組合物包括在藥物學(xué)上可接受的載體中含有治療有效量的式Ⅰ到Ⅴ的化合物(或其藥物學(xué)上可接受的鹽)。本發(fā)明的化合物和組合物也可以用于治療其它端粒酶介導(dǎo)的病癥或疾病，例如過(guò)度增殖性的或自身免疫性的紊亂，例如牛皮癬、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、需要免疫系統(tǒng)抑制的免疫系統(tǒng)紊亂、對(duì)毒葉藤或毒櫟的免疫系統(tǒng)反應(yīng)等。
此外，本發(fā)明的端粒酶抑制劑結(jié)合其它抗癌癥藥劑，包括美國(guó)專(zhuān)利5,656,638、5,760,062、5,767,278、5,770,613和5,863,936中的其它端粒酶抑制劑，將會(huì)對(duì)癌癥的治療帶來(lái)益處。此等組合的選擇依賴(lài)于不同的因素，包括但不限于疾病的類(lèi)型、病人的年齡和基本健康狀況、疾病進(jìn)展的侵蝕性、TRF的長(zhǎng)度、待處理的疾病細(xì)胞的端粒酶活性和病人對(duì)于組合藥物的耐受性。例如，在腫瘤發(fā)展到晚期時(shí)，建議組合本發(fā)明的端粒酶抑制化合物以及對(duì)降低腫瘤大小有效的其他藥劑和治療方法(如輻射、外科手術(shù)、化學(xué)療法、和/或激素療法)。此外，也有可能用本發(fā)明的端粒酶抑制化合物組合其它一種或多種對(duì)于治療疾病副作用有效的藥劑，如止痛藥、或刺激病人自身免疫反應(yīng)的藥劑(如集落刺激因子)。
其中一種方法是，藥物組合物包括本發(fā)明的端粒酶抑制劑和抗血管生成劑，如煙曲霉素、煙曲霉素衍生物、或AGM-1470。后一種化合物可從特科達(dá)化學(xué)公司得到，而前述的化合物描述在Ingber等人，12月6日，1990，“抑制血管生成和抑制腫瘤生長(zhǎng)的煙曲霉素合成類(lèi)似物”，自然348:555-557中。其他組合可包括但不限于用本發(fā)明的端粒酶抑制劑組合一種或多種抗瘤劑或添加劑(如亞葉酸或美司鈉)。
適合與本發(fā)明的化合物組合的抗瘤劑包括但不限于烷化劑包括烷基磺酸酯如白消胺、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，如benzodizepa、卡波醌、美妥替哌和烏瑞替哌；氮丙啶和甲基蜜胺，如六甲蜜胺、三乙烯蜜胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三羥甲基蜜胺；氮芥，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、環(huán)磷酰胺、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、鹽酸氧氮芥、氮芥、美法侖、novembichine、phenesterine、潑尼莫司汀、曲磷胺、和烏拉莫司?。粊喯趸?，例如卡莫司汀、chlorozotocin、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀。其它的藥劑包括達(dá)卡巴嗪、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴衛(wèi)矛醇和哌泊溴烷。其它類(lèi)別的相關(guān)藥劑包括抗生素、激素類(lèi)抗癌藥和抗代謝物。此外，還包括為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的其他組合。
其它適合于組合本發(fā)明化合物的藥劑包括蛋白合成抑制劑，如相思豆毒蛋白、金精三羧酸、氯霉素、大腸桿菌素E3、防線(xiàn)菌酮、白喉毒素、伊短菌素A、吐根堿、紅霉素、乙硫氨酸、氟化物、5-氟色氨酸、梭鏈孢酸、鳥(niǎo)苷?；鶃喖谆姿?、鳥(niǎo)苷酰基亞氨二磷酸鹽、卡那霉素、春雷霉素、摩雪霉素和O-甲基蘇氨酸。其它蛋白合成抑制劑包括modeccin、新霉素、正纈氨酸、密旋霉素、巴龍霉素、嘌呤霉素、蓖麻毒蛋白、次黃嘌呤、志賀毒素、焦土霉素、司帕霉素、大觀霉素、鏈霉素、四環(huán)素、蘚霉素和甲氧芐啶。DNA合成的抑制劑也可以與本發(fā)明的化合物組合作為藥物組合物的成分，其包括烷基化劑，如二甲基硫酸酯、絲裂霉素C、氮芥和硫芥、MNNG和NMS；嵌入劑如吖啶染料、放線(xiàn)菌素、阿霉素、蒽、苯并芘、溴化乙錠、二碘化丙錠-intertwining、以及其它如可替霉素、紡錘菌素的藥劑。DNA堿基類(lèi)似物如阿昔洛韋、線(xiàn)嘌呤β-1-D-阿拉伯糖苷、氨甲蝶呤、氨蝶呤、2-氨基嘌呤、蚜棲菌素、8-氮鳥(niǎo)嘌呤、重氮絲氨酸、6-氮尿嘧啶、2-疊氮基-2-脫氧核苷、5-溴脫氧胞苷、胞嘧啶β-1-D-阿拉伯糖苷、重氮氧正亮氨酸、二脫氧核苷、5-氟脫氧胞苷、5-氟脫氧尿嘧啶核苷、5-氟尿嘧啶、羥基脲以及6-巰基嘌呤也可與本發(fā)明的化合物組合進(jìn)行治療。拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，如香豆毒素、萘啶酸、新生霉素和奧索利酸；細(xì)胞分裂抑制劑，包括秋水仙胺、秋水仙素、長(zhǎng)春花堿和長(zhǎng)春新堿；以及RNA合成抑制劑包括放線(xiàn)菌素D、α-鵝膏菌素和其它霉菌的鵝膏菌素、蛹蟲(chóng)草菌素(3′-脫氧腺苷)、二氯呋喃核糖基苯并咪唑、利福平、曲張鏈菌素和利迪霉素，也可結(jié)合本發(fā)明的化合物以提供藥物組合物。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明包括化合物和組合物，其中端粒酶抑制劑或者結(jié)合細(xì)胞毒性劑或與共價(jià)鍵結(jié)合，該細(xì)胞毒性劑已結(jié)合于目標(biāo)物上，如單克隆抗體(如鼠或人單克隆抗體)。應(yīng)認(rèn)識(shí)到，后一種結(jié)合可使細(xì)胞毒性劑高度特異性地導(dǎo)入癌細(xì)胞中。因此，細(xì)胞毒性劑(即、游離形式)將僅會(huì)存在于被抗體靶擊的細(xì)胞中。當(dāng)然，本發(fā)明的端粒酶抑制劑也可結(jié)合具有抗癌治療活性的單克隆抗體。
除了應(yīng)用本發(fā)明的端粒酶抑制劑治療哺乳動(dòng)物以端粒酶活性為特征的疾病，如在此揭示的，端粒酶抑制劑還可被用于以端粒酶活性為特征的農(nóng)業(yè)植物病原菌生物中。這些生物包括線(xiàn)蟲(chóng)，如經(jīng)觀察具有端粒酶活性的Ceanorhabditis elegans，還有真菌。根據(jù)測(cè)定真菌Ustilago maydis的DNA顯現(xiàn)出具有串聯(lián)TTAGGG重復(fù)的端粒是靠端粒酶維持，得知真菌具有端粒酶活性。同時(shí)，原生動(dòng)物具有TTAGGG端粒且導(dǎo)致人的疾病。本發(fā)明的端粒酶抑制化合物可被單獨(dú)用于具有端粒酶活性的植物病原菌生物感染的植物和土壤，或結(jié)合其它端粒酶抑制劑和/或其它用于控制植物疾病的藥劑。測(cè)定控制此等植物病原菌生物的藥物組合物和以及其恰當(dāng)?shù)闹圃旆椒▽?duì)于農(nóng)業(yè)領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是已知的。
對(duì)于線(xiàn)蟲(chóng)、原生動(dòng)物和具有端粒酶活性真菌的測(cè)定顯示出本發(fā)明所提供的端粒酶抑制劑可以用來(lái)治療人及獸醫(yī)上感性趣的動(dòng)物如貓和狗的線(xiàn)蟲(chóng)感染。人和動(dòng)物的線(xiàn)蟲(chóng)感染經(jīng)常為鉤蟲(chóng)及蛔蟲(chóng)感染的形式，并且導(dǎo)致宿主嚴(yán)重的繼發(fā)性疾病如腦膜炎、心肌炎和各種神經(jīng)性疾病。因此，本發(fā)明的這些端粒酶抑制化合物單獨(dú)或結(jié)合其它端粒酶抑制劑和/或其它治療劑使用，可用來(lái)控制人及動(dòng)物線(xiàn)蟲(chóng)、原生動(dòng)物和真菌的感染。
通常，本發(fā)明化合物的合適的有效劑量為每天每公斤體重0.001至1000毫克，優(yōu)選在每天每公斤體重0.001至100毫克，仍?xún)?yōu)選在每天每公斤體重0.01至100毫克，更優(yōu)選在每天每公斤體重0.1至10毫克。這些劑量?jī)?yōu)選是一天中在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔分一、二、三、四或更多次服用，或者通過(guò)連續(xù)泵服用。這些亞劑量可以單元?jiǎng)┝縿┬徒o藥，每單位劑量例如包含5至10,000毫克、優(yōu)選在10至1000毫克的活性成分。優(yōu)選地，每天一次的劑量至少等于TID，或者用連續(xù)泵給藥系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行。
用于這些治療的藥物組合物可有多種形式。它們包括例如固體、半固體和液體劑型，如片劑、丸劑、粉末、液體溶液劑或混懸劑、脂質(zhì)體以及可注射和可灌注的溶液。優(yōu)選的劑型取決于給藥和治療的預(yù)期方式。正如本領(lǐng)域熟知的，藥物組合物也最好包括常規(guī)的藥物學(xué)上可接受的載體和輔劑。參看如REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES,Mack出版公司，Easton,Pa.，第17版(1985)。優(yōu)選的是通過(guò)口服或非胃腸道(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、表皮內(nèi))途徑給藥。更優(yōu)選的給藥方式為口服。本發(fā)明的治療方法和藥劑當(dāng)然可伴隨或結(jié)合其它治療特定疾病或疾病狀況的方法和藥劑使用。
盡管可以單獨(dú)使用本發(fā)明的活性成分，優(yōu)選地用一種治療劑作為藥物配方或組合物的一部分。本發(fā)明的組合物包括在一種或多種藥物或治療可接受的載體中含有至少一種治療有效劑量的本發(fā)明的端粒酶活性抑制化合物以及選擇性地組合其它治療成分。配制這些組合物的不同考慮被描述在例如Gilman等人(編輯)GOODMAN AND GILMAN′S治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)，第8版，Pergamon出版社(1990)；以及上述REMINGTON′S中。在此對(duì)給藥方法進(jìn)行討論，如對(duì)于口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)和其它給藥的形式。通常，給藥藥物組合物的方法是進(jìn)行預(yù)防和/或治療的目的，可以是局部、非胃腸道、或口服。優(yōu)選口服給藥。根據(jù)給藥方法，藥物組合物可以多種單元?jiǎng)┝縿┬徒o藥。如上所述，適于口服的單元?jiǎng)┝縿┬桶ǚ勰?、片劑、丸劑和膠囊。
可使用局部給藥本發(fā)明的化合物，其方式可以是經(jīng)皮將藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至病人的系統(tǒng)循環(huán)中。皮膚部位包括用于透皮給藥的解剖學(xué)區(qū)域，如前肢、腹部、胸部、背部、臀部和mastodial區(qū)域。將包含化合物的局部用制劑或者給藥化合物的透皮給藥裝置放置在皮膚上，由此可向皮膚給藥本發(fā)明的化合物。在任一實(shí)施方案中，給藥載體以容易放置和舒服地固定于皮膚為依據(jù)，進(jìn)行外觀設(shè)計(jì)、造型及大小設(shè)計(jì)。
多種經(jīng)皮給藥裝置可用于本發(fā)明的化合物。例如，可使用一個(gè)簡(jiǎn)單的的粘著片，它包括支持材料和丙烯酸粘著劑。藥物和任何滲透促進(jìn)劑都可以配制入粘著澆注溶液中。粘著澆注溶液可直接澆注在支持材料上或者涂敷在皮膚上形成涂層。參看例如第4,310,509、4,560,555和4,542,012號(hào)美國(guó)專(zhuān)利。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過(guò)液體蓄積系統(tǒng)給藥裝置進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。這些系統(tǒng)通常包括支持材料、膜片、以丙烯酸基粘著劑和剝離襯。膜片固定在支持材料上以形成蓄積層。藥物或化合物和任何載體、促進(jìn)劑、穩(wěn)定劑、膠凝劑等之后摻入蓄積層中。參看例如第4,597,961、4,485,097、4,608,249、4,505,891、3,843,480、3,948,254、3,948,262、3,053,255和3,993,073號(hào)美國(guó)專(zhuān)利。
包括支持層、藥物/滲透促進(jìn)劑基質(zhì)、膜片和粘著劑的基質(zhì)型貼片也可用于經(jīng)皮給藥本發(fā)明的化合物?；|(zhì)材料通常包括聚氨脂泡沫。藥、任何促進(jìn)劑、載體、穩(wěn)定劑等與泡沫前體混合。使泡沫固化成粘的有彈性的基質(zhì)，它可直接固定于支持材料上。參看例如第4,542,013、4,460,562、4,466,953、4,482,534和4,533,540號(hào)美國(guó)專(zhuān)利。
同時(shí)，本發(fā)明還包括局部皮膚施用的制劑，其含有本發(fā)明的化合物，其濃度通常在0.001至10％，同時(shí)混合無(wú)毒的藥理可接受的局部用載體。這些局部制劑可通過(guò)混合依照本發(fā)明的活性成分和通常被用于局部的干、液體及乳劑的常規(guī)藥物稀釋劑和載體來(lái)制備。膏和乳劑可在合適的稠化和/或膠凝劑的基礎(chǔ)上與液體或油狀基質(zhì)混合。這些基質(zhì)可包括水和/或油，如液體石蠟或植物油，如豆油或蓖麻油。根據(jù)基質(zhì)的性質(zhì)，可被使用的稠化劑包括軟石蠟、硬脂酸鋁、cetostearyl醇、丙二醇、聚乙二醇、羊毛脂、氫化羊毛脂、蜂蠟等。
洗液劑可與液體或油狀基質(zhì)配制，且通常也包括以下的一種或多種穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、懸浮劑、稠化劑、著色劑、芳香劑等。粉末可結(jié)合任何合適的粉末基體，如滑石、乳糖、淀粉等。滴劑可結(jié)合水性基質(zhì)或包含一種或多種分散劑、懸浮劑、增溶劑等的非水基質(zhì)。本發(fā)明化合物的局部施用也適于治療許多疾病，如皮膚癌和皮膚真菌感染(致病性真菌通常表達(dá)端粒酶活性)。
依照本發(fā)明的局部用藥物組合物也可包括一種或多種防腐劑或抑菌劑，如羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、氯甲酚、苯扎氯銨等。局部用藥的藥物組合物也可包括其它活性成分，如抗微生物劑、尤其是抗生素、麻醉劑、止痛劑和止癢劑。
本發(fā)明的化合物還可通過(guò)粘膜轉(zhuǎn)運(yùn)。經(jīng)粘膜轉(zhuǎn)運(yùn)(即舌下、頰和腸)給藥使活性物質(zhì)有效進(jìn)入系統(tǒng)循環(huán)，同時(shí)降低了肝臟和腸壁菌叢的瞬時(shí)代謝。經(jīng)粘膜給藥的劑型(如片劑片、栓劑、油膏、陰道環(huán)、膜片和粉末)通常都與粘膜接觸并迅速崩解和/或溶解，以允許被系統(tǒng)迅速吸收。值得注意的是，此種方法甚至可用于病人不能消化口服治療成分的情況。同時(shí)本發(fā)明的端粒酶抑制劑輸送被增強(qiáng)，可選擇給藥至粘膜的藥物組合物，例如，對(duì)于結(jié)腸癌就可使用栓劑來(lái)給藥端粒酶抑制劑。
對(duì)于給藥至頰或舌下膜，通常使用口服制劑，例如錠劑、片劑或膠囊。制備這些制劑的方法在本領(lǐng)域被熟知，它包括但不限于，將藥劑添加到預(yù)制的藥片中；對(duì)惰性填料、粘合劑以及藥劑或包含這種藥劑的物質(zhì)進(jìn)行冷壓制(在美國(guó)專(zhuān)利4,806,356中描述)；以及包膠。另一種口服制劑可用粘著劑施用于口腔粘膜，所述粘著劑例如是纖維素衍生物羥基丙基纖維素，例如在美國(guó)專(zhuān)利4,940,587中所述的。這種頰粘著制劑，當(dāng)用于頰粘膜時(shí)，使藥劑受控地釋放進(jìn)入口腔并通過(guò)頰粘膜。
非胃腸道給藥通常以注射為特征，可為皮下、肌肉內(nèi)或靜脈注射。因此，本發(fā)明提供了靜脈給藥的藥物組合物，它包括本發(fā)明的化合物的溶液被溶解或懸浮于可接受的載體中。注射劑可采用常規(guī)的形式，或者為液體溶液或者為懸浮液，在注射前應(yīng)能溶解或懸浮于液體中的固體形式，或者為乳劑。適合的賦形劑例如是水、緩沖水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等。這些藥物組合物采用常規(guī)熟知的滅菌技術(shù)滅菌，如滅菌過(guò)濾。由此得到的溶液可以被包裝以便使用或凍干，凍干的藥劑在使用前與無(wú)菌的溶液混合。此外，如果愿意，要給藥的藥物組合物也可包括少量的無(wú)毒的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖溶劑等，例如乙酸鈉、脫水山梨醇單月桂酸酯、油酸三乙醇胺等。這些制劑可用于治療卵巢癌。
另一種非胃腸道給藥的方法是運(yùn)用植入緩慢釋放或持續(xù)釋放系統(tǒng)，這樣可維持一個(gè)固定水平的劑量。參看如美國(guó)專(zhuān)利3,710,795。
可給藥的液態(tài)藥物組合物可以通過(guò)溶解、分散等技術(shù)制備，將如上所述的活性化合物和選擇性藥物輔劑加入到賦形劑中，例如水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇、橄欖油和其它親油性溶劑等中，以形成溶液或懸浮液。如果需要，待給藥的藥物組合物可包括少量的無(wú)毒輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖溶劑等，例如乙酸鈉、脫水山梨醇單月桂酸酯、油酸三乙醇胺等。制備這些劑型的具體方法為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知；例如，參看上述REMINGTON′S PHARMACEUTICALSCIENCES。待給藥的這些藥物組合物或制劑包括治療有效劑量的本發(fā)明的活性化合物。
對(duì)于固體組合物，可使用常規(guī)的無(wú)毒固體載體，包括例如藥物級(jí)的甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、鈉糖精、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。對(duì)于口服給藥，藥物學(xué)上可接受的無(wú)毒的組合物可通過(guò)將任何通常使用的賦形劑，如以上所列出的載體，和0.1-95％、優(yōu)選約為20％的活性成分混合而制備。
給藥包含本發(fā)明化合物的組合物可以用于預(yù)防和或治療目的。在治療應(yīng)用中，藥物組合物用于已經(jīng)得病的病人，如上面所描述的，用量為足以治愈或至少部分緩解疾病癥狀及其并發(fā)癥的劑量。足以完成治療的劑量被定義為“治療有效量或劑量”。有效的劑量依賴(lài)于疾病的嚴(yán)重程度和病人的體重和基本狀況。
除了體內(nèi)治療，本發(fā)明的化合物和組合物還可以用于ex vivo以達(dá)到治療效果，例如對(duì)于患白血病的病人。在此種應(yīng)用中，待治療的細(xì)胞，例如血或骨髓細(xì)胞，從病人體內(nèi)移走并且用有效劑量的本發(fā)明化合物處理。這些細(xì)胞在處理后移回病人體內(nèi)。與其它方法相比，這種過(guò)程可允許細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間或暴露于高濃度的治療劑中。
一旦病人的情況改善，例如癌癥病人的狀況得到緩解，如果必要，則給病人給藥維持劑量。隨后，由于治療的作用，可降低用藥的劑量或頻率，或二者共同降低到維持這種改善的水平。當(dāng)癥狀緩解到預(yù)期的水平時(shí)，可停止治療。但是，當(dāng)病人疾病癥狀復(fù)發(fā)時(shí)，就要再次進(jìn)行治療。
在預(yù)防(如化學(xué)預(yù)防)應(yīng)用中，可將含有本發(fā)明化合物的組合物給藥于易感染某一特定疾病或有患病危險(xiǎn)的病人。這種用藥的劑量被稱(chēng)為“預(yù)防有效量或劑量”。在這樣的應(yīng)用中，具體的劑量也要依賴(lài)于病人的健康狀況和體重而定。
對(duì)于閱讀了本說(shuō)明書(shū)的本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)的是，本發(fā)明提供了對(duì)人類(lèi)和哺乳動(dòng)物端粒酶有價(jià)值的藥劑。以上所描述的僅僅是一些有限的和說(shuō)明性的特定化合物的舉例性的說(shuō)明，不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明范圍的限制。本發(fā)明的其它特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)從下面的實(shí)施例和權(quán)利要求中得到說(shuō)明。
實(shí)施例下面的實(shí)施例為了說(shuō)明本發(fā)明進(jìn)行了具體的描述，且同時(shí)提供了對(duì)抑制端粒酶活性化合物鑒定和測(cè)定的方法，以便于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解和應(yīng)用本發(fā)明。實(shí)施例不應(yīng)被認(rèn)為是以任何形式限制本發(fā)明。
在下面的實(shí)施例1-24中運(yùn)用了以下通用過(guò)程通用過(guò)程1偶聯(lián)2,4-噻唑烷二酮(TZD)為醛。
將適當(dāng)取代的醛(1當(dāng)量)、2,4-噻唑烷二酮(1.5當(dāng)量)和派啶(1.5當(dāng)量)在EtOH中的溶液加熱至90℃C持續(xù)2-16小時(shí)。所得的溶液用1N HCl水溶液酸化。所得的固體物質(zhì)過(guò)濾后用水和/或醚洗滌，得到純產(chǎn)物。另一種方案是，酸化的水溶液用氯仿或乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮得到粗產(chǎn)物，將該固體粗產(chǎn)物用柱色譜法或重結(jié)晶法在合適的溶劑中提純。
反應(yīng)通常在0.5毫摩爾水平進(jìn)行。
實(shí)施例1制備5-(2-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛向2-溴苯甲醛(1當(dāng)量)和3,4-二氯苯基硼酸(1.2當(dāng)量)的乙腈溶液中加入K2CO3(1.5當(dāng)量)，隨后加入Pd(PPh3)4(催化劑)。反應(yīng)加熱到75℃，持續(xù)攪拌16小時(shí)，之后反應(yīng)物經(jīng)EtOAc稀釋?zhuān)?jīng)水洗滌，Na2SO4干燥，減壓濃縮，得到的粗醛用柱色譜提純。步驟B通用過(guò)程1通用過(guò)程1之后得到5-(2-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):7.70(d,1H),7.76(d,1H),7.59-7.42(m,5H),7.28(dd,1H)MS(ESI)計(jì)算349，實(shí)測(cè)348(M-H)-。
實(shí)施例2制備5-(3-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛通過(guò)實(shí)施例1的步驟A用3-溴苯甲醛制備所需的醛。步驟B通用過(guò)程1通用過(guò)程1之后得到5-(3-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):7.98(s,1H),7.94(s,1H),7.84(s,1H),7.79(d,1H),7.74-7.66(m,2H),7.63-7.53(m,2H)MS(ESI)計(jì)算349，實(shí)測(cè)348(M-H)-。
實(shí)施例3制備5-(4-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛向4-羥基苯甲醛的乙腈溶液中加入K2CO3(1.5當(dāng)量)，隨后加入3,4-二氯芐基氯(3當(dāng)量)。所得的反應(yīng)混合物加熱到90℃，持續(xù)2-16小時(shí)，并同時(shí)濾掉沉淀。濾液用EtOAc稀釋?zhuān)盟礈?，Na2SO4干燥，然后減壓濃縮得到粗產(chǎn)物。此產(chǎn)物由CH2Cl2/己烷溶劑系統(tǒng)中重結(jié)晶提純，以得到純?nèi)?。步驟B通用過(guò)程1通用過(guò)程1之后得到5-(4-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):7.69(d,2H),7.62(d,1H),7.52(d,2H),7.41(d,1H),7.12(d,2H),5.20(s,2H)MS(ESI)計(jì)算379，實(shí)測(cè)378(M-H)-。
實(shí)施例4制備5-(2-(3,4-二氯芐氧基)-次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛通過(guò)實(shí)施例3步驟A的過(guò)程從2-羥基苯基醛制備所需的醛。步驟B通用過(guò)程1通用過(guò)程1之后得到5-(2-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
實(shí)施例5制備5-(4-(3,4-二氯苯甲酰氨基)-次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛向4-硝基苯甲醛(1當(dāng)量)的三甲基原甲酸酯溶液中加入PTSA(催化劑)，所得到的混合物加熱回流持續(xù)3-5小時(shí)，同時(shí)將反應(yīng)混合物減壓濃縮。殘余物在乙醚中溶解，用NaHCO3和水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到二甲基縮醛。
粗二甲基縮醛溶解在EtOH中，隨后加入雷尼鎳。0℃時(shí)，15分鐘內(nèi)向該混合物滴加水合肼(5當(dāng)量)以控制其沸騰。反應(yīng)物加熱到室溫，再攪拌3小時(shí)，然后過(guò)濾出去催化劑。濾液減壓濃縮。將殘余物再溶解于EtOAc中，用水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到粗4-氨基苯甲醛二甲基縮醛。
在0℃，向4-氨基苯甲醛二甲基縮醛的CH2Cl2溶液中加入TEA(2當(dāng)量)，之后加入3,4-二氯苯甲酰氯(1.5當(dāng)量)。所得的混合物在室溫下攪拌2-16小時(shí)，并用水和EtOAc稀釋。分離有機(jī)層，用水洗滌，之后減壓濃縮。殘余物用CHCl3溶解，隨后加入2N HCl水溶液。攪拌混合物1小時(shí)，分離出有機(jī)相，用飽和NaHCO3溶液和水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到粗醛。該醛可用柱色譜法或重結(jié)晶法從合適的溶劑系統(tǒng)中得到純4-(3,4-二氯苯甲酰氨基)苯甲醛。步驟B通用過(guò)程1通用過(guò)程1后得到5-(2-(3,4-二氯芐氧基)-次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):12.50(br s,1H),10.60(s,1H),8.18(d,1H),7.90-7.86(m,3H),7.78(d,1H),7.70(s,1H),7.56(d,1H)。
MS(ESI)計(jì)算392，實(shí)測(cè)391(M-H)-。
實(shí)施例6制備5-(4-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛向4-硝基苯甲醛(1當(dāng)量)的三甲基原甲酸酯溶液中加入PTSA(催化劑)，所得到的混合物加熱回流持續(xù)3-5小時(shí)，同時(shí)將反應(yīng)混合物減壓濃縮。殘余物溶于乙醚中，用NaHC03和水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到二甲基縮醛。
將粗二甲基縮醛溶于EtOH中，隨后加入雷尼鎳(催化劑)。0℃時(shí)，15分鐘之內(nèi)將水合肼(5當(dāng)量)滴加到該混合物中以控制其沸騰。反應(yīng)物加熱到室溫，再攪拌3小時(shí)之后過(guò)濾掉催化劑，將濾液減壓濃縮。將殘余物再溶解于EtOAc中，用水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到粗氨基苯甲醛二甲基縮醛。
在氨基苯甲醛二甲基縮醛(1當(dāng)量)的乙腈溶液中加入固體3,4-二氯苯基異氰酸酯(2當(dāng)量)。所得的混合物攪拌6-16小時(shí)，同時(shí)用EtOAc稀釋?zhuān)盟礈?，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到粗脲。將該脲在CH2Cl2中溶解，之后再加入50％TFA水溶液。攪拌所得的混合物2小時(shí)同時(shí)分離有機(jī)相，用飽和NaHCO3水溶液和水洗滌，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到粗產(chǎn)物。步驟B通用過(guò)程通用過(guò)程1之后得到5-(4-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):9.40(d,2H),8.58(s,1H),7.84(d,1H),7.76(d,2H),7.54(d,2H),7.48(d,1H),7.30(dd,1H)MS(ESI)計(jì)算407，實(shí)測(cè)406(M-H)-。
實(shí)施例7制備5-(2-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛通過(guò)使用實(shí)施例6步驟A的過(guò)程從2-硝基苯甲醛制備所需的醛。步驟B通用過(guò)程1
通用過(guò)程1之后得到5-(2-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):10.10(Br s,1H),7.70(d,1H),7.62(d,1H),7.42(dd,1H),7.26-7.22(m,2H),6.94(t,1H),6.70(d,1H),5.86(d,1H)。
實(shí)施例8制備5-(2-(N-3,4-二氯苯基氨甲酰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備5-(2-羧基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮通過(guò)通用過(guò)程1的方法從2-羧基苯甲醛制備5-(2-羧基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。步驟B羧基基團(tuán)的精心處理將5-(2-羧基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮在SO2Cl2中溶解，隨后加入1-2滴DMF。所得的混合物加熱到約80℃持續(xù)15-30分鐘，同時(shí)減壓濃縮。殘余物在THF中溶解，并滴加到3,4-二氯苯胺(1.5當(dāng)量)和TEA(2當(dāng)量)的混合溶液中。再攪拌該混合物1-2小時(shí)，將反應(yīng)混合物中的固體過(guò)濾。將濾液減壓濃縮得到的固體用水和乙醚洗滌，以得到純產(chǎn)物。
NMR(DMSO-d6,δ):10.80(Br s,1H),8.06(d,1H),7.93(s,1H),7.73-7.54(m,6H)。
MS(ESI)計(jì)算392，實(shí)測(cè)391(M-H)-
實(shí)施例9制備5-(3-(N-3,4-二氯苯基氨甲酰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 根據(jù)實(shí)施例8的方法分兩步通過(guò)3-羧基苯甲醛制備5-(3-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):8.12(d,1H),8.08(s,1H),7.97(d,1H),7.82(s,1H),7.77(d,1H),7.72-7.64(m,2H),7.60(d,2H)。
MS(ESI)計(jì)算392，實(shí)測(cè)391(M-H)-實(shí)施例10制備5-(4-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 根據(jù)實(shí)施例8的方法通過(guò)4-羧基苯甲醛制備5-(4-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):10-60(Br s,1H),8.12(s,1H),8.02(d,2H),7.82(s,1H),7.71(d,3H),7.58(d,1H)。
MS(ESI)計(jì)算392，實(shí)測(cè)391(M-H)-實(shí)施例11制備5-(4-(N-3,4-二氯苯氨甲酰氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備5-(4-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮通過(guò)通用過(guò)程1的方法從4-羥基苯甲醛制備5-(4-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。步驟B羥基的精心處理向5-(4-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮(1當(dāng)量)的乙腈溶液中加入K2CO3(xs)，隨后加入固體3,4-二氯苯基異氰酸酯(2當(dāng)量)。所得的混合物攪拌6-16小時(shí)，之后將固體過(guò)濾，用水洗滌后得到純產(chǎn)物。
NMR(DMSO-d6,δ):12.60(Br s,1H),10.60(br s,1H),7.76(d,2H),7.62(d,2H),7.56(dd,1H),7.41(dd,1H),7.37(dd,1H)。
MS(ESI)計(jì)算408，實(shí)測(cè)407(M-H)-
實(shí)施例12制備5-(4-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 將5-(4-羧基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮(從實(shí)施例8步驟A)在SO2Cl2中溶解，隨后加入1-2滴DMF。所得的混合物加熱到約80℃持續(xù)15-30分鐘，并將反應(yīng)混合物減壓濃縮。殘余物在THF中溶解，并滴加到3,4-二氯苯酚(1.5當(dāng)量)和TEA(2當(dāng)量)的混合溶液中。攪拌所得到的混合物1-2小時(shí)，將反應(yīng)混合物中的固體過(guò)濾。濾液減壓濃縮后得到的固體用水和乙醚洗滌，以得到純酯。用另一種方法，在5-(4-羧基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮(1當(dāng)量)和3,4-二氯苯酚(1當(dāng)量)的CH2Cl2溶液中加入DCC(1當(dāng)量)。所得到的反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)后過(guò)濾，濾液用水洗滌，減壓濃縮后得到的粗產(chǎn)物經(jīng)重結(jié)晶提純。
NMR(DMSO-d6,δ):8.1 8(d,2H),7.80(d,2H),7.77-7.68(m,3H),7.38-7.33(m,1H)。
MS(ESI)計(jì)算393，實(shí)測(cè)392(M-H)-實(shí)施例13制備5-(2-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 通過(guò)實(shí)施例12的方法制備5-(2-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):8.28(s,1H),8.22(d,1H),7.80(t,1H),7.76(d,1H),7.73(d,1H),7.64(d,1H),7.38(dd,1H)。
MS(ESI)計(jì)算393，實(shí)測(cè)392(M-H)-實(shí)施例14制備5-(2-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備5-(2-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮通過(guò)通用過(guò)程1從2-羥基苯甲醛制備5-(2-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二2酮。步驟B羥基基團(tuán)的精心處理將3,4-二氯苯乙酸在SO2Cl2中溶解，隨后加入幾滴DMF。所得的混合物加熱到80℃持續(xù)15-30分鐘，將反應(yīng)混合物減壓濃縮。殘余物在THF中溶解，并緩慢加入到5-(4-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮(1.5當(dāng)量)和TEA(1.5當(dāng)量)的THF溶液中。攪拌混合物1-2小時(shí)，將反應(yīng)混合物中的固體過(guò)濾出去。濾液減壓濃縮得到淺黃色的固體。將該固體用EtOAc溶解，用飽和K2CO3水溶液洗滌。分離出有機(jī)相，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到純產(chǎn)物。
NMR(DMSO-d6,δ):12.65(Br s,1H),7.65(d,1H),7.57(d,1H),7.55(s,1H),7.54-7.6(m,2H),7.41(d,1H),7.37(dd,1H),7.30(d,1H),4.00(s,2H)。
MS(ESI)計(jì)算407，實(shí)測(cè)406(M-H)-。
實(shí)施例15制備5-(3-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 用實(shí)施例14的方法通過(guò)3-羥基苯甲醛制備5-(3-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):12.60(Br s,1H),7.74(s,1H),7.66(d,1H),7.59(d,1H),7.53(t,1H),7.45(d,1H),7.38-7.33(m,2H),7.24(d,1H),4.00(s,2H)。
MS(ESI)計(jì)算407，實(shí)測(cè)406(M-H)。
實(shí)施例16制備5-(4-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 用實(shí)施例14的方法通過(guò)4-羥基苯甲醛制備5-(4-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):7.76(s,1H),7.66(d,1H),7.60(m,3H),7.36(dd,1H),7.28(d,2H),4.00(s,2H)。
MS(ESI)計(jì)算407，實(shí)測(cè)406(M-H)-。
實(shí)施例17制備5-(2-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備5-(2-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮通過(guò)通用過(guò)程1從2-羥基苯甲醛制備5-(2-羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。步驟B羥基基團(tuán)的?；瘜?,4-氯苯甲酰氯的THF溶液緩慢加入5-(羥基次芐基)噻唑烷-2,4-二酮(1.5當(dāng)量)和TEA(1.5當(dāng)量)的THF溶液中。攪拌得到的混合物1-2小時(shí)，將反應(yīng)混合物中的固體過(guò)濾除去。濾液減壓濃縮得到淺黃色的固體。將該固體用EtOAc溶解，用飽和K2CO3水溶液洗滌。分離出有機(jī)相，用Na2SO4干燥，減壓濃縮以得到純產(chǎn)物。
NMR(DMSO-d6,δ):8.30(s,1H),8.09(dd,1H),7.90(d,1H),7.68-7.62(m,1H),7.42-7.28(m,3H),7.18(s,1H)。
MS(ESI)計(jì)算393，實(shí)測(cè)392(M-H)-實(shí)施例18制備5-(3-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 用實(shí)施例17的方法通過(guò)3-羥基苯甲醛制備5-(3-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):8.27(s,1H),8.06(d,1H),7.86(d,1H),7.52-7.38(m,3H),7.24(s,1H),7.20(d,1H)。
MS(ESI)計(jì)算393，實(shí)測(cè)392(M-H)-
實(shí)施例19制備5-(4-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 用實(shí)施例17的方法通過(guò)4-羥基苯甲醛制備5-(4-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):8.26(d,1H),8.04(dd,1H),7.85(d,1H),7.58(d,2H),7.36(d,2H),7.39-7.34(m,3H)。
MS(ESI)計(jì)算393，實(shí)測(cè)392(M-H)-。
實(shí)施例20制備5-(3,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛將3,4二氯芐基氯(415μl,3mmol)加入到138mg(1mmol)3,4-二氯羥基苯甲醛和690mg碳酸鉀在DMF中的混合物內(nèi)。所得的混合物加熱到70℃并攪拌過(guò)夜。反應(yīng)混合物用20ml的水稀釋?zhuān)⒒旌衔镞^(guò)濾。收集過(guò)濾產(chǎn)生的白色沉淀并風(fēng)干，得到426mg(93％)目的產(chǎn)物。
1H NMR(部分)(400MHz,DMSO-d6)δ9.9(s,1H),5.24(s,2H),5.19(s,2H)。步驟B通用過(guò)程1NMR(400MHz,DMSO-d6,δ):7.68-7.66(m,H),7.65(s,1H),7.63-7.59(m,2H),7.41-7.37(m,2H),7.21-7.20(m,1H),7.18-7.15(m,2H)。
MS(ESI)計(jì)算553，實(shí)測(cè)552(M-H)-。
實(shí)施例21制備5-(2-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛將2-氟苯甲醛(248.23mg 210μl,2mmol)和3,4-二氯苯酚的混合物與碳酸鉀在5mL二甲基乙酰胺中一起在90℃攪拌12小時(shí)。反應(yīng)混合物用20ml的水稀釋?zhuān)⒂?5mL乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，之后用硫酸鈉干燥，真空濃縮，在未經(jīng)進(jìn)一步純化的情況下產(chǎn)物為棕色油。步驟B通用過(guò)程1NMR(DMSO-d6,δ)7.73(s,1H),7.59(m,2H),7.46(t,1H),7.34(m,2H),7.02(m,2H)MS(ESI)計(jì)算365，實(shí)測(cè)364(M-H)-實(shí)施例22制備5-(4-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 應(yīng)用制備5-(2-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮的方法(實(shí)施例21)制備5-(4-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
MS(ESI)計(jì)算365，實(shí)測(cè)364(M-H)-
實(shí)施例23制備5-(2,5-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 應(yīng)用制備5-(3,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮的方法(實(shí)施例20)制備5-(2,5-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ)7.88(s,1H),7.70-7.66(m,2H),7.64-7.60(m,2H),7.42-7.34(m,2H),7.12-7.10(m,2H),6.90(brs,1H)MS(ESI)計(jì)算553，實(shí)測(cè)552(M-H)-
實(shí)施例24制備5-(2,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 應(yīng)用制備5-(3,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮的方法(實(shí)施例20)制備5-(2,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮MS(ESI)計(jì)算553，實(shí)測(cè)552(M-H)-在隨后的實(shí)施例25-28中，應(yīng)用下述的通用過(guò)程2通用過(guò)程2偶合繞丹寧得到醛將適當(dāng)取代的醛(1當(dāng)量)、繞丹寧(1當(dāng)量)和乙二胺二乙酸(1當(dāng)量)的甲醇溶液加熱回流1-3小時(shí)。將所得的沉淀分離并分別用甲醇、水、10％硫酸氫鈉水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，然后風(fēng)干。
反應(yīng)通常在0.1毫摩爾水平進(jìn)行。
實(shí)施例25制備5-(2-(3,4-二氯芐硫基)-3H-嘧啶-4-酮-6-基次甲基)繞丹寧 步驟A制備醛向0.75g(3.7mmol)6-二甲氧基甲基-2-巰基-3H-嘧啶-4酮的DMF溶液中懸浮有0.66g碳酸鉀的懸浮液中加入0.512mL(3.7mmol)3,4-二氯芐基氯。將該懸浮液靜置2天?；旌衔镉?0mL乙酸乙酯和40mL 10％硫酸氫鈉水溶液稀釋。通過(guò)過(guò)濾分離出沉淀并用水洗滌，得到1.0g純縮醛。
將0.8g6-二甲氧基甲基二2-(3,4-二氯芐硫基)-3H-嘧啶-4酮在70％三氟乙酸水溶液中的溶液攪拌12小時(shí)。溶液用固體碳酸氫鈉中和，然后用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物用1∶1的醚∶己烷研制得到600g純產(chǎn)物。步驟B通用過(guò)程2通用過(guò)程2后得到5-(2-(3,4-二氯芐硫基)-3H-嘧啶-4-酮-6-基次甲基)繞丹寧。
實(shí)施例26制備5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧 步驟A制備醛將1.66g(7.98mmol)4-二甲氧基甲基嘧啶-2-硫酮鈉鹽、2.7g碳酸鉀和α,3,4-三氯甲苯的懸浮液攪拌2天?；旌衔飪A入水中并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，并濃縮，最后得到1.65g巰基縮醛產(chǎn)物。
將0.8g所述的縮醛在5ml濃鹽酸的懸浮液回流約5分鐘，直到溶液澄清。溶液冷卻后用水稀釋?zhuān)蔑柡吞妓釟溻c水溶液中和，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層干燥(無(wú)水硫酸鈉)并濃縮，得到100mg目的醛。步驟B通用過(guò)程2通用過(guò)程2后得到5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧。
實(shí)施例27制備5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4基次甲基)繞丹寧
向攪拌的5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧(實(shí)施例25,0.3mmol)和甲苯(5ml)的懸浮液中加入2,6-二甲基-1,4-二氫-3,5-吡啶二甲酸二乙基酯(109mg,0.39mmol)和0.3克活性硅膠。將混合物加熱到80℃并持續(xù)20分鐘，在保持溫?zé)釙r(shí)過(guò)濾。濾餅用乙酸乙酯洗滌并將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物再溶于乙酸乙酯中，并用1N鹽酸水溶液萃取。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并濃縮得到11mg純產(chǎn)物。
實(shí)施例28制備5-(3-氰基-2-(3,4-二氯芐硫基)吡啶-6-基次甲基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛將0.2g(1mmol)3-氰基-6-二甲氧基甲基-吡啶-2-硫醇、過(guò)量碳酸鉀和α,3,4-三氯甲苯(3mmol)的乙腈懸浮液加熱到75℃并持續(xù)10分鐘。Tlc證實(shí)反應(yīng)結(jié)束。將混合物傾入水中并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并濃縮，得到固體巰基縮醛并用己烷洗滌。
所述的縮醛溶于氯仿(2ml)并加入2mL 50％的三氟乙酸水溶液。16小時(shí)后，TLC顯示反應(yīng)接近結(jié)束?；旌衔镎舭l(fā)至干并立即進(jìn)入步驟B(核磁共振圖譜表明其與理論結(jié)構(gòu)一致)。步驟B通用過(guò)程1通用過(guò)程1后得到5-(3-氰基-2-(3,4-二氯芐硫基)吡啶-6-基次甲基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):8.12(d,1H),7.68(d,1H),7.53(d,1H),7.48(d,1H),7.38-7.34(m,1H),7.31(s,1H),4.80(s,1H)實(shí)施例29制備5-(3-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮 步驟A制備醛向3-羥基苯甲醛的乙腈溶液中加入碳酸鉀(1.5當(dāng)量)，隨后加入3,4-二氯芐基氯(3當(dāng)量)。得到的反應(yīng)混合物加熱到90℃并持續(xù)2-16小時(shí)，過(guò)濾掉沉淀。濾液用EtOAc稀釋?zhuān)盟礈欤昧蛩徕c干燥并減壓濃縮得到粗產(chǎn)物。通過(guò)重結(jié)晶從CH2Cl2/己烷溶液系統(tǒng)中得到純?nèi)２襟EB通用過(guò)程1通用過(guò)程1后得到5-(3-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6,δ):7.69(d,2H),7.61(d,1H),7.43-7.31(m,3H),7.12-7.08(m,2H),6.96(d,1H),5.11(s,2H)MS(ESI)計(jì)算378.98，實(shí)測(cè)378(M-H)-
實(shí)施例30制備化合物1將2-(4-甲基苯硫基)-5-硝基苯甲醛(1.00g,3.66mmol)、2,4-噻唑烷二酮(1.72g,14.7mmol)和哌啶(0.14mL,1.5mmol)在乙醇(40mL)中回流加熱26小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，通過(guò)過(guò)濾收集沉淀析出的晶體，得到化合物1(577mg,42％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.38(s,3H),7.07(d,J=8.8Hz,1H),7.37(d,J=8.1Hz,2H),7.49(d,J=7.9Hz,2H),7.89(s,1H),8.14(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),8.22(d,J=2.2Hz,1H),12.8(br s,1H)FABMS m/z 373(M+H)+C17H14N2O4S2=372實(shí)施例31制備化合物2將化合物1(200mg,0.538mmol)溶解在丙酮(30mL)中，將該溶液與三氯化鈦(20％水溶液，4mL)混合，隨后在室溫下攪拌30分鐘。向反應(yīng)溶液加入飽和碳酸氫鈉水溶液，混合物用乙酸乙酯萃取兩次。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物從乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶得到化合物2(69mg,38％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.21(s,3H),5.86(br s,2H),6.70(dd,J=8.4,2.6Hz,1H),6.82(d,J=2.4Hz,1H),6.89(d,J=8.3Hz,2H),7.06(d,J=8.1Hz,2H),7.33(d,J=8.4Hz,1H),8.06(s,1H),12.5(br s,1H)FABMS m/z 342(M+)C17H14N2O2S2=342
實(shí)施例32制備化合物3化合物2(20mg,0.058mmol)溶解在二甲基甲酰胺(1mL)中，向溶液中加入乙酸酐(1mL)和三乙胺(0.016mL,0.12mmol)，隨后在室溫下攪拌50分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物通過(guò)制備性薄層色譜法(9/1氯仿/甲醇)提純得到化合物3(7.0mg,31％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.08(s,3H),2.25(s,3H),7.07(d,J=8.3Hz,2H),7.14(d,J=8.3Hz,2H),7.45(d,J=8.6Hz,1H),7.58(dd,J=8.4,2.2Hz,1H),8.08(s,1H),8.09(d,J=2.4Hz,1H),10.3(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 385(M+H)+C19H16N2O3S2=384實(shí)施例33制備化合物4在冰冷卻下，將化合物1(100mg,0.269mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)和甲醇(4mL)的混合溶劑中，將溶液與m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，100mg,0.289mmol)混合，隨后在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)溶液與10％亞硫酸氫鈉水溶液混合并用氯仿萃取。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯研制得到化合物4(86mg,82％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d3)δ2.30(s,3H),7.32(d,J=8.1Hz,2H),7.48(d,J=8.3Hz,2H),7.88(s,1H),8.20(d,J=2.2Hz,1H),8.32(d,J=8.6Hz,1H),8.50(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 387(M-H)-C17H12N2O5S2=388
實(shí)施例34制備化合物5化合物1(20mg,0.054mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)和甲醇(1mL)的混合溶劑中，將溶液與m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，187mg,0.540mmol)混合，隨后在室溫下攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液與10％亞硫酸氫鈉水溶液混合并用氯仿-甲醇(9∶1)萃取四次。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物通過(guò)制備性薄層色譜法(6∶1氯仿/乙腈)提純得到化合物5(10mg,46％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.36(s,3H),7.43(d,J=8.3Hz,2H),7.74(d,J=8.4Hz,2H),8.06(s,1H),8.28(br s,1H),8.49(s,2H),12.9(br s,1H)FABMS m/z 403(M-H)-C17H12N2O6S2=404實(shí)施例35制備化合物62-(4-氯苯硫基)苯甲醛(249mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.5mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流3小時(shí)。將反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1mL)，之后用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯研制得到化合物6(274mg,70％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.24(d,J=8.4Hz,2H),7.42(d,J=8.6Hz,2H),7.5-7.6(m,4H),8.03(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 348(M+H)+C16H1035ClNO2S2=347
實(shí)施例36制備化合物7在冰冷卻下，將化合物6(20mg,0.057mmol)懸浮在二氯甲烷(5mL)中，懸浮液與m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，22mg,0.063mmol)混合，隨后在室溫下攪拌20分鐘。向反應(yīng)溶液加入10％亞硫酸氫鈉水溶液，混合物用氯仿/甲醇(9∶1)萃取。有機(jī)層用碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物7(15mg,72％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.55(d,J=9.0Hz,2H),7.59(d,J=9.0Hz,2H),7.6-7.8(m,2H),7.9-8.0(m,2H),8.02(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 364(M+H)+C16H1035ClNO3S2=363實(shí)施例37制備化合物8在冰冷卻下，將化合物6(20mg,0.057mmol)懸浮在二氯甲烷(5mL)中，懸浮液與m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，200mg,0.57mmol)混合，隨后在室溫下攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入10％亞硫酸氫鈉水溶液，混合物用氯仿/甲醇(9∶1)萃取。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物8(16mg,74％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.60(d,J=7.5Hz,1H),7.68(d,J=8.8Hz,2H),7.7-7.8(m,1H),7.81(d,J=8.8Hz,2H),7.87(td,J=7.7,1.3Hz,1H),8.11(s,1H),8.27(dd,J=7.9,1.3Hz,1H),12.8(br s,1H)
FABMS m/z 380(M+H)+C16H1035ClNO4S2=379實(shí)施例38制備化合物94-(4-甲基苯硫基)-3-硝基苯甲醛(273mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.40mL,0.40mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流19小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，收集過(guò)濾析出的晶體得到化合物9(175mg,47％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.41(s,3H),6.92(d,J=8.6Hz,1H),7.40(d,J=7.9Hz,2H),7.54(d,J=8.3Hz,2H),7.72(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),7.73(s,1H),8.46(d,J=1.8Hz,1H),12.7(br s,1H),FABMS m/z 373(M+H)+C17H12N2O4S2=372實(shí)施例39制備化合物102-苯氧基苯甲醛(合成，28(1995))(198mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物10(199mg,67％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.95(d,J=8.1Hz,1H),7.05(d,J=7.5Hz,2H),7.20(t,J=7.3Hz,1H),7.32(t,J=7.7Hz,1H),7.4-7.5(m,3H),7.58(dd,J=7.7,1.3Hz,1H),7.95(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 298(M+H)+C16H11NO3S=297
實(shí)施例40制備化合物113-苯氧基苯甲醛(0.712mL,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流10小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物11(141mg,47％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.0-7.3(m,5H),7.35(d,J=7.9Hz,1H),7.44(dd,J=8.4,7.5Hz,2H),7.54(t,J=7.9Hz,1H),7.82(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 298(M+H)+C16H11NO3S=297實(shí)施例41制備化合物123-(4-甲基苯氧基)苯甲醛(0.193mL,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流7小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物從乙醇/乙酸乙酯重結(jié)晶得到化合物12(98mg,32％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),6.9-7.0(m,3H),7.12(t,J=2.0Hz,1H),7.23(d,J=8.4Hz,2H),7.29(br s,J=7.9Hz,1H),7.45(t,J=7.9Hz,1H),7.49(s,1H)FABMS m/z 312(M+H)+C17H13NO3S=311
實(shí)施例42制備化合物133-(3,4-二氯苯氧基)苯甲醛(0.198mL,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流7小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯研制得到化合物13(252mg,69％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.0-7.2(m,2H),7.25(t,J=2.0Hz,1H),7.38(d,J=7.7Hz,1H),7.38(d,J=2.8Hz,1H),7.52(t,J=8.0Hz,1H),7.53(s,1H),7.66(d,J=8.8Hz,1H)FABMS m/z 366(M+H)+C16H9ClNO3S=365實(shí)施例43制備化合物144-苯氧基苯甲醛(0.175mL,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流6小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用己烷/二異丙醚研制得到化合物14(252mg,85％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.0-7.2(m,4H),7.23(t,J=7.3Hz,1H),7.4-7.5(m,2H),7.62(d,J=8.8Hz,2H),7.78(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 298(M+H)+C16H11NO3S=297
實(shí)施例44制備化合物15氬氣氛中，將4-氟苯甲醛(0.53mL,5.0mmol)和對(duì)苯酚(648mg,6.0mmol)溶解在二甲基乙酰胺(8mL)中，并且向溶液中加入碳酸鉀(828mg,6.0mmol)和氧化銅(95mg,0.50mmol)，混合物加熱回流1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用0.5N氫氧化鈉水溶液、水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(6∶1己烷/乙酸乙酯)提純得到4-(4-甲基苯氧基)苯甲醛(697mg,66％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.37(s,3H),6.98(d,J=8.4Hz,2H),7.03(d,J=8.6Hz,2H),7.21(d,J=8.6Hz,2H),7.82(d,J=9.0Hz,1H),9.91(s,1H)FABMS m/z 213(M+H)+C14H12O2=212這樣獲得的4-(4-甲基苯氧基)苯甲醛(212mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流6小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物15(252mg,81％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),7.01(d,J=8.4Hz,2H),7.06(d,J=8.8Hz,2H),7.25(d,J=8.6Hz,2H),7.60(d,J=8.8Hz,2H),7.76(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 312(M+H)+C17H13NO3S=311
實(shí)施例45制備化合物16(1)氬氣氛中，將5-硝基水楊醛(334mg,2.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(5mL)中，將溶液與芐基溴(0.238mL,2.00mmol)和氫化鈉(88mg,2.4mmol)混合,70℃攪拌13小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到2-芐氧基-5-硝基苯甲醛(337mg,66％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.33(s,2H),7.18(d,J=9.2Hz,1H),7.4-7.5(m,5H),8.42(dd,J=9.2,2.9Hz,1H),8.73(d,J=2.9Hz,1H),10.5(s,1H)FABMS m/z 258(M+H)+C14H11NO4=257(2)這樣獲得的2-芐氧基-5-硝基苯甲醛(257mg,1.00mmol),2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流6小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1ml)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物16(211mg,59％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.42(s,2H),7.3-7.6(m,6H),7.91(s,1H),8.25(d,J=2.6Hz,1H),8.35(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 357(M+H)+C17H12N2O5S=356
實(shí)施例46制備化合物17(1)采用與實(shí)施例45(1)相同的方法，從5-硝基水楊醛(334mg,2.00mmol)和3,4-二氯芐基氯(0.305mL,2.20mmol)得到2-(3,4-二氯芐氧基)-5-硝基硝基苯甲醛(482mg,74％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.27(s,2H),7.14(d,J=9.2Hz,1H),7.30(dd,J=8.3,2.2Hz,1H),7.53(d,J=8.3Hz,1H),7.56(d,J=2.2Hz,1H),8.43(dd,J=9.2,2.9Hz,1H),8.74(d,J=2.9Hz,1H),10.5(s,1H)(2)這樣獲得的2-(3,4-二氯芐氧基)-5-硝基苯甲醛(326mg,1.00mmol)采用與實(shí)施例45(2)相同的方法得到化合物17(142g,33％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.42(s,2H),7.44(d,J=9.4Hz,1H),7.49(dd,J=8.3,2.0Hz,1H),7.72(d,J=8.3Hz,1H),7.80(d,J=1.8Hz,1H),7.90(s,1H),8.26(d,J=2.6Hz,1H),8.36(dd,J=9.4,2.8Hz,1H),12.8(br s,1H)FABMS m/z 425(M+H)+C17H1035Cl2N2O5S=424實(shí)施例47制備化合物18(1)采用與實(shí)施例45(1)相同的方法，從5-硝基水楊醛(334mg,2.00mmol)和4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)得到2-(4-甲基芐氧基)-5-硝基苯甲醛(413mg,76％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.18(s,3H),5.28(s,2H),7.18(d,J=9.4Hz,1H),7.24(d,J=8.1Hz,2H),7.33(d,J=8.1Hz,2H),8.40(dd,J=9.2,2.9Hz,1H),8.72(d,J=2.9Hz,1H),10.5(s,1H)
FABMS m/z 272(M+H)+C15H13NO4=271(2)這樣獲得的2-(4-甲基芐氧基)-5-硝基苯甲醛(271mg,1.00mmol)采用與實(shí)施例45(2)相同的方法得到化合物18(200mg,54％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.32(s,3H),5.35(s,2H),7.24(d,J=7.9Hz,2H),7.38(d,J=7.9Hz,2H),7.47(d,J=9.3Hz,1H),7.88(s,1H),8.24(d,J=2.8Hz,1H),8.34(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 371(M+H)+C18H14N2O5S=370實(shí)施例48制備化合物19(1)采用與實(shí)施例45(1)相同的方法，從3-羥基-4-硝基苯甲醛(334mg,2.00mmol)和4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)得到3-(4-甲基芐氧基)-4-硝基苯甲醛(315mg,58％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.36(s,3H),5.27(s,2H),7.20(d,J=7.9Hz,2H),7.34(d,J=8.1Hz,2H),7.53(dd,J=8.1,1.5Hz,1H),7.64(d,J=1.5Hz,1H),7.92(d,J=8.1Hz,1H),10.0(s,1H)FABMS m/z 272(M+H)+C15H13NO4=271(2)這樣獲得的3-(4-甲基芐氧基)-4-硝基苯甲醛(271mg,1.00mmol)采用與實(shí)施例45(2)相同的方法處理并用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶得到化合物19(95mg,26％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),5.32(s,2H),7.22(d,J=7.9Hz,2H),7.29(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.36(d,J=8.1Hz,2H),7.64(d,J=1.7Hz,1H),7.81(s,1H),8.02(d,J=8.4Hz,1H),12.8(br s,1H)
FABMS m/z 371(M+H)+C18H14N2O5S=370實(shí)施例49制備化合物20(1)采用與實(shí)施例45(1)相同的方法,從4-羥基-3-硝基苯甲醛(334mg,2.00mmol)和4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)得到4-(4-甲基芐氧基)-3-硝基苯甲醛(365mg,67％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.36(s,3H),5.31(s,2H),7.21(d,J=8.1Hz,2H),7.26(d,J=8.8Hz,1H),7.33(d,J=8.1Hz,2H),8.02(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),8.34(d,J=2.0Hz,1H),9.92(s,1H)FABMS m/z 272(M+H)+C15H13NO4=271(2)這樣獲得的4-(4-甲基芐氧基)-3-硝基苯甲醛(271mg,1.00mmol)采用與實(shí)施例45(2)相同的方法處理并用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶得到化合物20(123mg,33％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),5.34(s,2H),7.22(d,J=7.9Hz,2H),7.35(dd,J=8.1Hz,2H),7.60(d,J=9.0Hz,2H),7.81(s,1H),7.84(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),8.15(d,J=2.2Hz,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 371(M+H)+C18H14N2O5S=370實(shí)施例50制備化合物21(1)采用與實(shí)施例45(1)相同的方法，從5-羥基-2-硝基苯甲醛(334mg,2.00mmol)和4-甲基芐基溴(370mL,2.00mmol)得到5-(4-甲基芐氧基)-2-硝基苯甲醛(413mg,76％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.37(s,3H),5.16(s,2H),7.19(dd,J=9.0,2.9Hz,1H),7.21(d,J=7.5Hz,2H),7.31(d,J=8.1Hz,2H),7.41(d,J=2.9Hz,1H),8.15(d,J=9.2Hz,1H),10.5(s,1H)FABMS m/z 272(M+H)+C15H13NO4=271(2)這樣獲得的5-(4-甲基芐氧基)-2-硝基苯甲醛(271mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1NHCL(1mL)，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜提純(19∶1氯仿/乙腈)和制備性薄層色譜法(10∶1氯仿/甲醇)得到化合物21(30mg,8.1％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.38(s,3H),5.16(s,2H),7.04(d,J=2.4Hz,1H),7.09(dd,J=9.2Hz,2.6Hz,1H),7.22(d,J=7.9Hz,1H),7.30(d,J=7.8Hz,2H),8.22(d,J=9.2Hz,1H),8.24(s,1H),9.00(br SR1H)FABMS m/z 371(M+H)+C18H14N2O5S=370實(shí)施例51制備化合物22氬氣氛中，將水楊醛(0.213mL,2.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(5mL)中，向溶液中加入4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)和氫化鈉(88mg,2.4mmol),70℃攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，向其中加入2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mg)、哌啶(0.10mL,1.0mmol)和乙醇(5mL)，加熱回流1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1mL)，然后混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用己烷/二異丙醚研制得到化合物22(542mg,83％通過(guò)兩步得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),5.19(s,2H),7.10(t,J=7.5Hz,1H),7.22(d,J=7.7Hz,2H),7.24(d,J=7.5Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,2H),7.4-7.5(m,2H),8.01(s,1H),12.6(br 1H)FABMS m/z 326(M+H)+C18H15NO3S=325實(shí)施例52制備化合物23氬氣氛中，將5-甲氧基水楊醛(0.249mL,2.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(5mL)中，向溶液中加入4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)和氫化鈉(88mg,2.4mmol),70℃攪拌1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，加入2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mg)、哌啶(0.10mL,1.0mmol)和乙醇(5mL)，加熱回流1.5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，收集過(guò)濾析出的晶體得到化合物23(419mg,59％通過(guò)兩步得到得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),3.75(s,3H),5.12(s,2H),6.90(d,J=2.9Hz,1H),7.05(dd,J=9.0,2.9Hz,1H),7.18(d,J=9.0Hz,1H),7.20(d,J=7.7,2H),7.32(d,J=8.1Hz,2H),7.95(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 356(M+H)+C19H17NO4S=355實(shí)施例53制備化合物24
氬氣氛中，將5-氯水楊醛(313mg,2.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(5mL)中，向溶液中加入4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)和氫化鈉(88mg,2.4mmol),70℃攪拌0.5小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，加入2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mg)、哌啶(0.10mL,1.0mmol)和乙醇(5mL)，加熱回流4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(5mL)，然后混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用己烷/二異丙醚研制得到化合物24(428mg,60％通過(guò)兩步得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),5.19(s,2H),7.21(d,J=8.3Hz,2H),7.27(d,J=9.0Hz,1H),7.34(d,J=8.4Hz,1H),7.36(d,J=2.9Hz,1H),7.51(dd,J=9.0,2.8Hz,1H),7.87(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 360(M+H)+C18H1435ClNO3S=359實(shí)施例54制備化合物25氬氣氛中，將5-溴水楊醛(1.00g,5.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(10mL)中，向溶液中加入4-甲基芐基溴(925mg,5.00mmol)和氫化鈉(220mg,5.50mmol),70℃攪拌0.5小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，加入2,4-噻唑烷二酮(702mg,6.00mmol)、哌啶(0.50mL,5.0mmol)和乙醇(40mL)，加熱回流4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(5mL)，然后混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用己烷/二異丙醚研制得到化合物25(1.27mg,63％通過(guò)兩步得到得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),5.19(s,3H),7.21(d,J=8.8Hz,3H),7.34(d,J=8.0Hz,2H),7.48(d,J=2.4Hz,1H),7.62(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.86(s,J=1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 406,404(M+H)+C18H1479BrNO3S=403實(shí)施例55制備化合物262-二苯基氨基苯甲醛(273mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.50mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(2mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯研制得到化合物26(293mg,79％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.93(d,J=7.2Hz,2H),7.1-7.2(m,6H),7.3-7,5(m,6H),7.67(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 373(M+H)+C22H16N2O2S=372實(shí)施例56制備化合物272-苯基苯甲醛(Tetrahedron Lett.,38(32):5575(1997))(273mg,1.50mmol)、2,4-噻唑烷二酮(263mg,2.25mmol)和哌啶(0.15mL,1.5mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流3小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(2mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙基醚研制得到化合物27(344mg,82％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.3-7.4(m,2H),7.4-7.7(m,8H),12.6(brs,1H)FABMS m/z 282(M+H)+C16H11BrNO2S=281實(shí)施例57制備化合物283-苯基苯甲醛(Tetrahedron Lett.,38(32):5575(1997))(269mg,1.48mmol)、2,4-噻唑烷二酮(259mg,2.22mmol)和哌啶(0.15mL,1.5mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流3小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(2mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙基醚研制得到化合物28(355mg,85％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.3-7.8(m,8H),7.89(s,2H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 282(M+H)+C16H11NO2S=281實(shí)施例58制備化合物294-苯基苯甲醛(182mg,1.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.5mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(6mL)中加熱回流3小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物29(187mg,67％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.4-7.6(m,3H),7.70(d,J=8.4Hz,2H),7.75(d,J=7.2Hz,2H),7.85(s,1H),7.86(d,J=8.1Hz,2H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 282(M+H)+C16H11NO2S=281實(shí)施例59制備化合物304-(α-羥基芐基)苯甲醛(有機(jī)化學(xué)雜志，62:4643(1997))(1.35g,6.37mmol)、2,4-噻唑烷二酮(894mg,7.64mmol)和哌啶(0.64mL,6.4mmol)在乙醇(6mL)中加熱回流10小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(7mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物30(1.73g,87％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.75(d,J=2.7Hz,1H),6.03(d,J=2.7Hz,1H),7.21(tt,J=7.2,1.5Hz,1H),7.31(t,J=7.2Hz,2H),7.38(d,J=7.3Hz,2H),7.53(s,4H),7.75(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 312(M+H)+C17H13NO3S=311實(shí)施例60制備化合物31化合物30(622mg,2.00mmol)溶解在乙腈(80mL)中，向該溶液中加入二氧化錳(2.61g)并將混合物加熱回流4.5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫并通過(guò)Celite過(guò)濾，減壓蒸發(fā)除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(9∶1氯仿/乙腈)提純，并用二異丙醚研制得到化合物31(73mg,12％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.58(t,J=7.5Hz,2H),7.6-7.8(m,5H),7.86(d,J=7.9Hz,2H),7.87(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 310(M+H)+C17H11NO3S=309實(shí)施例61制備化合物32將化合物30(115mg,0.39mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中，向溶液中加入三氟乙酸(0.30mL,3.9mmol)和三乙基硅烷(0.81mL,5.1mmol)，并將混合物加熱回流12小時(shí)。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用丙酮/己烷重結(jié)晶得到化合物32(70mg,61％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.00(s,2H),7.1-7.3(m,5H),7.39(d,J=8.1Hz,2H),7.52(d,J=8.1Hz,2H),7.75(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 296(M+H)+C17H13NO2S=295實(shí)施例62制備化合物334-甲?；郊状?有機(jī)化學(xué)雜志,63:9924(1998))(576mg,2.00mmol)、2,4-噻唑烷二酮(218mg,2.40mmol)和哌啶(0.20mL,2.0mmol)在乙醇(15mL)中加熱回流9小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(2mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯/二異丙醚研制得到化合物33(684mg,78％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.61(s,1H),7.2-7.4(m,10H),7.37(d,J=8.4 Hz,2H),7.55(d,J=8.4Hz,2H),7.76(s,1H),1 2.6(br s,1H)FABMS m/z 388(M+H)+C23H17NO3S=387實(shí)施例63制備化合物34將化合物33(219mg,0.566mmol)溶解在二氯甲烷(15mL)中，向溶液中加入三氟乙酸(0.385mL,0.50mmol)和三乙基硅烷(0.80mL,0.50mmol)，在室溫下攪拌10分鐘。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物從己烷中重結(jié)晶得到化合物34(198mg,94％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.70(s,1H),7.1-7.4(m,12H),7.55(d,J=8.3Hz,2H),7.75(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 372(M+H)+C23H17NO2S=371實(shí)施例64制備化合物35氬氣氛中，將二苯胺(338mg,2.00mmol)和4-溴芐基溴(500mg,2.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(8mL)中，在冰冷卻下，向溶液中加入氫化鈉(88mg,2.2mmol)，在室溫下攪拌4小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(14∶1己烷/丙酮)提純得到N-(4-溴芐基)二苯胺(478mg,71％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.93(s,2H),6.94(tt,J=7.3,1.1Hz,2H),7.03(dd,J=8.8,1.1Hz,4H),7.2-7.3(m,6H),7.42(d,J=8.6Hz,2H)
FABMS m/z 339,337(M+)C19H1679BrN=337氬氣氛中，將所得到的N-(4-溴芐基)二苯胺(440mg,1.30mmol)溶解在四氫呋喃(6mL)中并且冷卻到-78℃。向其中加入1.6M丁基鋰己烷溶液(1.3mL,2.0mmol),5分鐘后再加入二甲基甲酰胺(0.20mL,2.6mmoL)，再攪拌5分鐘。向反應(yīng)溶液中加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(9∶1己烷/乙酸乙酯)提純得到4-(N,N-二苯基氨基甲基)苯甲醛(213mg,57％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.06(s,2H),6.96(t,J=7.3Hz,2H),7.03(d,J=8.6Hz,4H),7.25(dd,J=8.6,7.3Hz,4H),7.52(d,J=8.4Hz,2H),7.83(d,J=8.3Hz,2H),9.97(s,1H)FABMS m/z 287(M+)C20H17NO=287所得到的4-(N,N-二苯基氨基甲基)苯甲醛(198mg,0.690mmol)、2,4-噻唑烷二酮(117mg,1.10mmol)和哌啶(0.068mL,0.69mmol)在乙醇(6ml)中加熱回流5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，收集過(guò)濾析出的晶體得到化合物35(240mg,90％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.06(s,2H),6.92(t,J=7.2Hz,2H),7.05(d,J=8.4Hz,4H),7.25(t,J=7.7Hz,4H),7.48(d,J=8.3Hz,2H),7.55(d,J=8.4Hz,2H),7.75(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 386(M+)C23H18N2O2S=386實(shí)施例65制備化合物36
氬氣氛中，將4-溴苯胺(344mg,2.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(5mL)中，在冰冷卻下，向溶液中加入氫化鈉(200mg,5.00mmol)和芐基溴(0.52mL,4.4mmol)，在室溫下攪拌11小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯重結(jié)晶得到4-溴-N,N-二芐基苯胺(442mg,63％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.63(s,2H),6.59(d,J=9.0,2H),7.2-7.4(m,12H)FABMS m/z 353,351(M+)C20H1879BrN=351氬氣氛中，將所得的4-溴-N,N-二芐基苯胺(425mg,1.21mmol)溶解在四氫呋喃(5mL)中并冷卻到-78℃。向其中加入1.6M丁基鋰己烷溶液(1.1mL,1.8mmol),5分鐘后再加入二甲基甲酰胺(0.186mL,2.4mmoL)，再攪拌5分鐘。向溶液中加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用飽和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(9∶1己烷/乙酸乙酯)得到4-(二芐基氨基)苯甲醛(192mg,53％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ4.75(s,4H),6.79(t,J=9.0Hz,2H),7.2-7.4(m,10H),7.69(d,J=9.0,2H),9.73(s,1H)FABMS m/z 302(M+)C21H19NO=301所得到的4-(二芐基氨基)苯甲醛(181mg,0.601mmol)、2,4-噻唑烷二酮(105mg,0.900mmol)和哌啶(0.059mL,0.60mmol)在乙醇(7mL)中加熱好了回流5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(0.6mL)，然后將混合物用乙酸乙酯萃取。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚研制得到化合物36(207mg,86％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ4.81(s,4H),6.81(d,J=8.8Hz,2H),7.2-7.4(m,12H),7.61(s,1H),12.3(br s,1H)FABMS m/z 400(M+)C24H20N2O2S=400實(shí)施例66制備化合物395-硝基-2-[(4-三氟甲基)苯氧基]苯甲醛(311mg,1.00mmol)、2,4噻唑烷二酮(234mg,2.00mmol)和哌啶(0.10mL,1.0mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流13小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(15∶1氯仿/乙腈)提純，用二異丙醚研制得到化合物39(146mg,36％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.16(d,J=9.2Hz,1H),7.45(d,J=8.4Hz,2H),7.89(d,J=8.4Hz,2H),7.93(s,1H),8.30(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),8.39(d,J=2.2Hz,1H),12.8(br s,1H)FABMS m/z 411(M+H)+C17H9F3N2O5S=410實(shí)施例67制備化合物40氬氣氛中，將2-溴-5-羥基苯甲醛(201mg,1.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(3mL)中，向該溶液中加入4-甲基芐基溴(185mg,1.00mmol)和氫化鈉(48mg,1.2mmol)，隨后在70℃攪拌3小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，加入2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.5mmo1)、哌啶(0.10mL,1.0mmol)和乙醇(6mL)，之后加熱回流13小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(5mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，之后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(20∶1氯仿/乙睛)提純，用二異丙醚研制得到化合物40(142mg,35％通過(guò)兩步得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.31(s,3H),5.13(s,2H),7.0-7.1(m,2H),7.21(d,J=7.7Hz,2H),7.34(d,J=7.7Hz,1H),7.69(d,J=8.6Hz,1H),7.79(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 406,404(M+)C18H1479BrNO3S=403實(shí)施例68制備化合物41氬氣氛中，將2,5-二羥基苯甲醛(138mg,1.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(35mL)中，向該溶液中加入4-甲基芐基溴(370mg,2.00mmol)和氫化鈉(88mg,2.2mmol)，隨后在70℃攪拌2小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，加入2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.5mmol)、哌啶(0.10mL,1.0mmol)和乙醇(8mL)，之后加熱回流2小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(5mL)，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，之后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用己烷/二異丙醚研制，得到化合物41(340mg,76％通過(guò)兩步得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.30(s,6H),5.05(s,2H),5.11(s,2H),6.93(br s,1H),7.1-7.2(m,2H),7.20(d,J=7.7Hz,4H),7.32(d,J=7.9Hz,4H),7.93(s,1H),12.6Hz,1H)FABMS m/z 446(M+H)+C26H23NO4S=445實(shí)施例69制備化合物42氬氣氛中，5′-溴-2′-羥基苯乙酮(215mg,1.00mmol)溶解在二甲基甲酰胺(5mL)中，向溶液中加入4-甲基芐基溴(185mg,1.00mmol)和碳酸鉀(152mg,1.1mmol)，隨后在70℃攪拌5小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用0.1N氫氧化鈉水溶液、水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，加入2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.5mmol)和乙酸鈉(123mg,1.0mmol)，隨后在190℃攪拌3-5小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(1mL)，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和飽和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(30∶1氯仿/乙睛)提純得到化合物42(102mg,24％通過(guò)兩步得到)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ2.35(s,3H),2.61(s,3H),6.88(d,J=9.0Hz,1H),7.1-7.3(m,5H),7.41(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.14(br s,1H)FABMS m/z 419,418(M+H)+C19H1679BrNO3S=417
實(shí)施例70制備化合物435-溴-2-(4-氯苯硫基)噻吩-3-羧基醛(167mg,0.500mmol)、2,4-噻唑烷二酮(88mg,0.75mmol)和哌啶(0.049mL,0.5mmol)在乙醇(5mL)加熱回流6小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水和1N HCL(0.5mL)，混合物用氯仿萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二異丙醚/乙酸乙酯研磨，得到化合物43(138mg,64％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.32(d,J=8.6Hz,2H),7.47(d,J=8.6Hz,2H),7.82(s,1H),7.98(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 43 3,431(M+)C14H779Br35ClNO2S3=431實(shí)施例71制備化合物44氬氣氛中，將化合物43(22mg,0.051mmol)溶解在二甲氧基乙烷(2mL)中，向該溶液中加入四(三苯基膦)鈀(6mg,10mol％)、碳酸鈉水溶液(0.5M,0.6mL)和苯基硼酸(31mg,0.25mmol)，加熱回流12小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻到室溫，加入水，混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用制備性薄層色譜(10∶1氯仿/丙酮)提純得到化合物44(8.3mg,38％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.17(d,J=8.4Hz,2H),7.2-7.5(m,8H),7.91(s,1H),8.16(br s,1H)FABMS m/z 429(M+)C20H1235ClNO2S3=429
實(shí)施例72制備化合物45氬氣氛中，將化合物43(32mg,0.075mmol)溶解在四氫呋喃(5mL)并冷卻至-78℃。加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，0.3mL)，攪拌15分鐘。反應(yīng)溶液與水混合并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用制備性薄層色譜(10∶1氯仿/丙酮)提純得到化合物45(3.8mg,14％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.24(d,J=4.2Hz,1H),7.27(d,J=9.0Hz,2H),7.30(d,J=3.9Hz,1H),7.31(d,J=9.2Hz,2H),7.91(s,1H),8.42(br s,1H)FABMS m/z 353(M+)C14H835ClNO2S3=353實(shí)施例73制備化合物46氬氣氛中，將三(4-溴苯基)胺(964mg,2.00mmol)溶解在四氫呋喃(10mL)中，并冷卻至-78℃。加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，1.5mL,2.4mmol)，在-60℃或更低的溫度下滴加二甲基甲酰胺(0.19mL,2.4mmol)，攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，并用乙酸乙酯萃取產(chǎn)物。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯=8/1)提純得到4-(二(4-溴苯基)氨基)苯甲醛(377mg,44％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.02(d,J=8.8Hz,4H),7.04(d,J=8.6Hz,2H),7.45(d,J=8.8Hz,4H),7.71(d,J=8.8Hz,2H),9.84(s,1H)FABMS m/z 433,431,429(M+)C19H1379BR2NO=429
將4-(二(4-溴苯基)氨基)苯甲醛(356mg,0.826mmol)、2,4-噻唑烷二酮(145mg,1.24mmol)和哌啶(0.083mL,0.83mmol)在乙醇(8mL)中加熱回流4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻至室溫，混入水和1N HCL(1mL)，用氯仿萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(洗脫溶劑氯仿/乙腈=15/1)提純，用己烷研制得到化合物46(388mg,89％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.03(d,J=8.8Hz,2H),7.06(d,J=8.8Hz,4H),7.51(d,J=8.8Hz,2H),7.54(d,J=8.8Hz,4H),7.70(s,1H),12.5(br s,1H)FABMS m/z 532,530,528(M+)C22H1479BR2N2O2S=528實(shí)施例74制備化合物47氬氣氛中，將化合物25(40mg,0.10mmol)溶解在1,2-二甲氧基乙烷(4mL)中，向其中加入苯基硼酸(24mg,0.20mmol)、2mol/L碳酸鈉水溶液(0.15mL)、水(0.5mL)和四(三苯基膦)鈀(6mg,5mol％),產(chǎn)物加熱回流8小時(shí)。將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，混入水和1N HCL(1mL)，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用制備性薄層色譜(展開(kāi)溶劑氯仿/乙腈=12/1)提純，用異丙醚研制得到化合物47(27mg,67％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.32(s,3H),5.25 2H),7.23(d,J=8.1Hz,2H),7.3-7.4(m,4H),7.49(t,J=7.6Hz,2H),7.63(d,J=8.6Hz,2H),7.64(d,J=1.7Hz,1H),7.76(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),8.03(s,1H),12.6(br s,1H)
FABMS m/z 401(M+)C24H19NO3S=401實(shí)施例75制備化合物48用2-噻吩基硼酸(26mg,0.20mmol)代替苯基硼酸，采用與實(shí)施例74的相同方法從化合物25(40mg,0.10mmol)制備化合物48(7.5mg,18％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.32(s,3H),5.23(s,2H),7.14(dd,J=5.0,3.7Hz,1H),7.22(d,J=7.9Hz,2H),7.30(d,J=8.8Hz,1H),7.36(d,J=8.1Hz,2H),7.44(d,J=3.5Hz,1H),7.53(d,J=4.8Hz,1H),7.62(d,J=2.0Hz,1H),7.75(dd,J=8.8,2.0Hz,1H),7.98(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 407(M+)C22H17NO3S2=407實(shí)施例76制備化合物49氬氣氛中，將三(4-溴苯基)胺(7.23g,15.0mmol)溶解在四氫呋喃(100mL)中并冷卻至-78℃。加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，34mL,54mmol)，在-60℃或更低的溫度下滴加二甲基甲酰胺(4.6mL,60mmol)，攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯=4/1，隨后用氯仿/乙腈=30/1)提純得到三(4-甲?；交?胺(2.97g,60％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.25(d,J=8.8Hz,6H),7.85(d,J=8.8Hz,6H),9.95(s,3H)FABMS m/z 330(M+H)+C21H15NO3=329
將三(4-甲?；交?胺(165mg,0.502mmol)溶解在甲醇(8mL)和氯仿(5mL)中。在冰冷卻下，向溶液中加入硼氫化鈉(9.5mg,0.25mmol)，在室溫下攪拌15分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(洗脫溶劑氯仿/乙腈=20/1-10/1)提純得到4-((二(4-羥甲基)苯基)氨基)苯甲醛(107mg,64％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.46(br s,2H),4.66(s,4H),6.99(d,J=8.8Hz,2H),7.13(d,J=8.4Hz,4H),7.32(d,J=8.4Hz,4H),7.64(d,J=8.8Hz,2H),9.75(s,1H)FABMS m/z 333(M+)C21H19NO3=333將4-((二(4-羥甲基)苯基)氨基)苯甲醛(100mg,0.300mmol),2,4-噻唑烷二酮(53mg,0.45mmol)和哌啶(0.030mL,0.30mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流3小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻至室溫，混入水和1NHCL(1mL)，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，用己烷研制得到化合物49(113mg,87％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)4.48(d,J=4.4Hz,4H),5.16(br t,J=5.1Hz,2H),6.89(d,J=8.8Hz,2H),7.09(d,J=8.3Hz,4H),7.32(d,J=8.5Hz,4H),7.44(d,J=9.0Hz,2H),7.66(s,1H),12.4(br s,1H)FABMS m/z 432(M+)C24H20N2O4S=432
實(shí)施例77制備化合物50氬氣氛中,將實(shí)施例64得到的N-(4-溴芐基)二苯基胺(169mg,0.500mmol)溶解在二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入磷酰氯(0.116mL,1.25mmol),100℃攪拌30分鐘。將反應(yīng)溶液冷卻至室溫并傾入到飽和乙酸鈉水溶液中，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(洗脫溶劑己烷/乙酸乙酯=4/1)提純，得到4-(N-(4-溴芐基)-N-苯基氨基)苯甲醛(159g,87％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)4.98(s,2H),6.78(d,J=8.8Hz,2H),7.18(d,J=8.3Hz,2H),7.26(m,1H),7.27(d,J=8.4Hz,2H),7.42(m,2H),7.45(d,J=8.4Hz,2H),7.65(d,J=8.8Hz,2H),9.75(s,1H)FABMS m/z 368,366(M+H)+C20H1679BrNO=365將4-(N-(4-溴芐基)-N-苯基氨基)苯甲醛(153g,0.418mmol)、2,4-噻唑烷二酮(73mg,0.63mmol)和哌啶(0.042mL,0.42mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流3小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻至室溫，混合入水和1N HCL(1mL)，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，用己烷/異丙醚研制得到化合物50(150mg,87％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)5.06(s,2H),6.88(d,J=8.8Hz,2H),7.21(t,J=7.3Hz,1H),7.27(d,J=8.3Hz,2H),7.32(d,J=7.5Hz,2H),7.40(d,J=8.8Hz,2H),7.42(t,J=7.3Hz,2H),7.51(d,J=8.3Hz,2H),7.64(s,1H),12.4(br s,1H)FABMS m/z 466,464(M+)C23H1779BrN2O2S=464
實(shí)施例78制備化合物51冰冷卻下,將化合物43(50mg,0.12mmol)溶解在二氯甲烷(8mL)和甲醇(2mL)的混合溶劑中。加入m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，65mg,0.19mmol)，在室溫下攪拌18小時(shí)。向溶液中加入5％亞硫酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，用甲醇研制得到化合物51(30mg,56％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.73(d,J=8.4Hz,2H),7.75(s,1H),7.84(d,J=8.6Hz,2H),7.98(s,1H),12.8(br s,1H)FABMS m/z 450,448(M-H)-C14H779Br35Cl1NO3S3=449實(shí)施例79制備化合物52冰冷卻下，將化合物43(50mg,0.12mmol)溶解在二氯甲烷(8mL)和甲醇(2mL)的混合溶劑中。加入m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，398mg,1.2mmol)，在室溫下攪拌17小時(shí)。向溶液中加入5％亞硫酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，用甲醇研制得到化合物52(23mg,41％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.71(d,J=8.6Hz,2H),7.78(s,1H),8.00(s,1H),8.05(d,J=8.6Hz,2H),12.9(br s,1H)FABMS m/z 466,464(M-H)-C14H779Br35ClNO4S3=465
實(shí)施例80制備化合物53將市場(chǎng)上可買(mǎi)得到的5-溴-2-(4-氯苯基硫基)噻吩-3-甲醛(1.00g,2.99mmol)(MAYBRIDGE，目錄號(hào)KM05476)溶解在甲醇(75mL)中。加入p-甲苯磺酸(52mg,0.30mol)，混合物加熱回流1.5小時(shí)。減壓蒸發(fā)除去溶劑至總體積為約30mL。加入水和飽和碳酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑得到5-溴-2-(4-氯苯硫基)-3-(二甲氧基甲基)噻吩(1.12g,100％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.36(s,6H),5.55(s,1H),7.07(s,1H),7.15(d,J=8.6Hz,2H),7.24(d,J=8.8Hz,2H)FABMS m/z 380,378(M+)C13H1279Br35ClO2S2=378氬氣氛中，將5-溴-2-(4-氯苯硫基)-3-(二甲氧基甲基)噻吩(1.04g,2.75mmol)溶解在四氫呋喃(15mL)中，并將混合液冷卻到-78℃。加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，2.5mL,4.1mmol)，攪拌5分鐘。加入干冰(約1g)，然后攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入水和1mol/L氫氧化鈉水溶液使其pH值為10，混合物用醚洗滌。向水相層加入1mol/L鹽酸，使其pH值為3，并用乙酸乙酯萃取水相層。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑。殘余物溶解在四氫呋喃(10mL)中。加入1mol/L鹽酸(2mL)，在室溫下攪拌2小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入水，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用異丙醚研制得2-(4-氯苯基硫基)-3-甲酰基-5-噻吩羧酸(439mg,54％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.50(d,J=8.6Hz,2H),7.62(d,J=8.6Hz,2H),8.06(s,1H),9.68(s,1H)FABMS m/z 299(M+H)+C12H735ClO3S2=298將2-(4-氯苯基硫基)-3-甲?；?5-噻吩羧酸(400mg,1.34mmol)、2,4-噻唑烷二酮(188mg,1.01mmol)和哌啶(0.133mL,1.34mmol)在乙醇(12mL)中加熱回流3.5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，加入1mol/LHCL(1.5mL)，收集過(guò)濾析出的晶體得到化合物53(411mg,77％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.66(d,J=8.4Hz,2H),7.77(d,J=8.4Hz,2H),7.83(s,1H),7.90(s,1H),12.6(br s,1H),13.4(br s,1H),FABMS m/z 396(M-H)-C15H835ClNO4S3=397實(shí)施例81制備化合物54將化合物53(80mg,0.20mmol)溶解在二甲基甲酰胺(3mL)中，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(77mg,0.40mmol)和二乙基胺(0.041mL,0.40mmol)，在室溫下攪拌3小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入水，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用制備性薄層色譜(9∶1氯仿/甲醇)提純得到化合物54(22mg,24％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.06(br s,6H),3.13(br s,2H),3.41(br s,2H),7.41(d,J=8.6Hz,2H),7.47(d,J=8.6Hz,2H),7.69(s,1H),8.00(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 451(M-H)-C19H1735ClN2O3S3=452
實(shí)施例82制備化合物55用苯胺(0.037mL,0.40mmol)代替二乙基胺，采用與實(shí)施例81相同的方法來(lái)得到化合物55(37mg,39％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.13(t,J=7.3Hz,1H),7.37(t,J=7.7Hz,2H),7.60(d,J=8.4Hz,2H),7.68(d,J=8.6Hz,2H),7.71(d,J=7.7Hz,2H),7.84(s,1H),8.04(s,1H),10.3(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 471(M-H)-C21H13ClN2O3S3=472實(shí)施例83制備化合物56用1-甲基哌嗪(0.044mL,0.40mmol)代替二乙胺，采用與實(shí)施例81相同的方法來(lái)得到化合物56(11mg,12％)?；衔?6以鹽酸鹽的形式獲得。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6，鹽酸鹽)δ(ppm)2.80(s,3H),3.25(m,8H),7.46(d,J=8.8Hz,2H),7.49(d,J=8.8Hz,2H),7.69(s,1H),7.98(s,1H)FABMS m/z 478(M-H)-C20H18ClN3O3S3=479實(shí)施例84制備化合物57用嗎啉(0.035mL,0.40mmol)代替二乙胺，采用與實(shí)施例81相同的方法來(lái)得到化合物57(22mg,24％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.32(m,4H),3.55(m,4H),7.43(d,J=8.6Hz,2H),7.47(d,J=8.6Hz,2H),7.69(s,1H),7.98(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 465(M-H)-C19H15ClN2O4S3=466實(shí)施例85制備化合物58將化合物53(36mg,0.090mmol)溶解在二氯甲烷(2mL)和四氫呋喃(2mL)中。向溶液中加入亞硫酰氯(0.032mL,0.36mmol)，將混合物加熱回流2小時(shí)。反應(yīng)溶液用冰冷卻。加入甲醇(1mL)和三乙基胺(0.038mL,0.27mmol)，攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用制備性薄層色譜(9∶1氯仿/甲醇)提純，用異丙醚研制得到化合物58(22mg,24％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.85(s,3H),7.67(d,J=8.6Hz,2H),7.77(d,J=8.4Hz,2H),7.88(s,1H),7.92(s,1H)12.6(br s,1H)FABMS m/z 410(M-H)-C16H1035ClNO4S3=411實(shí)施例86制備化合物59采用與實(shí)施例70相同的方法，通過(guò)市場(chǎng)上可買(mǎi)得到的3-苯氧基噻吩-2-甲醛(204mg,1.00mmol)(MAYBRIDGE，目錄號(hào)KM05428)、2,4-噻唑烷二酮(176mg,1.5mmol)和哌啶(0.099mL,1.0mmol)得到化合物59(260mg,86％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)6.93(d,J=5.5Hz,1H),7.02(dd,J=8.6,1.1Hz,2H),7.15(t,J=7.5Hz,1H),7.39(dd,J=8.6,7.5Hz,2H)7.61(s,1H),7.91(d,J=5.5Hz,1H)FABMS m/z 302(M-H)-C14H9NO3S2=303實(shí)施例87制備化合物60將4-溴噻吩-2-甲醛(2.00g,10.5mmol)溶解在甲醇(80mL)中。加入p-甲苯磺酸(181mg,1.05mmol)，攪拌3小時(shí)。減壓蒸發(fā)除去溶劑直至總體積為約20mL。加入碳酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用乙醚萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑得到4-溴-2-二甲氧基甲基噻吩(2.36mg,100％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.36(s,6H),5.58(s,1H),7.00(t,J=1.0Hz,1H),7.20(d,J=1.3Hz,1H)氬氣氛中，將4-溴-2-二甲氧基甲基噻吩(236mg,1.00mmol)溶解在四氫呋喃(4mL)中并冷卻至-78℃。加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，0.81mL,1.3mmol)和4,4′-二氯聯(lián)苯基二硫醚的四氫呋喃溶液(1.5mL)，攪拌15分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，并用乙醚萃取產(chǎn)物。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸發(fā)除去溶劑。殘余物溶解在四氫呋喃(6mL)和1mol/L鹽酸中，在室溫下攪拌1小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入碳酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物通過(guò)制備性薄層色譜(9∶1己烷/乙酸乙酯)提純得到4-(4-氯苯基硫基)噻吩-2-甲醛(71mg,28％),2,3-二(4-氯苯基硫基)噻吩-5-甲醛(29mg,7.4％)和5-(4-氯苯基硫基)噻吩-2-甲醛(53mg,21％)。
4-(4-氯苯基硫基)噻吩-2-甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.21(d,J=8.8Hz,2H),7.28(d,J=9.0Hz,2H),7.65(d,J=1.5Hz,1H),7.69(d,J=1.4Hz,1H),9.87(d,J=1.3Hz,1H)FABMS m/z 254(M+)C11H735ClOS2=2542,3-二(4-氯苯基硫基)噻吩-5-甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.19(d,J=8.4Hz,2H),7.29(d,J=8.4Hz,2H),7.37(d,J=8.6Hz,2H),7.43(d,J=8.6Hz,2H),7.53(s,1H)9.67(s,1H)FABMS m/z 397(M+H)+C17H1035Cl2OS3=3965-(4-氯苯基硫基)噻吩-2-甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.13(d,J=3.9Hz,1H),7.33(d,J=8.8Hz,2H),7.37(d,J=9.0Hz,2H),7.63(d,J=3.9Hz,1H),9.78(s,1H)FABMS m/z 255(M+H)+C11H735ClOS2=254將4-(4-氯苯基硫基)噻吩-2-甲醛(70mg,0.28mmol)、2,4-噻唑烷二酮(39mg,0.33mmol)和哌啶(0.028mL,0.28mmol)在乙醇(4mL)中加熱回流4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻至室溫，混入水和1N HCL(1mL)，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯重結(jié)晶得到化合物60(57mg,58％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.25(d,J=8.6Hz,2H),7.41(d,J=8.6Hz,2H),7.65(m,1H),8.02(s,1H),8.12(m,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 352(M-H)-C13H835Cl2NO2S2=353實(shí)施例88制備化合物61采用與實(shí)施例87相同的方法，用實(shí)施例87制備的2,3-二(4-氯苯基硫基)噻吩-5-甲醛(28mg,0.071mmol)、2,4-噻唑烷二酮(10mg,0.085mmol)和哌啶(0.007mL,0.07mmol)制備化合物61(19mg,54％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.30(d,J=8.6Hz,2H),7.35(d,J=8.6Hz,2H),7.42(d,J=8.6Hz,2H),7.46(d,J=8.6Hz,2H),7.56(s,1H),7.96(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 494(M-H)-C19H1135Cl2NO2S4=495實(shí)施例89制備化合物62采用與實(shí)施例87相同的方法，用實(shí)施例87制備的5-(4-氯苯基硫基)噻吩-2-甲醛(132mg,0.520mmol)、2,4-噻唑烷二酮(73mg,0.62mmol)和哌啶(0.052mL,0.52mmol)制備化合物62(113mg,62％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.33(d,J=8.6Hz,2H),7.44(d,J=8.6Hz,2H),7.68(d,J=3.9Hz,1H),8.01(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 352(M-H)-C13H835ClNO2S2=353實(shí)施例90制備化合物63
氬氣氛中，將二異丙胺(0.21mL,1.5mol)的四氫呋喃(3mL)溶液用冰冷卻，加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，0.81mL,1.3mmol)，將混合物冷卻到-78℃。加入實(shí)施例87制備的4-溴-2-二甲氧基甲基噻吩(236mg,1.00mmol)的四氫呋喃(1mL)溶液，攪拌30分鐘。加入4,4′-二氯聯(lián)苯基二硫醚(287mg,1.0mmol)，然后攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，并用醚萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到3-溴-2-(4-氯苯基硫基)-5-二甲氧基甲基噻吩(355mg,94％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.36(s,6H),5.55(d,J=0.7Hz,1H),7.07(d,J=0.9Hz,1H),7.16(d,J=8.4Hz,2H),7.24(d,J=8.6Hz,2H)FABMS m/z 380,378(M+)C13H1279Br35ClO2S2=378將3-溴-2-(4-氯苯基硫基)-5-二甲氧基甲基噻吩(170mg,0.449)溶解在四氫呋喃(4mL)中,加入1mol/L鹽酸(0.5mL)，在室溫下攪拌4.5小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入碳酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(9∶1己烷/乙酸乙酯)提純得到3-溴-2-(4-氯苯硫基)四氫噻吩-5-甲醛(126mg,85％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.38(d,J=8.4Hz,2H),7.43(d,J=8.6Hz,2H),7.63(s,1H),9.71(s,1H)FABMS m/z 335,333(M+H)+C11H679Br35ClOS2=332
采用與實(shí)施例87相同的方法，用3-溴-2-(4-氯苯基硫基)噻吩-5-甲醛(114mg,0.342mmol)、2,4-噻唑烷二酮(48mg,0.41mmol)和哌啶(0.034mL,0.34mmol)制備化合物63(73mg,49％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.31(d,J=8.8Hz,2H),7.47(d,J=8.6Hz,2H),7.81(s,1H),7.96(s,1H),12.7(br s,1H)FABMS m/z 432,430(M-H)-C14H779Br35ClNO2S3=431實(shí)施例91制備化合物64采用與實(shí)施例78相同的方法，用化合物63(19mg,0.044mmol)和m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，23mg,0.066mmol)制備化合物64(14mg,49％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.73(d,J=9.0Hz,2H),7.75(s,1H),7.84(d,J=8.6Hz,1H),7.98(s,1H),12.8(br s,1H)FABMS m/z 448,446(M-H)-C14H779Br35ClNO3S3=447實(shí)施例92制備化合物65氬氣氛中，將實(shí)施例90制備的3-溴-2-(4-氯苯基硫基)-5-二甲氧基甲基噻吩(500mg,1.32mmol)溶解在四氫呋喃(6mL)中，冷卻到-78℃。加入正丁基鋰(1.6mol/L己烷溶液，0.81mL,1.3mmol)和4-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(528mg,2.64mmol)的四氫呋喃(1mL)溶液，攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入水，并用醚萃取產(chǎn)物。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(15∶1己烷/乙酸乙酯)得到3-(4-氯苯甲?；?-2-(4-氯苯基硫基)-5-二甲氧基甲基噻吩(345mg,60％)1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.31(s,6H),5.45 1H),7.15(d,J=1.1Hz,114),7.39(d,J=8.8Hz,2H),7.46(d,J=8.6Hz,2H),7.53(d,J=8.8Hz,2H),7.73(d,J=8.6Hz,2H),FABMS m/z 439(M+H)+C20H1635Cl2O3S2=438將3-(4-氯苯甲?；?-2-(4-氯苯基硫基)-5-二甲氧基甲基噻吩(335mg,0.736mmol)溶解在四氫呋喃(6mL)中。加入1mol/L鹽酸(1mL)，在室溫下攪拌1.5小時(shí)。向反應(yīng)溶液加入碳酸氫鈉水溶液，產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水和鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(5∶1己烷/乙酸乙酯)提純，用乙酸乙酯/己烷重結(jié)晶得到3-(4-氯苯甲?；?-2-(4-氯苯基硫基)噻吩-5-甲醛(203mg,68％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.50(d,J=8.4Hz,2H),7.52(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=8.8Hz,2H),7.74(d,J=8.8Hz,2H),7.83(s,1H),9.65(s,1H)FABMS m/z 393(M+H)+C16H1079Cl2O2S2=392采用與實(shí)施例70相同的方法，用3-(4-氯苯甲?；?-2-(4-氯苯基硫基)噻吩-5-甲醛(193mg,0.490mmol)、2,4-噻唑烷二酮(69mg,0.59mmol)和哌啶(0.049mL,0.49mmol)制備化合物65(211mg,88％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.64(d,J=8.6Hz,2H),7.65(d,J=8.6Hz,2H),7.73(d,J=8.4Hz,2H),7.81(d,J=8.4Hz,2H),7.87(s,1H),7.94(s,1H),12.6(br s,1H)FABMS m/z 490(M-H)-C21H1135Cl2NO3S3=491
實(shí)施例93制備化合物66采用與實(shí)施例78相同的方法，用化合物65(50mg,0.10mmol)和m-氯過(guò)苯甲酸(50％純度，53mg,0.15mol)得到化合物66(14mg,28％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.60(d,J=8.4Hz,2H),7.71(d,J=8.4Hz,2H),7.72(d,J=8.8Hz,2H),7.82(s,1H),7.89(d,J=8.8Hz,2H),8.04(s,1H),12.8(br s,1H)FABMS m/z 506(M-H)-C21H1135Cl2NO4S3=507實(shí)施例94制備化合物67將市場(chǎng)上可買(mǎi)得到的2-((4-氯苯基)硫基)-5-硝基苯甲醛(0.3g,1.0mmol)(MAYBRIDGE,目錄號(hào)XAX00154)溶解在乙醇(8mL)中。加入噻唑烷二酮(0.36mg,3.0mmol)和哌啶(0.1mol,1.0mmol)，混合物在裝有回流冷凝器和干燥管(CaCl2)的燒瓶中加熱回流5.5小時(shí)。溫度降至室溫，加入1M HCL溶液。在常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(氯仿-氯仿∶甲醇=99∶1)純制，然后通過(guò)從乙酸乙酯和己烷中重結(jié)晶提純得到化合物67(0.109mg,27.9％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.24(d,J=8.8Hz,1H),7.59(s,4H),7.88(s,1H),8.17(dd,J=2.6,8.8Hz,1H),8.24(d,J=2.6Hz,1H),12.84(br s,1H)FABMS m/z 393(M+H)+C16H935ClN2O4S2=392
實(shí)施例95制備化合物68采用與實(shí)施例78的方法，由化合物67(0.02g,0.051mmol)制備化合物68(0.0137g,65.7％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.61(d,J=2.6Hz,4H),7.67(s,1H),8.25(d,J=8.8Hz,1H),8.35(d,J=2.3Hz,1H),8.40(dd,J=2.3,8.8Hz,1H),NH沒(méi)有找到。
FABMS m/z 409(M+H)+C16H935ClN2O5S2=408實(shí)施例96制備化合物69將化合物67(0.03g,0.077mmol)溶解在二氯甲烷(5mL)和甲醇(1mL)中，加入m-氯過(guò)苯甲酸(0.03g,0.0092mmol)，在室溫下攪拌1小時(shí)。加入10％亞硫酸氫鈉水溶液，經(jīng)常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(氯仿∶甲醇=12∶1)提純，再通過(guò)薄層色譜(氯仿∶乙腈=6∶1)提純得到化合物69(0.041g,15,9％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.71(dt,J=2.0,8.8Hz,2H),7.87(dt,J=2.0,8.8Hz,1H),7.98(s,1H),8.31(s,1H),8.49(d,J=2.0Hz,2H),NH沒(méi)有找到。
FABMS m/z 423(M-H)-C16H935ClN2O6S2=424
實(shí)施例97制備化合物70將2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.2mL,3.1mmol)和四丁基溴化銨(0.012g,0.031mmol)加入到3-氯苯硫醇(0.11g,0.73mmol)中，25℃攪拌10分鐘。將2-氟-5-硝基苯甲醛(0.12g,0.73mmol)的甲苯(1.2mL)溶液加入到反應(yīng)溶液中，110℃攪拌1.5小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(經(jīng)氯仿洗脫)提純得到2-[(3-氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(72mg,34％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.01(d,J=8.8Hz,1H),7.44-7.54(m,3H),7.58(br s,1H),8.17(dd,J=2.4,8.8Hz,1H),8.69(d,J=2.6Hz,1H),10.29(s,1H)FABMS m/z 294(M+H)+C13H835ClNO3S=293將2-[(3-氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(70mg,0.24mmol)溶解在甲苯(3.5mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.11mg,0.95mmol)、哌啶(0.0094mL,0.095mmol)、乙酸(0.0054mL,0.095mmol)和分子篩4A(0.35g),110℃攪拌3小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(用氯仿/乙腈=10/1展開(kāi))提純得到化合物70(41mg,440)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.34(d,J=8.8Hz,1H),7.60-7.47(m,3H),7.63(br s,1H),7.88(s,1H),8.20(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.26(d,J=2.6Hz,1H),12.83(m,1H)FABMS m/z 391(M-H)-C16H935ClN2O4S2=392
實(shí)施例98制備化合物71將2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.7mL,4.4mmol)和四丁基溴化銨(0.017g,0.051mmol)加入到2-氯苯硫醇(0.17g,1.0mmol)中，25℃攪拌10分鐘。向反應(yīng)溶液加入2-氟-5-硝基苯甲醛(0.18g,1.0mmol)的甲苯(1.7mL)溶液，110℃攪拌2小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)硅膠色譜(經(jīng)氯仿洗脫)提純得到2-[(2-氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.25g,83％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.88(d,J=8.8Hz,1H),7.42(ddd,J=7.5,7.5,1.4Hz,1H),7.51(ddd,J=7.3,7.3,1.6Hz,1H),7.62(dd,J=8.1,1.5Hz,1H),7.69(dd,J=7.5,1.7Hz,1H),8.16(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.70(d,J=2.5Hz,1H),10.32(s,1H)FABMS m/z 293(M+)C13H835ClNO3S=293將2-[(2-氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.14g,0.49mmol)溶解在乙醇(5.8mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.23mg,2.0mmol)和哌啶(0.039mL,0.39mmol),80℃攪拌3小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(用氯仿/7腈=10/1展開(kāi))提純得到化合物71(24mg,13％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.20(d,J=8.8Hz,1H),7.43-7.62(m,3H),7.71(m,1H),7.89(s,1H),8.20(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.28(m,1H),12.82(m,1H)FABMS m/z 391(M-H)-C16H935ClN2O4S2=392
實(shí)施例99制備化合物72采用與實(shí)施例97相同的方法,由3,4-二氯苯硫醇(0.12g,0.68mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.2mL,2.9mmol)、四丁基溴化銨(0.011 g,0.034mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛(0.12g,0.68mmol)的甲苯(1.2mL)溶液制備2-[(3,4-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.16g,79％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.02(d,J=8.8Hz,1H),7.41(dd,J=8.2,2.0Hz,1H),7.60(d,J=8.2Hz,1H),7.69(d,J=2.0Hz,1H),8.18(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),8.69(d,J=2.6Hz,1H),10.28(s,1H)FABMS m/z 328(M+H)+C13H735Cl2NO3S=327采用與實(shí)施例97相同的方法，由2-[(3,4-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.12g,0.35mmol)、甲苯(5.8mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.16g,1.4mmol)、哌啶(0.014g,0.14mmol)、乙酸(0.0080mL,0.14mmol)和分子篩4A(0.58g)制備化合物72(74mg,49％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.39(d,J=8.8Hz,1H),7.50(dd,J=8.4,1.8Hz,1H),7.75(d,J=8.5Hz,1H),7.88-7.83(m,2H),8.18(d,J=8.6,2.2Hz,1H),8.25(m,1H),12.82(m,1H)FABMS m/z 425(M-H)-C16H835Cl2N2O4S2=426實(shí)施例100制備化合物73采用與實(shí)施例97相同的方法，由4-溴苯硫醇(0.19g,1.0mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.7mL,4.3mmol)、四丁基溴化銨(0.016g,0.051mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛(0.17g,1.0mmol)的甲苯(1.7mL)溶液制備2-[(4-溴苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.28g,82％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.98(d,J=8.9Hz,1H),7.41-7.46(m,2H),7.63-7.69(m,2H),8.13(dd,J=8.8,2.4Hz,1 H),8.68(d,J=2.6Hz,1H),10.29(s,1H)FABMS m/z 338(M+H)+C13H879BrNO3S=337采用與實(shí)施例97相同的方法，由2-[(4-溴苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.031g,0.091mmol)、甲苯(1.5mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.043g,0.36mmol)、哌啶(0.0036g,0.036mmol)、乙酸(0.0025mL,0.036mmol)和分子篩4A(0-092g)制備化合物73(26mg,66％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.25(d,J=8.8Hz,1H),7.48-7.52(m,2H),7.20-7.25(m,2H),7.88(s,1H),8.18(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.25(d,J=2.4Hz,1H),12.85(br s,1H)FABMS m/z 435(M-H)-C16H979BrN2O4S2=436實(shí)施例101制備化合物74采用與實(shí)施例98相同的方法，由4-甲氧基苯硫醇(0.14g,0.99mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.8mL,4.4mmol)、四丁基溴化銨(0.016g,0.050mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛(0.17g,0.99mmol)的甲苯(1.8mL)溶液制備2-[(4-甲氧基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.22g,76％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.89(s,3H),6.92(d,J=8.9Hz,1H),7.03(d,J=8.6Hz,2H),7.49(d,J=8.6Hz,2H),8.08(dd,J=9.0,2.4Hz,1H),8.63(d,J=2.2Hz,1H),10.29(s,1H)FABMS m/z 289(M+)C14H11N2O4=289采用與實(shí)施例98相同的方法，由2-[(4-甲氧基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.11g,0.39mmol)、乙醇(1.5mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.18g,1.5mmol)和哌啶(0.015g,0.15mmol)制備化合物74(26mg,18％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.34(s,3H),6.98(d,J=8.8Hz,1H),7.13(d,J=9.0Hz,2H),7.57(d,J=8.6Hz,2H),7.89(s,1H),8.14(dd,J=8.6,2.4Hz,1H),8.21(d,J=2.4Hz,1H)FABMS m/z 387(M-H)-C17H12N2O5S2=388實(shí)施例102制備化合物75采用與實(shí)施例97相同的方法由4-乙基苯硫醇(0.13g,0.95mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.6mL,4.0mmol)、四丁基溴化銨(0.015g,0.047mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛(0.16g,0.95mmol)的甲苯(1.6mL)溶液制備2-[(4-乙基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.22g,82％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)1.30(t,J=7.6Hz,3H),2.74(q,J=7.5Hz,2H),6.96(d,J=9.0Hz,1H),7.36(d,J=7.5Hz,2H),7.48(d,J=8.1Hz,2H),8.10(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),8.66(d,J=2.6Hz,1H),10.31(s,1H)FABMS m/z 288(M+H)+C15H13NO3S=287
采用與實(shí)施例97相同的方法,由2-[(4-乙基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.20g,0.69mmol)、甲苯(9.9mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.32g,2.7mmol)和哌啶(0.027g,0.27mmol)、乙酸(0.016mL,0.27mmol)和分子篩4A(0.99g)制備化合物75(0.14g,51％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.21(t,J=7.7Hz,3H),2.68(q,J=7.7Hz,2H),7.09(d,J=8.8Hz,1H),7.39(d,J=8.1Hz,2H),7.51(d,J=8.1Hz,2H),7.39(s,1H),8.16(dd,J=8.6,2.3Hz,1H),8.22(d,J=2.0Hz,1H),12.82(m,1H)FABMS m/z 385(M-H)-C18H14N2O4S2=386實(shí)施例103制備化合物76采用與實(shí)施例94相同的方法，由市場(chǎng)上可買(mǎi)得到的(MAYBRIDGE,目錄號(hào)XAX00131)2-芐硫基-5-硝基苯甲醛(0.27g,1.0mmol)制得化合物76(0.134g,35.9％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm).51(s,2H),7.31(m,3H)7.46(dt,J=1.7,6.6Hz,2H),7.78(s,1H),7.81(d,J=8.9Hz,1H),8.17(d,J=2.6Hz,1H),8.22(dd,J=2.6,8.9Hz,1H),12.82(br s,1H)EIMS m/z 371(M-H)-C17H12N2O4S2=372實(shí)施例104制備化合物77采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物76(0.03g,0.081mmol)制備化合物77(0.0055g,17.6％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)4.24(d,J=6.8Hz,2H),6.94(dd,J=2.2,5.0Hz,2H),7.20(dd,J=2.2,5.0Hz,3H),7.4(s,1H),7.89(d,J=8.7Hz,1H),8.21(d,J=2.2Hz,1H),8.38(dd,J=2.2,8.7Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 369(M+H)+C17H12N2O5S2=388實(shí)施例105制備化合物78采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物76(0.03g,0.081mmol)制備化合物78(0.0192g,59.0％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)4.78(s,2H),7.10(dd,J=1.8,4.5Hz,3H),7.27(dd,J=1.8,4.5Hz,3H),8.06(d,J=8.8Hz,1H),8.08(s,1H),8.36(dd,J=2.5,8.8Hz,1H),8.39(d,J=2.5Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 403(M-H)-C17H12N2O6S2=404實(shí)施例106制備化合物79采用與實(shí)施例97相同的方法，由4-氯芐基硫醇(0.11g,0.83mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.4mL,3.5mmol)、四丁基溴化銨(0.013g,0.041mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛(0.14g,0.83mmol)的甲苯(1.4mL)溶液制備2-[(4-氯芐基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.17g,67％)。采用與實(shí)施例97相同的方法，由2-[(4-氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.12g,0.39mmol)、甲苯(6.1mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.18g,1.6mmol)、哌啶(0.016mL,0.16mmol)、乙酸(0.0090mL,0.16mmol)和分子篩4A(0.61g)制備化合物79(0.11g,70％)。
2-[(4-氯芐基)硫基]-5-硝基苯甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)4.26(s,2H),7.34(s,4H),7.49(d,J=8.8Hz,1H),8.29(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.65(d,J=2.5Hz,1H),10.23(s,1H)FABMS m/z 307(M+)C14H1035ClNO3S=307化合物791H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)4.50(s,2H),7.39(d,J=8.5Hz,2H),7.46(d,J=8.4Hz,2H),7.77(s,1H),7.80(d,J=8.8Hz,1H),8.17(d,J=2.4Hz,1H),8.21(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),12.81(m,1H)FABMS m/z 405(M-H)-C17H1135ClN2O4S2=406實(shí)施例107制備化合物80將市場(chǎng)上可得到的(MAYBRIDGE，目錄號(hào)XAX00146)4[(4-溴苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛(0.12g,0.35mmol)溶解在甲苯(5.9mL)中。加入2,4-噻唑烷二酮(0.16mg,1.04mmol)、哌啶(0.014mL,0.14mmol)、乙酸(0.0080mL,0.14mmol)和分子篩4A(0.59g),110℃攪拌3小時(shí)。經(jīng)常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)乙醇研制得到化合物80(21mg,14％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.01(d,J=8.6Hz,1H),7.58-7.62(m,2H),7.73-7.82(m,4H),8.50(d,J=2.0Hz,1H),12.71(m,1H)FABMS m/z 435(M-H)-C16H979BrN2O4S2=436實(shí)施例108制備化合物81將市場(chǎng)上可得到的(MAYBRIDGE，目錄號(hào)NRBOO117)4[(4-氯苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛(0.31g,1.0mmol)溶解在乙醇(12mL)中。加入2,4-噻唑烷二酮(0.16mg,1.4mmol)、哌啶(0.014mL,0.14mmol),80℃攪拌3小時(shí)。反應(yīng)液冷卻到25℃，過(guò)濾收集析出的晶體得到化合物81(O.15g,36％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)6.98(d,J=8.5Hz,1H),7.08br s,1H),7.70-7.59(m,5H),7.73(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),8.45(d,J=2.0Hz,1H)FABMS m/z 391(M-H)-C16H935ClN2O4S2=392實(shí)施例109制備化合物82采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物9(0.03g,0.081mmol)制備化合物82(0.0195g,62.0％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),7.31(d,J=8.2Hz,2H),7.56(d,J=8.2Hz,2H),7.84(s,1H),8.28(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),8.46(s,1H),8.49(t,J=1.8Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 389(M+H)+C17H12N2O5S2=388
實(shí)施例110制備化合物83將化合物9(0.07g,0.19mmol)溶解在二氯甲烷(12mL)中，加入甲醇(2.3mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.13g,0.38mmol)，室溫下攪拌1小時(shí)。加入10％亞硫酸氫鈉水溶液。經(jīng)過(guò)常規(guī)處理后，殘余物用薄層色譜(氯仿∶甲醇=12∶1)提純，用氯仿研制得到化合物83(0.019g,25.4％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.41(s,3H),7.50(d,J=8.3Hz,2H),7.84(s,1H),7.86(d,J=8.1Hz,2H),8.03(d,J=8.3Hz,1H),8.23(d,J=1.7Hz,1H),8.44(d,J=8.3Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 405(M+H)+C17H12N2O6S2=404實(shí)施例111制備化合物84采用與實(shí)施例94相同的方法，由市場(chǎng)上可得到的(MAYBRIDGE,目錄號(hào)XAX00135)2-(環(huán)己基硫基)-5-硝基苯甲醛(0.26g,1.0mmol)制備化合物84(0.152g,41.8％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.30(m,1H),1.46(m,4H),1.61(m,1H),1.73(m,2H),2.00(m,2H),3.67(m,1H),7.79(d,J=8.5Hz,1H),7.83(s,1H),8.19(d,J=2.4Hz,1H),8.22(dd,J=2.4,8.5Hz,1H),12.82(br s,1H)FABMS m/z 363(M-H)-C16H16N2O4S2=364
實(shí)施例112制備化合物85采用與實(shí)施例96相同的方法,由化合物84(0.02g,0.055mmol)制備化合物85(0.0149g,71.3％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.30(m,8H),1.77(m,2H),2.73(m,2H),7.60(s,1H),8.24(s,1H),8.05(d,J=8.6Hz,1H),8.36(d,J=2.2Hz,1H),8.43(dd,J=2.2,8.6Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。
FABMS m/z 381(M+H)-C16H16N2O5S2=380實(shí)施例113制備化合物86采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物84(0.03g,0.082mmol)制備化合物86(0.0034g,10.9％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.27(m,6H),1.59(m,1H),1.69(m,4H),8.23(d,J=8.4Hz,1H),8.24(s,1H),8.44(s,1H),8.46(d,J=8.4Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。
FABMS m/z 395(M-H)-C16H16N2O6S2=396實(shí)施例114制備化合物87將p-甲苯硫醇(0.12g,1.0mmol)溶解在10％氫氧化鈉水溶液(1.7mL)中，加入四丁基溴化銨(0.016g,0.05mmol)，在室溫下攪拌5分鐘。向其中滴加5-溴-2-氟苯甲醛(0.2gm1.0mmol)的甲苯(1.7mL)溶液，在室溫下攪拌4小時(shí)。在常規(guī)處理后，用乙醇和己烷重結(jié)晶和提純，得到5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.23g,74.1％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.39(s,3H),6.90(d,J=8.4Hz,1H),7.22(d,J=7.9Hz,2H),7.35(dd,J=1.7,8.1Hz,2H),7.46(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),7.96(d,J=2.2Hz,1H),10.32(s,1H)FABMS m/z 308(M+H)+C14H1179BrOS=307采用與實(shí)施例94相同的方法，由5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.03g,0.1mmol)制備化合物87(0.021g,52％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.31(m,3H),7.14(d,J=8.8Hz,1H),8.23(d,J=8.3Hz,2H),8.28(d,J=8.3Hz,2H),7.60(s,1H),7.62(dd,J=2.2,8.8Hz,1H),7.90(s,1H),12.82(br s,1H)EIMS m/z 407(M+H)+C17H1279BrNO2S2=406實(shí)施例115制備化合物88采用與實(shí)施例114(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)相同的方法，由3-溴-4-氟苯甲醛(0.2g,0.99mmol)制備3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.19g,63.6％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.44(s,3H),6.73(d,J=8.3Hz,1H),7.30(d,J=8.4Hz,2H),7.47(d,J=8.1Hz,2H),7.54(dd,J=1.7,8.4Hz,1H),8.00(d,J=1.7Hz,1H),9.84(s,1H)FABMS m/z 307(M+)C14H11BrOS=307
采用與實(shí)施例94相同的方法,由3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.15g,0.49mmol)制備化合物88(0.087g,43.9％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),6.74(d,J=8.3Hz,1H),7.37(d,J=8.1Hz,2H),7.44(dd,J=2.0,8.5Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,2H),7.70(s,1H),7.89(d,J=2.0,Hz,1H),12.64(br s,1H)EIMS m/z 407(M+H)+C17H1279BrNO2S2=406實(shí)施例116制備化合物89反應(yīng)根據(jù)文獻(xiàn)(Tetrahedron Lett.Vol.36,No.50，第9085-9088頁(yè)，1995)描述的方法進(jìn)行，產(chǎn)物用5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.06g,0.2mmol)和2-吡啶三氟甲烷磺酸鹽(0.03g,0.2mmol)處理。殘余物通過(guò)薄層色譜(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)純制，得到2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(2-吡啶基)苯甲醛(0.024g,38.5％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.41(s,3H),7.09(d,J=8.4Hz,1H),7.24(m,3H),7.42(d,J=8.4Hz,2H),7.76(dd,J=1.7,6.6Hz,2H),8.01(dd,J=2.2,8.5Hz,1H),8.50(d,J=2.2Hz,1H),8.69(d,J=4.6Hz,1H),10.43(s,1H)FABMS m/z 306(M+)C19H15NOS=305采用與實(shí)施例94相同的方法，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(2-吡啶基)苯甲醛(0.024g,0.08mmol)制備化合物89(0.026g,84.4％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.32(s,3H),7.26(d,J=8.4Hz,2H),7.30(d,J=8.4Hz,2H),7.33(dd,J=8.3,2H),7.41(m,1H),7.92(m,
1H),7.97(d,J=7.7Hz,1H),8.08(s,1H),8.07(dd,J=2.0,7.7Hz,1H),8.32(d,J=1.7Hz,1H),8.71(d,J=4.8Hz,1H),12.70(br s,1H)EIMS m/z 405(M-H)-C22H16N2O2S2=406實(shí)施例117制備化合物90將三(二次芐基丙酮)-二鈀(0.18g,0.2mmol)和三苯基膦(0.21g,0.8mmol)溶解在四氫呋喃(60mL)中，在室溫下攪拌30分鐘。之后，加入5-溴-2-氟苯甲醛(0.4g,2.0mmol)和2-(三丁基甲錫烷基)-呋喃(1.25mL,4.0mmol)，并加熱回流10小時(shí)?；旌衔锢鋮s到室溫，在常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)提純得到2-氟-5-(2-呋喃基)苯甲醛(0.38g,100％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.49(dd,J=1.8,3.5Hz,1H),6.69(d,J=3.3Hz,1H),7.21(t,J=9.9Hz,1H),6.49(d,J=1.8Hz,1H),7.90(m,1H),8.14(dd,J=2.4,6.6Hz,1H),10.39(s,1H)FABMS m/z 190(M+)C11H719FO2=190采用與實(shí)施例114(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)相同的方法，由2-氟-5-(2-呋喃基)苯甲醛(0.1g,0.53mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(2-呋喃基)苯甲醛(0.14g,87.8％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.39(s,3H),6.59(d,J=1.8Hz,1H),6.69(d,J=3.3Hz,1H),7.07(d,J=8.4Hz,1H),7.21(d,J=8.3Hz,2H),7.36(d,J=8.1Hz,2H),7.48(s,1H),7.66(dd,J=2.0,8.3Hz,1H),8.14(d,J=2.0Hz,1H),10.41(s,1H)
FABMS m/z 294(M+)C18H14O2S=294采用與實(shí)施例94相同的方法,由2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(2-呋喃基)苯甲醛(0.14g,0.47mmol)制備化合物90(0.17g,92.8％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.50(s,3H),6.65(m,1H),7.04(d,J=3.5Hz,1H),7.22(d,J=8.4Hz,2H),7.26(d,J=8.4Hz,2H),7.32(d,J=8.4Hz,1H),7.74(d,J=8.2Hz,1H),7.81(d,J=7.7Hz,1H),8.03(s,1H),12.71(br s,1H)EIMS m/z 392(M-H)-C21H15NO3S2=393實(shí)施例118制備化合物91采用與實(shí)施例96相同的方法,由化合物74(0.1g,0.25mmol)制備化合物91(0.069g,66.5％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.30(s,3H),6.67(dd,J=1.8,3.5Hz,1H),7.17(d,J=8.6Hz,1H),7.31(d,J=8.6Hz,2H),7.45(d,J=8.3Hz,2H),7.76(s,1H),7.87(d,J=1.8Hz,1H),8.01(d,J=5.9Hz,2H),8.02(s,1H),12.77(br s,1H)EIMS m/z 410(M+H)+C21H15NO4S2=409
實(shí)施例119制備化合物92采用與實(shí)施例117(合成2-氟-5-(2-呋喃基)苯甲醛)相同的方法，由2-(三丁基甲錫烷基)-噻吩(0.63mL,2.0mmol)制備2-氟-5-(2-噻吩基)苯甲醛(0.2g,100％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.10(t,J=4.4Hz,1H),7.21(dd,J=8.8,9.9Hz,1H),7.33(d,J=4.4Hz,2H),7.83(m,1H),8.08(dd,J=2.6,6.5Hz,1H),10.40(s,1H)FABMS m/z 206(M+)C11H719FOS=206采用與實(shí)施例114(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)相同的方法，由2-氟-5-(2-噻吩基)苯甲醛(0.1g,0.49mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(2-噻吩基)苯甲醛(0.12g,77.4％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.39(s,3H),7.06(t,J=3.8Hz,1H),7.10(m,1H),7.24(d,J=8.3Hz,2H),7.33(m,4H),7.37(d,J=8.1Hz,2H),7.60(dd,J=2.4,8.3Hz,1H),8.03(d,J=2.4Hz,1H),10.42(s,1H)FABMS m/z 310(M+)C18H14OS2=310采用與實(shí)施例94相同的方法，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(2-噻吩基)苯甲醛(0.12g,0.38mmol)制備化合物92(0.14g,91.3％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.30(s,3H),7.18(d,J=3.8Hz,1H),7.24(d,J=4.8Hz,4H),7.56(d,J=7.7Hz,1H),7.63(d,J=5.1Hz,1H),7.72(s,1H),7.73(d,J=7.5Hz,1H),8.03(s,1H),12.71(br s,1H)EIMS m/z 408(M-H)-C21H15NO2S3=409
實(shí)施例120制備化合物93采用與實(shí)施例96相同的方法,由化合物92(0.1g,0.24mmol)制備化合物93(0.051g,49.4％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.30(s,3H),7.20(dd,J=3.7,5.0Hz,1H),7.32(d,J=8.1Hz,1H),7.46(d,J=8.3Hz,2H),7.66(d,J=3.7Hz,2H),7.69(d,J=3.7Hz,2H),8.01(m,3H),12.78(br s,1H)EIMS m/z 426(M+H)+C21H15NO3S3=425實(shí)施例121制備化合物94將二異丙基胺(0.35mL,2.5mmol)溶解在四氫呋喃(3.5mL)中，并將溫度調(diào)節(jié)到0℃。滴加正丁基鋰(己烷溶液)(1.24mL,2.0mmol)，攪拌10分鐘。將反應(yīng)溫度降至-78℃。加入4-氟芐腈(0.2g,1.65mmol)，攪拌1小時(shí)。滴加二甲基甲酰胺(0.19mL,2.5mmol)，攪拌20分鐘，然后進(jìn)行常規(guī)處理。殘余物通過(guò)薄層色譜(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)純制，得到2-氟-5-氰基苯甲醛(0.11g,43.4％)。
1H-NMR(300MHz,CDCL3)δ(ppm)7.46(t,J=8.8Hz,1H),7.90(m,1H),7.71(dd,J=2.2,6.2Hz,1H),10.36(s,1H)EIMS m/z 148(M-H)C8H419FNO=149
采用與實(shí)施例114(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)相同的方法,由2-氟-5-氰基苯甲醛(0.1g,0.67mmol)制備5-氰基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.15g,86.9％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.44(s,3H),6.92(d,J=8.6Hz,1H),7.31(d,J=7.9Hz,2H),7.44(d,J=8.3Hz,2H),7.49(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),8.07(d,J=2.0Hz,1H),10.27(s,1H)FABMS m/z 253(M+)C15H11NOS=253采用與實(shí)施例94相同的方法，由5-氰基-2-[(4-甲基苯基)硫基]-苯甲醛(0.1g,0.4mmol)制備化合物94(0.09g,64.5％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.37(s,3H),7.00(d,J=8.3Hz,1H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),7.46(d,J=8.3Hz,2H),7.76(dd,J=1.7,8.4Hz,1H),7.80(s,1H),7.84(s,1H),12.01(br s,1H)EIMS m/z 353(M+H)+C18H12N2O2S2=352實(shí)施例122制備化合物95采用與實(shí)施例114(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)相同的方法，由2-氟-5-甲?；S腈(0.2g,1.34mmol)制備3-氰基-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.3g,89.9％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.44(s,3H),6.94(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=7.9Hz,2H),7.47(dd,J=1.8,8.1Hz,2H),7.78(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),8.07(d,J=5Hz,1H),9.90(s,1H)FABMS m/z 254(M+H)+C15H11NOS=253
采用與實(shí)施例94相同的方法,由3-氰基-4-[(4-甲基苯基)硫基]-苯甲醛(0.2g,0.79mmol)制備化合物95(0.126g,45.3％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.50(s,3H),7.06(d,J=8.6Hz,1H),7.36(d,J=8.4Hz,2H),7.49(d,J=8.3Hz,2H),7.66(s,1H),7.71(dd,J=2.0,8.5Hz,1H),8.08(d,J=2.0Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 352(M+)C18H12N2O2S2=352實(shí)施例123制備化合物96采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由3-溴-4-氟苯甲醛制備3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.18g,59.0％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.44(s,3H),6.73(d,J=8.3Hz,1H),7.30(d,J=7.9Hz,2H),7.47(d,J=8.1Hz,2H),7.54(dd,J=1.7,8.3Hz,1H),7.99(d,J=1.7Hz,1H),9.84(s,1H)EIMS m/z 307(M+)C14H1179BrOS=307將3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.2g,0.65mmol)溶解在甲醇(6.0mL)和二氯甲烷(6.0mL)中。加入硼氫化鈉(0.025g,0.65mmol)，攪拌15分鐘并進(jìn)行常規(guī)處理。溶劑用真空干燥器除去。將殘余物溶解在二氯甲烷(7.0mL)中。加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(0.12g,0.78mmol)和咪唑(0.053g,0.65mmol)，攪拌2小時(shí)并進(jìn)行常規(guī)處理。產(chǎn)物通過(guò)硅膠色普(己烷∶乙酸乙酯=16∶1)純制，得到3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]芐基(叔丁基二甲基甲硅烷基)醚(0.27g,96.4％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)(0.62(s,6H),0.84(s,9H),2.29(s,3H),4.56(s,2H),6.76(d,J=8.3Hz,1H),7.00(dd,J=1.8,8.3Hz,1H),7.11(d,J=8.4Hz,2H),7.26(d,J=1.8Hz,2H),7.43(d,J=1.7Hz,1H),EIMS m/z 424(M+H)+C20H2779BrOSSi=423氬氣氛中，將己烷(1.4mL)和乙醚(10.4mL)冷卻到-78℃。加入正丁基鋰(己烷溶液)(2.17mL,3.47mmol)和四甲基乙二胺(0.52mL,3.47mmol)，攪拌15分鐘。加入3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]芐基叔丁基二甲基甲硅烷基醚(0.37ml,0.87mmol)，然后攪拌30分鐘。滴加二甲基甲酰胺(0.3ml,3.47mmol)在乙醚(4.3mL)中的溶液，攪拌45分鐘。加熱混合物到室溫，進(jìn)行常規(guī)處理。產(chǎn)物通過(guò)薄層色譜(己烷∶乙酸乙酯=16∶1)提純得到5-羥甲基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.58g,66.7％)1H-NMR(300MHz,CDCl3)((ppm)0.62(s,6H),0.84(s,9H),2.28(s,3H),4.64(s,2H),6.95(d,J=8.1Hz,1H),7.09(d,J=7.9,2H),7.23(d,J=8.3Hz,2H),7.28(dd,J=2.2,8.2Hz,1H),7.70(d,J=1.8Hz,1H),10.29(9,1H)EIMS m/z 373(M+H)+C21H28O2SSi=372采用與實(shí)施例94相同的方法，由5-羥甲基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.1g,0.27mmol)制備化合物96(0.067g,70.4％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.27(s,3H),4.53(d,J=5.5Hz,2H),5.37(t,J=5.5Hz,1H),7.16(d,J=3.5,4H),7.31(s,1H),7.58(s,1H),7.98(s,1H),12.00(br s,1H)
EIMS m/z 356(M-H)-C18H15O3S2=357實(shí)施例124制備化合物97氬氣氛中,將5-溴-2-氟苯甲醛(0.2g,1.0mmol)溶解在甲苯(2mL)中。加入三丁基(1-乙氧基乙烯基錫)(0.37mL,1.1mmol)和二(三苯基膦)氯化鈀(0.007g,0.01mmol)，隨后加熱到100℃持續(xù)10小時(shí)。當(dāng)殘余物的溫度降至室溫時(shí)進(jìn)行常規(guī)處理。產(chǎn)物通過(guò)薄層色譜(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)提純，得到5-乙酰基-2-氟苯甲醛(0.19g,58.3％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.65(s,3H),7.31(d,J=9.3Hz,1H),8.27(m,1H),8.45(dd,J=2.4,6.6Hz,1H),10.40(s,1H)EIMS m/z 167(M+H)+C9H719FO2=166采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由5-乙酰基-2-氟苯甲醛(0.1g,0.6mmol)制備5-乙?；?2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.043g,26.5％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.43(s,3H),2.60(s,3H),6.93(d,J=8.6Hz,1H),7.29(d,J=7.9,2H),7.44(d,J=8.3,2H),7.86(dd,J=8.5,2.0Hz,1H),8.38(d,J=2.0Hz,1H),10.34(s,1H)FABMS m/z 271(M+H)+C16H14O2S2=270采用與實(shí)施例94相同的方法，由5-乙?；?2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.043g,0.16mmol)制備化合物97(0.059g,99.8％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),2.51(s,3H),7.09(d,J=8.3Hz,1H),7.31(d,J=8.3Hz,2H),7.41(d,J=6.8Hz,2H),7.89(d,J=8.6Hz,1H),7.95(s,1H),8.01(s,1H),12.00(br s,1H)EIMS m/z 370(M+H)+C19H15NO3S2=369實(shí)施例125制備化合物98采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物97(0.083g,0.21mmol)制備化合物98(0.040g,49.8％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.29(s,3H),2.50(s,3H),7.30(d,J=8.3Hz,2H),7.47(d,J=7.9Hz,2H),7.78(s,1H),7.88(s,1H),8.04(s,1H),8.16(s,1H),8.17(d,J=3.3Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 386(M+H)+C19H15NO4S2=385實(shí)施例126制備化合物99采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由2-氟-6-(三氟甲基)苯甲醛(0.19g,1.5mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-6-(三氟甲基)苯甲醛(0.44g,100％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.42(s,3H),7.08(d,J=8.3,1H),7.27(d,J=7.3Hz,2H),7.33(t,J=7.7Hz,1H),7.43(d,J=8.1Hz,2H),7.50(d,J=7.7Hz,1H),10.53(q,J=2.2Hz,1H)EIMS m/z 296(M+)C15H1119F3OS=296
采用與實(shí)施例94相同的方法(合成化合物67),由2-[(4-甲基苯基)硫基]-6-(三氟甲基)苯甲醛(0.1g,0.3mmol)制備化合物99(0.11g,81.2％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.34(s,3H),7.23(d,J=7.7Hz,1H),7.29(d,J=7.9Hz,2H),7.37(d,J=8.3Hz,2H),7.51(t,J=7.7Hz,1H),7.66(d,J=7.7Hz,1H),7.70(s,1H),12.00(br s,1H)EIMS m/z 394(M-H)-C18H1219FNO2S2=395實(shí)施例127制備化合物100采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由2-氟-5(三氟甲基)苯甲醛(0.1g,0.5mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(三氟甲基)苯甲醛(0.45g,86.4％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.43(s,3H),6.99(d,J=8.6Hz,1H),7.28(d,J=11.0,2H),7.43(d,J=8.1,2H),7.52(d,J=8.4Hz,1H),8.07(s,1H),10.34(s,1H)FABMS m/z 296(M+)C15H1119F3OS=296采用與實(shí)施例94相同的方法，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-(三氟甲基)苯甲醛(0.1g,0.34mmol)制備化合物100(0.068g,50.9％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.35(s,3H),7.15(d,J=8.8Hz,1H),7.32(d,J=7.7Hz,2H),7.43(d,J=7.7Hz,2H),7.70(s,1H),7.71(d,J=7.0Hz,1H),7.92(s,1H),12.8(br s,1H)EIMS m/z 394(M-H)-C18H1219F3NO2S2=395
實(shí)施例128制備化合物101采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛),由2-氟-4(三氟甲基)苯甲醛(0.1g,0.5mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-4-(三氟甲基)苯甲醛(0.47g,89.5％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.41(s,3H),7.23(d,J=4.6Hz,2H),7.24(m,1H),7.38(d,J=8.1,2H),7.50(d,J=8.1Hz,1H),7.95(d,J=7.9,1H),10.41(s,1H)EIMS m/z 296(M+)C15H1119F3OS=296采用與實(shí)施例94相同的方法，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-4-(三氟甲基)苯甲醛(0.1g,0.34mmol)制備化合物101(0.082g,60.9％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.33(s,3H),7.28(d,J=8.1Hz,2H),7.35(d,J=8.3Hz,2H),7.38(s,1H),7.71(d,J=8.1Hz,1H),7.77(d,J=8.8Hz,1H),7.96(s,1H),12.78(br s,1H)EIMS m/z 394(M-H)-C16H1219F3NO2S2=395實(shí)施例129制備化合物102采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由2-氟-3-(三氟甲基)苯甲醛(0.19g,1.5mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-3-(三氟甲基)苯甲醛(0.44g,100％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.26(s,3H),6.97(d,J=2.2Hz,2H),7.03(d,J=8.1,2H),7.64(t,J=7.9Hz,1H),8.02(d,J=7.9,1H),8.09(d,J=7.7Hz,1H),10.60(d,J=0.7Hz,1H)EIMS m/z 296(M+)C15H1119F3OS=296采用與實(shí)施例94相同的方法，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-3-(三氟甲基)苯甲醛(0.1g,0.3mmol)制備化合物102(0.13g,97.5％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.19(s,3H),6.89(d,J=8.3Hz,2H),7.05(d,J=7.9Hz,2H),7.80(s,1H),7.81(d,J=4.0Hz,1H),7.87(s,1H),8.00(dd,J=2.8,6.6Hz,1H),12.01(br s,1H)EIMS m/z 394(M-H)-C18H1219F3NO2S2=395實(shí)施例130制備化合物103采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物102(0.1g,0.25mmol)制備化合物103(0.043g,41.7％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.27(s,3H),7.23(d,J=8.3Hz,2H),7.27(d,J=8.8Hz,2H),7.79(d,J=7.7Hz,1H),7.93(t,J=7.7Hz,1H),8.07(d,J=7.7Hz,1H),8.18(s,1H),12.62(br s,1H)EIMS m/z 412(M+H)+C18H1219F3NO3S2=411
實(shí)施例131制備化合物104采用如實(shí)施例114所述的反應(yīng)(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，并通過(guò)薄層色譜(己烷∶乙酸乙酯=8∶1)提純，再通過(guò)另一薄層色譜(己烷∶乙酸乙酯=24∶1)提純，由2-氟-5-甲氧基苯甲醛(0.25g,2.0mmol)獲得2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-甲氧基苯甲醛(0.05g,10.1％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.32(s,3H),3.86(s,3H),7.07(dd,J=3.1,8.6Hz,2H),7.13(m,4H),7.32(d,J=8.6Hz,1H),7.44(d,J=3.1Hz,1H),10.51(s,1H)EIMS m/z 258(M+)C15H14O2S=258采用與實(shí)施例94相同的方法，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-5-甲氧基苯甲醛(0.05g,0.2mmol)制備化合物104(0.07g,97.1％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.24(s,3H),3.84(s,3H),7.02(d,J=8.3Hz,2H),7.09(m,2H),7.12(d,J=8.1Hz,2H),7.52(d,J=8.6Hz,1H),8.04(s,1H),12.01(br s,1H)EIMS m/z 356(M-H)-C18H15NO3S2=357實(shí)施例132制備化合物105采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由2-氟-4-甲氧基苯甲醛(0.1g,0.65mmol)制備2-[(4-甲基苯基)硫基]-4-甲氧基苯甲醛(0.078g,46.2％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.39(s,3H),3.70(s,3H),6.45(d,J=2.4Hz,1H),6.76(dd,J=2.4,8.6Hz,1H),7.22(d,J=7.7Hz,2H),7.39(d,J=8.1,2H),7.80(d,J=8.6Hz,1H),10.20(s,1H)EIMS m/z 259(M+H)+C15H14O2S=258采用與實(shí)施例94相同的方法(合成化合物67)，由2-[(4-甲基苯基)硫基]-4-甲氧基苯甲醛(0.078g,0.3mmol)制備化合物105(0.091g,85.2％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),3.74(s,3H),6.75(d,J=2.7Hz,2H),7.07(dd,J=2.7,8.6Hz,1H),7.23(d,J=8.3Hz,2H),7.49(d,J=8.8Hz,1H),8.04(s,1H),12.59(br s,1H)EIMS m/z 358(M+H)+C16H15NO3S2=357實(shí)施例133制備化合物106采用與實(shí)施例121相同的方法(合成2-氟-5-氰基苯甲醛)，由4-氯氟苯(0.48mL,4.5mmol)制備5-氯-氟苯甲醛(0.55g,77.6％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.16(t,J=9.4Hz,1H),7.56(m,1H),7.84(dd,J=2.8,5.9Hz,1H),10.32(s,1H)EIMS m/z 157(M-H)C7H435Cl19FNO=158采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由5-氯-2-氟苯甲醛(0.15g,0.95mmol)制備5-氯-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.21g,85.1％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.38(s,3H),6.99(d,J=8.6Hz,1H),7.21(d,J=7.9Hz,2H),7.33(m,1H),7.35(d,J=8.3Hz,2H),7.82(d,J=2.4Hz,1H),10.34(s,1H),FABMS m/z 262(M+)C14H1135ClOS=262采用與實(shí)施例94相同的方法，由5-氯-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.1g,0.38mmol)制備化合物106(0.096g,70.1％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.30(s,3H),7.23(d,J=8.6Hz,2H),7.25(m,1H),7.27(d,J=8.4Hz,2H),7.48(s,1H),7.49(d,J=7.0Hz,1H),7.91(s,1H),12.01(br s,1H)EIMS m/z 362(M+H)+C17H1235ClNO2S2=361實(shí)施例134制備化合物107采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物106(0.1g,0.28mmol)制備化合物107(0.094g,90.0％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.30(s,3K),7.31(d,J=8.4Hz,2H),7.43(d,J=8.1Hz,2H),7.49(d,J=2.0Hz,1H),7.79(dd,J=2.0,8.5Hz,1H),7.88(s,1H),8.02(d,J=8.4Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 378(M+H)+C17H1235ClNO3S2=377
實(shí)施例135制備化合物108采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛),由4-氯-2-氟苯甲醛(0.32g,2.0mmol)制備4-氯-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.32g,60.4％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.41(s,3H),6.90(d,J=1.8Hz,1H),7.24(m,3H),7.40(d,J=8.1Hz,2H),7.76(d,J=8.3Hz,1H),10.29(s,1H),EIMS m/z 262(M+)C14H1135ClO=262采用與實(shí)施例94相同的方法，由4-氯-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.05g,0.2mmol)制備化合物108(0.052g,75.1％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.33(s,3H),7.11(d,J=1.5Hz,1H),7.28(d,J=8.3Hz,2H),7.35(d,J=8.3Hz,2H),7.508(d,J=2.2Hz,2H),7.51(s,1H),7.95(s,1H),12.72(br s,1H)EIMS m/z 326(M+)C17H12NO2S2=326實(shí)施例136制備化合物109采用與實(shí)施例114相同的方法(合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由3-氯-4-氟苯甲醛(0.2g,1.26mmol)制備3-氯-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.29g,87.9％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.44(s,3H),6.77(d,J=8.3Hz,1H),7.30(d,J=8.4Hz,2H),7.46(d,J=8.1Hz,2H),7.50(dd,J=1.8,8.4Hz,1H),7.82(d,J=1.7Hz,1H),9.85(s,1H),
FABMS m/z 262(M+)C14H1135ClOS=262采用與實(shí)施例94相同的方法,由3-氯-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.15g,0.57mmol)制備化合物109(0.13g,65.1％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.38(s,3H),6.79(d,J=8.4Hz,1H),7.37(d,J=7.9Hz,2H),7.41(dd,J=2.2,8.7Hz,1H),7.48(d,J=8.1Hz,2H),7.71(s,1H),7.75(d,J=1.8Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 361(M+)C17H1235ClNO2S2=361實(shí)施例137制備化合物110將2-氟-5-硝基苯甲醛(0.055g,0.33mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2.8mL)中，加入酚(0.077g,0.82mmol)和碳酸鉀(0.11g,0.82mmol),25℃攪拌1小時(shí)。在常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)硅膠色譜法(用氯仿洗脫)純制，得到5-硝基-2-苯氧基苯甲醛(77mg,98％)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.91(d,J=9.4Hz,1H),7.20-7.14(m,2H),7.35(dd,J=7.2Hz,7.2Hz,1H),7.47-7.55(m,2H),8.31(dd,J=9.2,2.8Hz,1H),8.79(d,J=3.0Hz,1H),10.60(s,1H),FABMS m/z 244(M+H)+C13H9NO4=243將5-硝基-2-苯氧基苯甲醛(77mg,0.32mmol)溶解在甲苯(3.9mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.15g,1.3mmol)、哌啶(0.013mL,0.13mmol)、乙酸(0.0073mL,0.13mmol)和分子篩4A(0.39g),110℃攪拌3小時(shí)。在常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜法(用氯仿/乙腈=10/1展開(kāi))，得到化合物110(67mg,61％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)6.94(d,J=9.2Hz,1H),7.27(d,J=7.7Hz,2H),7.36(d,J=7.1,7.1Hz,1H),7.50-7.58(m,2H),7.99(s,1H),8.28(dd,J=2.7,9.2Hz,1H),8.38(d,J=2.8Hz,1H),12.81(m,1H)FABMS m/z 341(M-H)-C16H10N2O5=342實(shí)施例138制備化合物111將2-氟-5-硝基苯甲醛(0.13g,0.79mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(6.7mL)中，加入對(duì)甲酚(0.22g,2.0mmol)和碳酸鉀(0.27g,2.0mmol),25℃攪拌1.5小時(shí)。在常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)硅膠色層(用氯仿洗脫)純制，得到5-硝基-2-(4-甲基苯氧基)苯甲醛(0.20g,98％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.41(s,2H),6.89(d,J=9.4Hz,1H),7.04(d,J=8.5Hz,2H),7.25-7.32(m,2H),8.39(dd,J=9.2,3.0Hz,1H),8.79(d,J=2.9Hz,1H),10.60(s,1H),FABMS m/z 257(M+)C14H11NO4S=257將5-硝基-2-(4-甲基苯氧基)苯甲醛(0.11g,0.41mmol)溶解在甲苯(5.3mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.19g,1.6mmol)、哌啶(0.016mL,0.16mmol)、乙酸(0.0094mL,0.16mmol)和分子篩4A(0.53g),110℃攪拌2小時(shí)。在常規(guī)處理后，殘余物用乙醇研制，得到化合物111(60mg,41％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.36(s,3H),6.90(d,J=9.2Hz,1H),7.15(d,J=8.2Hz,2H),7.33(d,J=8.6Hz,2H),7.99(s,1H),8.25(dd,J=9.2,1.8Hz,1H),8.36(d,J=2.6Hz,1H),12.80(m,1H)FABMS m/z 355(M-H)-C17H12N2O5S=356實(shí)施例139制備化合物112將市場(chǎng)上可買(mǎi)得到的2-[4-(2,2-二甲基乙基)苯氧基]-5-硝基苯甲醛(0.12g,0.41mmol)(MAYBRIDGE，目錄號(hào)XAX00137)溶解在乙醇(4.9mL)中。加入噻唑烷二酮(0.19g,1.6mmol)和哌啶(0.016mL,0.16mmol),80℃攪拌2小時(shí)。在常規(guī)處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(氯仿/乙腈=10/1)純制，得到化合物112(49mg,30％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.31(s,9H),6.92(d,J=9.2Hz,1H),7.18(d,J=8.6Hz,2H),7.53(d,J=8.6Hz,2H),7.98(s,1H),8.27(dd,J=9.2,2.4Hz,1H),8.35(d,J=2.2Hz,1H),12.78(br s,1H)FABMS m/z 397(M-H)-C20H18N2O5S=398實(shí)施例140制備化合物113采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物100(0.11g,0.27mmol)制備化合物113(0.079g,71.1％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.29(s,3H),7.31(d,J=8.3Hz,2H),7.47(d,J=8.1Hz,2H),7.74(s,1H),7.77(s,1H),8.03(d,J=7.9Hz,1H),8.24(d,J=7.9Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)
EIMS m/z 412(M+H)+C18H1219F3NO3S2=411實(shí)施例141制備化合物113采用與實(shí)施例96相同的方法,由化合物94(0.1g,0.28mmol)制備化合物114(0.046g,43.5％)。
1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.29(s,3H),7.29(d,J=8.1Hz,2H),7.47(d,J=8.3Hz,2H),7.83(s,1H),7.86(d,J=7.9Hz,1H),8.01(d,J=8.1Hz,1H),8.15(d,J=8.3Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z 369(M+H)+C16H12N2O3S2=368實(shí)施例142制備化合物115采用與實(shí)施例97相同的方法，由4-三氟甲基苯硫醇(74mg,0.42mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(0.71mL,1.8mmol)、四丁基溴化銨(6.7mg,0.021mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛的甲苯(0.71mL)溶液制備2-[(4-三氟甲基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.13g,93％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.04(d,J=8.8Hz,1H),7.70(d,J=8.1Hz,2H),7.77(d,J=8.6Hz,2H),8.18(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),8.71(d,J=2.5Hz,1H),10.31(s,1H)FABMS m/z 327(M-)C14H819NO3S=327采用與實(shí)施例97相同的方法,由2-[(4-三氟甲基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.12g,0.35mmol)、甲苯(5.8mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.17g,1.4mmo1)、哌啶(0.014mL,0.14mmol)、乙酸(0.0080mL,0.14mmol)和分子篩4A(0.58g)制備化合物115(44mg,51％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.52(d,J=8.7Hz,1H),7.65(d,J=8.3Hz,2H),7.81(d,J=8.2Hz,2H),7.88(s,1H),8.24(dd,J=8.6,2.5Hz,1H),8.29(d,J=2.4Hz,1H),12.82(m,1H)FABMS m/z 425(M-H)-C17H919N2O4S2=426實(shí)施例143制備化合物116將實(shí)施例101制備的化合物74(57mg,0.15mmol)溶解在二氯甲烷(11mL)和甲醇(2.3ml)中。加入m-氯過(guò)苯甲酸(55mg,0.16mmol),在25℃下攪拌1.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(氯仿/甲醇=15/1)提純得到化合物116(34mg,57％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.76(s,3H),7.02-7.08(m,2H),7.49-7.55(m,2H),7.81(s,1H),8.19(d,J=2.0Hz,1H),8.33(d,J=8.6Hz,1H),8.52(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),12.86(m,1H)FABMS m/z 403(M-H)-C17H12N2O6S2=404實(shí)施例144制備化合物117采用與實(shí)施例143相同的方法，由實(shí)施例98制備的化合物71(52mg,0.13mmol)、二氯甲烷(10mL)、甲烷(2.1mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(50mg,0.15mmol)制備化合物117(37mg,68％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.55-7.66(m,3H),7.80-7.85(m,1H),8.08(s,1H),8.15(d,J=8.6Hz,1H),8.27(m,1H),8.45(dd,J=8.6,2.2Hz,1H),12.88(m,1H)FABMS m/z 407(M-H)-C16H935ClN2O5S2=408實(shí)施例145制備化合物118將3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.2g,0.65mmol)溶解在丙酮(3mL)中，冷卻到0℃，加入瓊斯試劑(0.082mL)，攪拌3.5小時(shí)。然后，加入異丙醇(0.1mL)。在常規(guī)處理后，殘余物用己烷和乙酸乙酯重結(jié)晶和提純，得到3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲酸(0.18g,84.7％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.39(s,3H),6.70(d,J=8.4Hz,1H),7.37(d,J=8.3Hz,2H),7.49(d,J=7.9Hz,2H)7.76(dd,J=1.1,8.7Hz,1H),8.07(d,J=1.1Hz,1H),CO2H沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 322(M-H)-C14H1179BrOS=323采用與實(shí)施例115相同的方法(合成3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛)，由3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲酸(0.1g,0.31mmol)制備5-羧基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.031g,36.7％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.50(s,3H),6.84(d,J=8.4Hz,1H),7.36(d,J=8.1Hz,2H),7.46(d,J=8.1Hz,2H)7.93(dd,J=2.0,8.4Hz,1H),8.46(d,J=2.0Hz,1H),10.22(s,1H),CO2H沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 271(M-H)-C15H12O3S=272
采用與實(shí)施例94相同的方法，由5-羧基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.094g,0.34mmol)制備化合物18(0.032g,25.3％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.34(s,3H),6.96(d,J=8.6Hz,1H),7.29(d,J=8.1Hz,2H),7.33(s,1H),7.37(d,J=7.2Hz,2H),7.64(s,1H),7.69(d,J=8.4Hz,1H),8.20(s,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 370(M-H)-C18H13NO4S2=371實(shí)施例146制備化合物119采用與實(shí)施例94相同的方法，由市場(chǎng)上可獲得的5-硝基-2-(吡啶-2-基硫基)苯甲醛(0.26g,1.0mmol)(MAYBRIDGE，目錄號(hào)XAX00153)制備化合物119(0.120g,33.5％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.28(dd,J=4.8,7.7Hz,1H),7.40(dd,J=0.9,7.7Hz,1H),7.78(dd,J=1.3,7.7Hz,1H),7.86(s,1H),7.87(d,J=8.4Hz,1H),8.28(dd,J=2.4,8.4Hz,1H),8.32(d,J=2.4Hz,1H),8.42(dd,J=0.9,4.8Hz,1H),12.78(br s,1H)EIMS m/z=360(M+H)+C15H9N3O4S2=359實(shí)施例147制備化合物120采用與實(shí)施例96相同的方法，由化合物119(0.02g,0.056mmol)制備化合物120(0.0044g,21.2％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.49(m,1H),7.87(s,1H),7.98(d,J=7.9Hz,1H),8.07(m,1H),8.08(d,J=8.5Hz,1H),8.26(dd,J=2.2,8.5Hz,1H),8.43(d,J=2.2Hz,1H),8.54(d,J=4.8Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)EIMS m/z=360(M+H)+C15H9N3O5S2=359實(shí)施例148制備化合物121將N,N-二苯基芐胺(935mg,3.60mmol)懸浮在乙酸(20mL)中，加入六亞甲基三胺(1.12g,7.96mmol),90℃攪拌12小時(shí)。反應(yīng)液冷卻到室溫，加入6mol/L氫氧化鈉水溶液和水，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(洗脫液己烷/乙酸乙酯=20/1→10/1)純制，得到4-(N-苯基芐基氨基)苯甲醛(742mg,72％)。
1H NMR(270MHz,CDCl3)δ(ppm)5.04(s,2H),6.80(d,J=8.6Hz,2H),7.2-7.45(m,10H),7.63(d,J=8.6Hz,2H),9.73(s,1H)將4-(N-苯基芐基氨基)苯甲醛(109mg,0.378mmol)、2,4-噻唑烷二酮(59.9mg,0.511mmol)和哌啶(0.045mL,0.46mmol)在乙醇(5mL)中加熱回流6小時(shí)。反應(yīng)液冷卻到室溫，加入1mol/L HCL，產(chǎn)物用氯仿萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物通過(guò)制備性薄層色譜(氯仿/甲醇=20/1)，得到化合物121(123mg,84％)。
1H NMR(270MHz,CDCl3)δ(ppm)5.08(s,2H),6.88(d,J=8.6Hz,2H),7.15-7.45(m,12H),7.61(s,2H),12.38(br s,1H)
實(shí)施例149制備化合物129將2-氟-5-硝基苯甲醛(31mg,0.18mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3.1mL)中，加入4-巰基苯甲酸(85mg,0.55mmol)和三乙胺(0.13mL.0.92mmol),25℃攪拌20分鐘。在常規(guī)后處理后，產(chǎn)物用薄層色譜提純(用氯仿/甲醇=10/1展開(kāi))，得到5-硝基-2-[(4-羧基苯基)硫基]苯甲醛(60mg,100％)。
將5-硝基-2-[(4-羧基苯基)硫基]苯甲醛(60mg,0.20mmol)溶解在乙醇(2.4mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(92mg,0.79mmol)、哌啶(0.027mL,0.28mmol)、乙酸(0.0045mL,0.079mmol)和分子篩4A(0.30g),80℃攪拌2.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(用氯仿/甲醇=5/1展開(kāi))提純得到化合物129(12mg,15％)。
5-硝基-2-[(4-羧基苯基)硫基]苯甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.04(d,J=8.8Hz,1H),7.74(d,J=8.0Hz,2H),8.09(d,J=8.2Hz,2H),8.28(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),8.87(d,J=2.5Hz,1H),10.28(s,1H),13.10(m,1H)化合物1291H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.46(d,J=8.8Hz,1H),7.55(d,J=8.3Hz,2H),7.87(s,1H),7.98(d,J=8.7Hz,2H),8.21(dd,J=8.7,2.4Hz,1H),8.30(d,J=2.4Hz,1H),12.57-13.31(m,2H)FABMS m/z 401(M-H)-C17H10N2O6S2=402
實(shí)施例150制備化合物130將實(shí)施例149獲得的5-硝基-2[(2-羧基苯基)硫基]苯甲醛(71mg,0.23mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(7.1mL)中，加入2.0mol/L二甲胺甲醇溶液(0.23mL,0.47mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(90mg,0.47mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(0.11g,0.94mmol),25℃攪拌30分鐘。在常規(guī)后處理后，產(chǎn)物用硅膠色譜提純(用氯仿洗脫)，得到N,N-二甲基-4-[(2-甲?；?4-硝基苯)硫基]苯甲酰胺(59mg,75％)。
將N,N-二甲基-4-[(2-甲?；?4-硝基苯)硫基]苯甲酰胺(0.12g,0.36mmol)溶解在甲苯(6.0mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.17g,1.5mmol)、哌啶(0.014mL,0.15mmol)、乙酸(0.0083mL,0.15mmol)和分子篩4A(0.60g),110℃攪拌4.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層色譜(用氯仿/乙腈=3/1展開(kāi))提純，得到化合物130(48mg,31％)。
N,N-二甲基-4-[(2-甲?；?4-硝基苯)硫基]苯甲酰胺1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.02(br s,3H),3.16(br s,3H),7.02(d,J=9.0Hz,1H),7.53-7.64(m,4H),8.13(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.69(d,J=2.6Hz,1H),10.31(s,1H),FABMS m/z 331(M+H)+C16H14N3O4S=330化合物1301H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.92(br s,3H),2.99(br s,3H),7.36(d,J=8.8Hz,1H),7.50(d,J=8.2Hz,2H),7.57(d,J=8.0Hz,2H),7.89(s,1H),8.21(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),5.27(d,J=2.2Hz,1H),12.83(m,1H),
FABMS m/z 428(M-H)-C19H15N3O5S2=429實(shí)施例151制備化合物131采用與實(shí)施例150相同的方法,由實(shí)施例149獲得的5-硝基-2[(4-羧基苯基)硫基]苯甲醛(0.13g,0.42mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(7.1mL)、嗎啉(0.073mL,0.83mmol),1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.16g,0.83mmol)和1-羥基苯并三唑單水合物制備4-{4-[(2-甲?；?4-硝基苯基)硫基]苯甲酰基}嗎啉(0.13g,78％)。
由4-{4-[(2-甲?；?4-硝基苯基)硫基]苯甲?；鶀嗎啉(0.13g,0.34mmol)、甲苯(6.3mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.16g,1.3mmol)、哌啶(0.013mL,0.13mmol)、乙酸(0.0077mL,0.13mmol)和分子篩4A(0.63g)制備化合物131(48mg,31％)。
4-{4-[(2-甲?；?4-硝基苯基)硫基]苯甲酰基}嗎啉1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)3.39-3.93(m,8H),7.04(d,J=9.0Hz,1H),7.56(d,J=8.2Hz,2H),7.62(d,J=8.3Hz,2H),8.13(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),8.69(d,J=2.6Hz,1H),10.31(s,1H),FABMS m/z 373(M+H)+C18H16N2O5S=372化合物1311H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.27-3.45(m,4H),3.61(br s,4H),7.39(d,J=8.9Hz,1H),7.51(d,J=8.4Hz,2H),7.57(d,J=8.4Hz,2H),7.89(s,1H),8.21(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.27(d,J=2.2Hz,1H),12.83(m,1H),FABMS m/z 470(M-H)-C21H17N3O6S3=471
實(shí)施例152制備化合物132向4-(甲硫基)苯硫醇(0.15mL,0.93mmol)中加入2.5mol/L氫氧化鈉溶液(1.6mL,4.0mmol)和四丁基溴化銨(0.15mL,0.047mmol),25℃攪拌10分鐘。將2-氟-5-硝基苯甲醛(0.16g,0.93mmol)的甲苯溶液(1.6mL)加入到反應(yīng)溶液中，110℃攪拌1.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，產(chǎn)物通過(guò)硅膠色層法(用氯仿洗脫)純制，得到5-硝基-2-[(甲硫)苯基]硫代苯甲醛(0.25g,89％)。
將5-硝基-2-[(甲硫基)苯基]硫代苯甲醛(0.23g,0.76mmol)溶解在甲醇(12mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.35g,3.0mmol)、哌啶(0.030mL,0.30mmol)、乙酸(0.017mL,0.30mmol)和分子篩4A(1.2g),110℃攪拌4小時(shí)。在常規(guī)后處理后，產(chǎn)物通過(guò)乙醇研制得到化合物132(12mg,15％)。
5-硝基-2-[(甲硫基)苯基]硫代苯甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.55(s,3H),6.98(d,J=9.0Hz,1H),7.32-7.38(m,2H),7.44-7.50(m,2H),8.11(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),8.66(d,J=2.4Hz,1H),10.30(s,1H),FABMS m/z 306(M+H)+C14H11NO3S2=305化合物1321H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.52(s,3H),7.09(d,J=9.2Hz,1H),7.41(d,J=8.6Hz,2H),7.52(d,J=8.3Hz,2H),7.38(s,1H),8.16(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),8.23(d,J=2.4Hz,1H),12.83(m,1H),
FABMS m/z 403(M-H)-C17H12N2O4S3=464實(shí)施例153制備化合物133采用與實(shí)施例134相同的方法,由實(shí)施例102制備的化合物75(0.11g,0.27mmol)、二氯甲烷(21mL)、甲醇(4.2mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.10g,0.30mmol)制備化合物133(0.12g,100％)。
化合物1331H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.46-2.55(m,3H),3.93-4.04(m,2H),8.73(br d,J=7.7Hz,2H),8.88(br d,J=7.5Hz,2H),9.27(s,1H),9.58(s,1H),9.72(d,J=8.6Hz,1H),9.91(br d,J=8.3Hz,1H),14.21(m,1H),FABMS m/z 401(M-H)-C18H14N2O5S2=402實(shí)施例154制備化合物134采用與實(shí)施例134相同的方法，由實(shí)施例97制備的化合物70(0.11g,0.29mmol)、二氯甲烷(23mL)、甲醇(4.5mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.11g,0.32mmol)制備化合物134(90mg,76％)。
化合物1341H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.49-7.62(m,3H),7.66(s,1H),7.99(s,1H),8.21(d,J=1.7Hz,2H),8.30(d,J=8.9Hz,1H),8.49(dd,J=8.4,2.0Hz,1H),12.89(m,1H),FABMS m/z 407(M-H)-C16H935ClN2O5S2=408
實(shí)施例155制備化合物135采用與實(shí)施例134相同的方法，由實(shí)施例99制備的化合物72(83mg,0.19mmol)、二氯甲烷(17mL)、甲醇(3.3mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(74mg,0.21mmol)制備化合物135(32mg,37％)。
化合物1351H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.52(dd,J=8.4,1.8Hz,1H),7.79(d,J=8.4Hz,2H),7.86(d,J=2.1Hz,1H),7.99(s,1H),8.22(d,J=2.0Hz,1H),8.30(d,J=8.6Hz,1H),8.48(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),12.88(m,1H),FABMS m/z 441(M-H)-C16H835Cl2N2O5S2=442實(shí)施例156制備化合物136將實(shí)施例107制備的化合物80(60mg,0.14mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，加入m-氯過(guò)苯甲酸(0.11g,0.33mmol),25℃攪拌1小時(shí)。在常規(guī)后處理后，用薄層色譜(用氯仿/甲醇=20/1展開(kāi))純制，得到化合物136(20mg,33％)。
化合物1361H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.66(d,J=8.6Hz,2H),7.73(d,J=8.4Hz,2H),7.99(s,1H),8.27-8.32(m,1H),8.48(d,J=8.2Hz,1H),8.54(d,J=1.8Hz,1H),12.83(m,1H),FABMS m/z 451(M-H)-C16H979BrN2O5S2=452
實(shí)施例157制備化合物137使用4-氟-3-苯氧基苯甲醛(0.20g,0.93mmol)，進(jìn)行與實(shí)施例114合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛類(lèi)似的反應(yīng)，隨后進(jìn)行常規(guī)處理。
溶劑通過(guò)真空干燥器從反應(yīng)物和產(chǎn)物的混合物中除去，應(yīng)用類(lèi)似于合成化合物67的方法得到化合物137(0.11g,45％)。
化合物1371H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.50(s,3H),6.90(d,J=8.3Hz,1H),7.06(d,J=9.0Hz,2H),7.07(m,1H),7.21(t,J=7.3Hz,1H),7.30(m,1H),7.32(d,J=8.1Hz,2H),7.43(d,J=8.1Hz,4H),7.63(s,1H),12.55(br s,1H),EI-MS m/z 419(M+)C23H17NO3S2=419實(shí)施例158制備化合物138使用4-氟-3-甲氧基苯甲醛(0.20g,1.3mmol)，進(jìn)行與實(shí)施例114合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛類(lèi)似的反應(yīng)，隨后進(jìn)行常規(guī)處理。
溶劑通過(guò)真空干燥器從反應(yīng)物和產(chǎn)物的混合物中除去，應(yīng)用類(lèi)似于合成化合物67的方法得到化合物138(0.11g,45％)。
化合物1381H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.36(s,3H),3.90(s,3H),6.71(d,J=8.1Hz,1H),7.06(d,J=8.1Hz,1H),7.24(t,J=1.3Hz,1H),7.31(d,J=8.3Hz,2H),7.39(d,J=8.1Hz,2H),7.74(s,1H),12.57(br s,1H),EI-MS m/z 357(M-)C18H15NO3S2=357
實(shí)施例159制備化合物139將實(shí)施例145制備的化合物118(0.33g,0.89mmol)溶解在二甲基甲酰胺(15mL)中，加入碳酸鉀(0.12g,0.89mmol)和芐基溴(0.13mL,1.1mmol)，在室溫下攪拌10小時(shí)。然后進(jìn)行常規(guī)處理，產(chǎn)物通過(guò)薄層色譜(己烷/乙酸乙酯=8/1)提純得到化合物139(0.077g,50％)。
化合物1391H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.33(s,3H),5.37(s,2H),7.11(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.3Hz,2H),7.38(d,J=8.3Hz,2H),7.39(m,1H),7.41(d,J=8.3Hz,2H),7.46(d,J=7.3Hz,2H),7.91(d,J=1.8,8.4Hz,1H),7.96(s,1H),8.08(d,J=1.5Hz,1H),12.76(br s,1H),EI-MS m/z 461(M-)C25H19NO4S2=461實(shí)施例160制備化合物140采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物95(0.1g,0.28mmol)制備化合物140(0.067g,64.0％)。
化合物1401H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.34(s,3H),7.40(d,J=8.4Hz,2H),7.63(d,J=8.1Hz,2H),7.80(s,1H),8.09(dd,J=1.7,8.4Hz,1H),8.19(d,J=1.5Hz,1H),8.22(d,J=8.3Hz,1H),12.80(br s,1H),FABMS m/z 369(M+H)+C18H12N2O3S2=368
實(shí)施例161制備化合物141采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69),由化合物109(0.1g,0.28mmol)制備化合物141(0.094g,89.9％)。
化合物1411H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),7.36(d,J=8.4Hz,2H),7.62(d,J=8.1Hz,2H),7.76(s,1H),7.79(s,1H)7.82(d,J=8.3Hz,1H),8.10(d,J=8.3Hz,1H),12.77(br s,1H),FABMS m/z 377(M-H)-C17H1235ClNO3S2=378實(shí)施例162制備化合物142將實(shí)施例123制備的3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.1g,0.33mmol)溶解在甲醇(5mL)中，加入對(duì)甲苯磺酸-水合物(0.0006g,0.003mmol)和甲基原甲酸(0.035mL,0.33mmol)，產(chǎn)物加熱回流3小時(shí)。在常規(guī)處理后，溶劑通過(guò)真空干燥器除去，得到3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛二甲基縮醛粗產(chǎn)物。
利用所有的3-溴-4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛二甲基縮醛粗產(chǎn)物，采用類(lèi)似于實(shí)施例123中合成5-[羥甲基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛的方法得到化合物3-甲?；?4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛二甲基縮醛(0.09g，得率為90.3％)。
采用與實(shí)施例94(合成化合物67)相同的方法，由3-甲?；?4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛二甲基縮醛(0.2g,0.67mmol)制備化合物142(0.21g,76.3％)。
3-甲?；?4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛二甲基縮醛1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.39(s,3H),3.32(s,6H),5.39(s,1H),6.99(d,J=8.3Hz,1H),7.22(d,J=7.9Hz,2H),7.38(d,J=8.3Hz,2H),7.43(dd,J=2.0,8.3Hz,1H),7.94(d,J=2.0Hz,1H),10.35(s,1H),FAB-MS m/z 302(M-)C17H18O3S=302化合物1421H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),3.27(s,6H),5.44(s,1H),7.26(d,J=2.6Hz,4H),7.40(d,J=8.4Hz,1H),7.54(s,1H),8.04(s,1H),12.68(br s,1H),FABMS m/z 401(M-H)-C20H19NO4S2=402實(shí)施例163制備化合物143采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物88(0.07g,0.17mmol)制備化合物143(0.049g,69.4％)。
化合物1431H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.33(s,3H),7.35(d,J=8.1Hz,2H),7.63(d,J=8.3Hz,2H),7.79(s,1H),7.86(d,J=8.4Hz,1H),7.91(s,1H),8.08(d,J=8.3Hz,1H),12.76(br s,1H),FABMS m/z 422(M+)C17H1279BrNO3S2=422
實(shí)施例164制備化合物144將化合物142(0.17g,0.43mmol)溶解在二氯甲烷(14mL)和甲醇(2.6mL)中，加入1mol/L鹽酸溶液(0.5mL)。加熱回流2小時(shí)，產(chǎn)物冷卻到室溫，用乙酸乙酯萃取。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物從乙酸乙酯和己烷中重結(jié)晶得到化合物144(0.15g,98.2％)。
化合物1441H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),7.12(d,J=8.4Hz,1H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),7.45(d,J=8.1Hz,2H),7.83(d,J=8.3Hz,1H),7.95(s,1H),7.97(s,1H),9.97(s,1H),12.78(br s,1H),FABMS m/z 356(M+H)+C18H13NO3S2=355實(shí)施例165制備化合物145將化合物144(0.05g,0.14mmol)溶解在氯仿(4mL)中，加入[(叔丁氧基羰基)亞甲基]三苯基膦(0.13g,0.35mmol)。在加熱回流2小時(shí)后，產(chǎn)物冷卻到室溫，用乙酸乙酯萃取。減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用制備性薄層色譜(展開(kāi)液氯仿/乙腈=18/1)提純。產(chǎn)物從乙酸乙酯和己烷中重結(jié)晶得到化合物145(0.038g,59.8％)。
化合物1451H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.48(s,9H),2.33(s,3H),6.49(d,J=16.1Hz,1H),7.08(d,J=8.3Hz,1H),7.27(d,J=8.6Hz,2H),7.35(d,J=8.3Hz,2H),7.56(d,J=16.1Hz,1H),7.69(s,1H),7.72(d,J=8.3Hz,1H),7.95(s,1H),12.70(br s,1H),
FABMS m/z 435(M-H)-C24H23NO4S2=454實(shí)施例166制備化合物146將化合物145(0.02g,0.04mmol)溶解在二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，在室溫下攪拌1小時(shí)。進(jìn)行常規(guī)處理，減壓蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用乙酸乙酯研制得到化合物146(0.015g,87.5％)。
化合物1461H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.50(s,3H),6.51(d,J=16.0Hz,1H),7.11(d,J=8.1Hz,1H),7.27(d,J=8.4Hz,2H),7.34(d,J=8.1Hz,2H),7.60(d,J=16.0Hz,1H),7.70(s,1H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.96(s,1H),12.50(br s,1H),12.71(br s,1H),FABMS m/z 396(M-H)-C20H15NO4S2=397實(shí)施例167制備化合物147采用與合成5-溴-2[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛相類(lèi)似的方法，由4-氟-5-(三氟甲基)苯甲醛(0.20g,1.0mmol)制備4-[(4-甲基苯基)硫基]-3-(三氟甲基)苯甲醛(0.30g,100％)。
采用與實(shí)施例94相同的方法(合成化合物67)，由4-[(4-甲基苯基)硫基]-3-(三氟甲基)苯甲醛(0.2g,0.7mmol)制備化合物147(0.13g,50.2％)。
4-[(4-甲基苯基)硫基]-3-(三氟甲基)苯甲醛
1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.43(s,3H),7.01(d,J=8.3Hz,1H),7.29(d,J=7.9Hz,2H),7.46(d,J=8.1Hz,2H),7.73(d,J=8.4Hz,1H),8.11(s,1H),9.93(s,1H)FABMS m/z 296(M+)C15H11F3OS=296化合物1471HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),7.08(d,J=8.3Hz,1H),7.35(d,J=8.1Hz,2H),7.46(d,J=8.1Hz,2H),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.82(s,1H),8.02(s,1H),12.68(br s,1H),FABMS m/z 395(M+)C18H1219F3NO2S2=395實(shí)施例168制備化合物148采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物147(0.07g,0.18mmol)制備化合物148(0.047g,64.3％)。
化合物1481HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.49(s,3H),7.37(d,J=8.4Hz,2H),7.53(d,J=8.3Hz,2H),7.93(s,1H),8.10(d,J=7.7Hz,1H),8.11(s,1H),8.35(d,J=8.3Hz,1H),12.80(br s,1H),FABMS m/z 412(M+H)+C18H1219F3NO3S2=411
實(shí)施例169制備化合物149采用5-羧基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.10g,0.37mmol)，進(jìn)行與實(shí)施例81相類(lèi)似的反應(yīng)，得到5-(N,N-二乙基氨基羰基)-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.046g,36.7％)。
采用與實(shí)施例94(化合物67的合成)相同的方法，由5-(N,N-二乙基氨基羰基)-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.046g,0.13mmol)制備化合物149(0.043g,76.1％)。
5-(N,N-二乙基氨基羰基)-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)1.19(m,3H),1.53(m,4H)2.41(s,3H),6.98(d,J=8.3Hz,1H),7.23(d,J=8.4Hz,2H),7.36(dd,J=2.0,8.3Hz,1H),7.40(d,J=8.3Hz,2H),7.86(d,J=2.0,8.3Hz,1H),10.35(s,1H),FABMS m/z 328(M+H)+C19H21NO2S=327化合物1491HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.1(m,6H),2.50(s,3H)3.38(m,4H),7.16(d,J=8.3Hz,1H),7.27(d,J=8.3Hz,2H),7.34(d,J=8.4Hz,2H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.39(s,1H),7.97(s,1H),12.03(br s,1H),FABMS m/z 427(M)+C22H22N2O3S2=427實(shí)施例170制備化合物150采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物149(0.09g,0.21mmol)制備化合物150(0.024g,26.2％)。
化合物1501HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.1(m,6H),2.29(s,3H)2.49(m,4H),7.31(d,J=8.4Hz,2H),7.40(s,1H),7.46(d,J=8.1Hz,2H),7.63(d,J=7.9Hz,1H),7.84(s,1H),8.05(d,J=8.1Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 443(M)+C22H22N2O4S2=443實(shí)施例171制備化合物151采用與實(shí)施例81相同的方法，使用5-羧基-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛(0.3g,1.1mmol)并用嗎啉(0.19ml,2.2mmol)代替二乙胺制備4{3-甲?；?4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲?；鶀-嗎啉(0.092g,24.4％)。
采用與實(shí)施例94相同的方法(合成化合物67)，由4-{3-甲?；?4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲?；鶀-嗎啉(0.092g,0.27mmol)制備化合物151(0.066g,55.8％)。
4-{3-甲?；?4-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲酰基}-嗎啉1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.41(s,3H),2.89(s,4H)2.97(s,4H),6.97(d,J=8.3Hz,1H),7.22(m,1H),7.26(d,J=7.9Hz,2H),7.41(d,J=8.1Hz,2H),7.89(d,J=1.8Hz,1H),10.34(s,1H)FABMS m/z 342(M+H)+C19H19NO3S=341化合物1511HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.30(s,3H),3.40(s,4H)3.60(s,4H),7.13(d,J=8.3Hz,1H),7.27(d,J=8.4Hz,2H),7.35(d,J=7.7Hz,2H),7.39(d,J=8.3Hz,1H),7.92(s,1H),8.29(d,J=3.9Hz,1H),12.02(br s,1H)FABMS m/z 441(M)+C22H20N2O4S2=441
實(shí)施例172制備化合物152采用與實(shí)施例124合成5-乙?；?2-氟苯甲醛的方法相類(lèi)似的方法,由5-溴-4-氟苯甲醛(1.0g,4.9mmol)制備3-乙?；?4-氟苯甲醛(0.38g,47.0％)。
采用與實(shí)施例114合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛的方法相類(lèi)似的方法，由3-乙?；?4-氟苯甲醛(0.38g,2.3mmo1)并用3,4-二氯苯硫酚代替4-甲基苯硫酚制備3-乙酰基-4-[(3,4-二氯苯基)硫基]苯甲醛(0.l0g,13.7％)。
采用與實(shí)施例94相同的方法(合成化合物67)，由3-乙?；?4-[(3,4-二氯苯基)硫基]苯甲醛(0.1g,0.32mmol)制備化合物152(0.044g,32.5％)。
3-乙?；?4-氟苯甲醛1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.64(s,3H),7.25(dd,J=8.4,10.4Hz,1H),8.01(m,1H),8.35(dd,J=2.4,7.1Hz,1H),9.95(s,1H)CIMS m/z 167(M+H)+C9H7FO2=1663-乙?；?4-[(3,4-二氯苯基)硫基]苯甲醛1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.72(s,3H),6.95(d,J=2.0Hz,1H)7.37(dd,J=2.0,8.1Hz,1H),7.53(d,J=2.0Hz,1H),7.62(d,J=2.0Hz,1H),7.72(dd,J=1.8,8.3Hz,1H),8.35(d,J=1.8Hz,1H),9.95(s,1H)FABMS m/z 325(M+)C15H10Cl2O2S=325
化合物1521HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.69(s,3H),6.96(d,J=8.4Hz,1H)7.53(dd,J=2.0,8.3Hz,1H),7.66(dd,J=1.8,8.5Hz,1H),7.74(s,1H),7.78(d,J=8.3Hz,1H),7.86(d,J=2.0Hz,1H),8.32(d,J=1.8Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 424(M+)C18H11Cl2NO3S2=424實(shí)施例173制備化合物153采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物152(0.03g,0.071mmol)制備化合物153(0.094g,89.9％)。
化合物1531HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.50(s,3H),7.65(dd,J=2.0,8.3Hz,1H)7.74(dd,J=8.6Hz,1H),7.93(d,J=1.7Hz,1H),7.96(s,1H),8.11(dd,J=1.8,8.3Hz,1H),8.34(s,1H),8.46(d,J=8.8Hz,1H),12.77(br s,1H)FABMS m/z 440(M+)C18H11Cl2NO4S2=440實(shí)施例174制備化合物154采用與實(shí)施例114的合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛的方法相類(lèi)似的方法，由5-硝基-2-氟苯甲醛(0.30g,1.77mmol)并用2,3-二氯苯硫酚代替p-甲苯硫醇制備2-[(2,3-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.57g,97.9％)。
采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由2-[(2,3-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.3g,0.91mmol)制備化合物154(0.088g,22.5％)。
2-[(2,3-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.91(d,J=8.8Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.58(dd,J=1.5,7.7Hz,1H),7.66(dd,J=1.7,8.1Hz,1H),8.19(dd,J=2.6,8.9Hz,1H),8.72(d,J=2.6Hz,1H),10.31(s,1H)FABMS m/z 328(M+)C13H7Cl2NO3S=328化合物1531HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.25(d,J=8.6Hz,1H),7.55(d,J=2.0Hz,1H),7.57(s,1H),7.81(s,1H),7.92(d,J=2.0Hz,1H),8.16(dd,J=2.4,8.7Hz,1H),8.30(d,J=2.4Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 425(M-H)-C16H835Cl2N2O4S2=426實(shí)施例175制備化合物155采用與實(shí)施例114的合成5-溴-2-[(4-甲基苯基)硫基]苯甲醛的方法相類(lèi)似的方法，由5-硝基-2-氟苯甲醛(0.30g,1.77mmol)并用2,4-二氯苯硫酚代替p-甲苯硫醇制備2-[(2,4-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.53g,91.7％)。
采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由2-[(2,4-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.3g,0.91mmol)制備化合物155(0.13g,32.4％)。
2-[(2,4-二氯苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.86(d,J=8.8Hz,1H),7.40(dd,J=2.2,8.3Hz,1H),7.61(s,1H),7.64(t,J=2.6Hz,1H),8.17(dd,J=2.6,8.8Hz,1H),8.71(d,J=2.6Hz,1H),10.30(s,1H)FABMS m/z 328(M+)C13H735Cl2NO3S=327化合物1551HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.38(d,J=8.8Hz,1H),7.41(s,1H),7.43(d,J=1.3Hz,1H),7.75(dd,J=3.9,5.7Hz,1H),7.80(s,1H),8.20(dd,J=2.4,8.8Hz,1H),8.32(d,J=2.4Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 425(M-H)-C16H835Cl2N2O4S2=426實(shí)施例176制備化合物156采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物154(0.037g,0.085mmol)制備化合物156(0.016g,43.1％)。
化合物1561HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.74(dd,J=2.0,8.4Hz,1H),7.77(s,1H),7.79(s,1H),7.82(t,J=2.2Hz,1H),8.00(d,J=8.6Hz,1H),8.30(dd,J=2.2,8.7Hz,1H),8.42(d,J=2.2Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 441(M-H)-C16H835Cl2N2O5S2=442
實(shí)施例177制備化合物157采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物155(0.066g,0.15mmol)制備化合物157(0.030g,44.1％)。
化合物1571HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.67(t,J=7.7Hz,1H),7.85(d,J=0.9Hz,1H),7.88(s,1H),8.10(d,J=8.8Hz,1H),8.14(s,1H),8.28(d,J=2.2Hz,1H),8.42(d,J=2.4Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FABMS m/z 441(M-H)-C16H835Cl2N2O5S2=442實(shí)施例178制備化合物158采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物154(0.03g,0.070mmol)制備化合物158(0.0085g,26.4％)。
化合物1571HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.19(d,J=8.8Hz,1H),7.55(d,J=1.7Hz,1H),7.55(s,1H),7.70(s,1H),7.92(s,1H),8.11(dd,J=2.6,8.8Hz,1H),8.36(d,J=2.4Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)實(shí)施例179制備化合物159采用與實(shí)施例96相同的方法(合成化合物69)，由化合物155(0.03g,0.070mmol)制備化合物159(0.13g,38.9％)。
化合物159
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.35(d,J=8.8Hz,1H),7.40(s,1H),7.42(d,J=4.4Hz,1H),7.75(dd,J=2.4,6.7Hz,1H),7.76(s,1H),8.18(dd,J=2.6,8.8Hz,1H),8.35(d,J=2.6Hz,1H),NH沒(méi)有發(fā)現(xiàn)實(shí)施例180制備化合物160將2-氟-硝基苯甲醛(0.16mL,0.95mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(8.1mL)中，向溶液中加入4-巰基酚(0.11mg,0.86mmol)和三乙胺(0.27mL,1.9mmol),25℃攪拌1小時(shí)。在常規(guī)處理后，產(chǎn)物用硅膠柱色譜(用n-己烷/丙酮=4/1-1/1)提純得到5-硝基-2-[(4-羥基苯基)硫基]苯甲醛(0.18g,70％)。
將5-硝基-2-[(4-羥基苯基)硫基]苯甲醛(0.17g,0.61mmol)溶解在甲苯(8.4mL)中,加入2,4-噻唑烷二酮(0.29mg,2.4mmol)、哌啶(0.024mL,0.24mmol)、乙酸(0.014mL,0.24mmol)和分子篩4A(0.84g),110℃攪拌2小時(shí)。在常規(guī)后處理后，經(jīng)薄層色譜(用氯仿/甲醇=10/1)純制，得到化合物160(34mg,15％)。
5-硝基-2-[(4-羥基苯基)硫基]苯甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.97(d,J=9.0Hz,1H),7.03(d,J=8.6Hz,2H),7.40(d,J=8.8Hz,2H),8.06(m,1H),8.61(br s,1H),8.63(d,J=2.3Hz,1H),12.29(s,1H)
化合物1601HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)6.94(d,J=8.8Hz,3H),7.45(d,J=8.6Hz,2H),7.87(s,1H),8.13(dd,J=2.4,8.8Hz,1H),8.20(d,J=2.2Hz,1H),10.20(s,1H),12.86(br s,1H)FABMS m/z 373(M-H)-C16H10N2O5S2=374實(shí)施例181制備化合物161采用與實(shí)施例97相同的方法，由3,4-二甲基苯硫醇(0.16mL,1.2mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(2.1mL,5.2mmol)、四丁基溴化銨(0.020mg,0.61mmol)和2-氟-5-硝基苯甲醛(0.21mg,1.2mmol)的甲苯溶液(2.1mL)制備2-[(3,4-二甲基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.16g,45％)。
化合物161(0.13g,64％)由2-[(3,4-二甲基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛(0.16g,0.54mmol)、甲苯(7.8mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.26mg,2.2mmol)、哌啶(0.022mL,0.22mmol)、乙酸(0.0l2mL,0.22mmol)和分子篩4A(0.78g)制備。
2-[(3,4-二甲基苯基)硫基]-5-硝基苯甲醛1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)2.31(s,3H),2.36(s,3H),6.97(d,J=9.0Hz,1H),7.24-7.36(m,3H),8.09(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),8.67(d,J=2.6Hz,1H),10.31(s,1H)FABMS m/z 287(M)+C15H13NO3S=287
化合物1691HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)2.25(s,3H),2.28(s,3H),7.06(d,J=9.0Hz,1H),7.33(s,2H),7.40(s,1H),7.88(s,1H),8.15(m,1H),8.21(m,1H),12.86(br s,1H)FABMS m/z 385(M-H)-C18H14N2O4S2=386實(shí)施例182制備化合物162采用與實(shí)施例134相同的方法，由實(shí)施例56制備的化合物72(0.061g,0.14mmol)、二氯甲烷(6.1mL)、甲醇(1.2mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.75g,2.1mmol)制備化合物162(0.60mg,0.9％)。
化合物1621HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.96(d,J=8.4Hz,1H),8.02(dd,J=8.7,2.2Hz,1H),8.17(s,1H),8.28(s,1H),8.32(d,J=2.2Hz,1H),8.44(d,J=1.3Hz,2H),化合物183制備化合物163采用與實(shí)施例156相同的方法，由實(shí)施例108制備的化合物81(0.10g,0.26mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(5.1mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.14g,0.82mmol)制備化合物163(0.0034g,32％)。
化合物1631HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.58(d,J=8.4Hz,2H),7.74(d,J=8.4Hz,2H),8.00(s,1H),8.30(dd,J=8.2Hz,1H),8.48(d,J=8.2Hz,1H),8.53(d,J=1.4Hz,1H),12.83(br s,1H)FABMS m/z 407(M-H)-C16H935ClN2O5S2=408實(shí)施例184制備化合物164向4-乙基苯硫醇(0.20g,1.2mmol)中加入2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(2.0mL,4.9mmol)和四丁基溴化銨(0.019g,0.58mmol),25℃攪拌5分鐘。再加入4-氟-3-硝基苯甲醛(0.20g,1.2mmol)的甲苯溶液(2.0ml),25℃攪拌12小時(shí)。在常規(guī)處理后，產(chǎn)物用硅膠柱色譜(用氯仿洗脫)提純得到4-[(4-乙基苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛(0.25g,75％)。
將4-[(4-乙基苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛(0.25g,0.86mmol)溶解在乙醇(9.9mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.40mg,3.4mmol)和哌啶(0.034mL,0.34mmol),80℃攪拌7小時(shí)。過(guò)濾收集析出的晶體得到化合物164(0.061g,19％)。
4-[(4-乙基苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)1.31(t,J=7.7Hz,3H),2.76(q,J=7.5Hz,2H),7.01(d,J=8.4Hz,1H),7.37(d,J=8.2Hz,2H),7.50(d,J=8.2Hz,2H),7.81(dd,J=8.4Hz,1.8Hz,1H),8.69(d,J=1.6Hz,1H),9.97(s,1H)FABMS m/z 287(M)+C15H13NO3S=287
化合物1641HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.24(t,J=7.5Hz,3H),2.70(q,J=7.3Hz,2H),6.92(d,J=8.6Hz,1H),7.08(br s,1H),7.43(d,J=8.1Hz,2H),7.56(d,J=8.0Hz,2H),7.58(s,1H),7.72(dd,J=8.6,2.0Hz,1H),8.44(d,J=1.8Hz,1H)FABMS m/z 385(M-H)-C18H14N2O4S2=386化合物185制備化合物165和166采用與實(shí)施例156相同的方法，由實(shí)施例184制備的化合物164(0.052g,0.14mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(2.6mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.44g,1.3mmol)制備化合物165(0.014g,26％)和化合物166(0.016g,26％)。
化合物1651HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.13(t,J=7.7Hz,3H),2.61(q,J=7.5Hz,2H),7.34(d,J=8.3Hz,2H),7.51-7.56(m,2H),7.95(2,1H),8.30(dd,J=8.4,1.6Hz,1H),8.48-8.52(m,2H),12.87(m,1H)FABMS m/z 401(M-H)-C18H14N2O5S2=402化合物1661HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.19(t,J=7.7Hz,3H),2.71(q,J=8.4Hz,2H),7.51-7.60(m,2H),7.80(s,1H),7.86-7.95(m,2H),8.03(dd,J=8.8,1.5Hz,1H),8.21(d,J=1.1Hz,1H),8.45(d,J=8.2Hz,1H),12.90(m,1H)FABMS m/z 417(M-H)-C18H14N2O6S2=418
實(shí)施例186制備化合物167采用與實(shí)施例184相同的方法，由3,4-二氯苯硫醇(0.13g,1.0mmol)、2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(1.8mL,4.4mmol)、四丁基溴化銨(0.017g,0.52mmol)和4-氟-3-硝基苯甲醛(0.18g,1.0mmol)的甲苯(1.8mL)溶液制備4-[(3,4-二氯苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛(0.29g,84％)。
化合物167(0.077g,15％)由4-[(3,4-二氯苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛(0.40g,1.2mmol)、乙醇(16mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.57mg,4.9mmol)和哌啶(0.048mL,0.49mmol)制備。
4-[(3,4-二氯苯基)硫基]-3-硝基苯甲醛1H NMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)7.03(d,J=8.4Hz,1H),7.44(dd,J=8.3,2.0Hz,1H),7.63(d,J=8.3Hz,1H),7.72(d,J=2.0Hz,1H),7.88(dd,J=8.4,1.8Hz,1H),8.73(d,J=1.8Hz,1H),10.00(s,1H)FABMS m/z 328(M+H)+C13H735Cl2NO3S=327化合物1671HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.11(d,J=8.6Hz,1H),7.65(dd,J=8.3,2.2Hz,2H),7.77(dd,J=2.0,8.6Hz,1H),7.85(d,J=8.2Hz,1H),7.87(s,1H),8.02(d,J=2.0Hz,1H),8.52(d,J=2.0Hz,1H),12.74(br s,1H)FABMS m/z 425(M-H)-C16H835Cl2N2O4S2=426
化合物187制備化合物168采用與實(shí)施例156相同的方法,由實(shí)施例186制備的化合物167(0.031g,0.073mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(1.6mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.035g,0.10mmoL)制備化合物168(0.017g,54％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.69(m,1H),7.78(d,J=8.5Hz,1H),8.00(s,2H),8.28(d,J=8.1Hz,1H),8.48(d,J=8.9Hz,1H),8.53(s,1H),12.84(br s,1H)FABMS m/z 441(M-H)-C16H835Cl2N2O5S2=442實(shí)施例188制備化合物169和化合物170采用與實(shí)施例156相同的方法，由實(shí)施例181制備的化合物161(0.10g,0.27mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(5.2mL)和m-氯過(guò)苯甲酸(0.46g,4.0mmoL)制備化合物169(0.080g,75％)和化合物170(2.5mg,2.3％)。
化合物169:FABMS m/z 401(M-H)-C18H14N2O5S2=402化合物170:FABMS m/z 417(M-H)-C18H14N2O6S2=418實(shí)施例189制備N(xiāo)-(4-氯苯基)-4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯磺酰胺 步驟A通用過(guò)程1通用過(guò)程1后用苯甲醛得到5-次芐基-噻唑烷-2,4-二酮。
NMR(DMSO-d6):7.75(s,1H),7.6-7.4(m,5H)MS(ESI)205，實(shí)測(cè)204(M-H)步驟B制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯磺酰氯向用冰浴冷卻的裝有氯磺酸(10當(dāng)量)的燒瓶中加入5-次芐基-噻唑烷-2,4-二酮。溶液在0℃下攪拌1小時(shí)，溫?zé)岬绞覝夭嚢柽^(guò)夜。之后，將反應(yīng)液小心地倒在冰上，將得到的沉淀過(guò)濾并空氣干燥得到純產(chǎn)物。
NMR(DMSO-d6):7.72(s,1H),7.66(d,2H),7.51(d,2H)MS(ESI)303，實(shí)測(cè)302(M-H)步驟C磺?；磻?yīng)將磺酰氯和4-氯-苯胺在吡啶中一起攪拌，加熱至60℃持續(xù)12小時(shí)。溶液用EtOAC稀釋?zhuān)缓笠来斡?0％NaHSO4和NaCl水溶液洗滌。分離有機(jī)層，用Na2SO4干燥，減壓濃縮得到純化合物。
MS(ESI)394，實(shí)測(cè)393(M-H)實(shí)施例190制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-N-p-甲苯基-苯磺酰胺
采用實(shí)施例189的方法，由p-甲苯胺制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-N-p-甲苯基-苯磺酰胺MS(ESI)374，實(shí)測(cè)373(M-H)實(shí)施例191制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-N-(4-甲氧基-苯基)-苯磺酰胺 采用實(shí)施例189的方法，由p-茴香胺制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-N-(4-甲氧基-苯基)-苯磺酰胺MS(ESI)390，實(shí)測(cè)389(M-H)實(shí)施例192制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-N-(4-三氟甲基-苯基)-苯磺酰胺 采用實(shí)施例189的方法，由4-(三氟甲基)苯胺制備4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-N-(4-三氟甲基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)428，實(shí)測(cè)427(M-H)
實(shí)施例193制備4,5-二氯-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基-甲基)-苯基]-鄰氨甲?；郊姿?步驟A在酸性環(huán)境下偶聯(lián)2,4-噻唑烷二酮(TZD)為醛將3-硝基苯甲醛、TZD(1.25當(dāng)量)、NaOAc(2當(dāng)量)和乙酸酐(1當(dāng)量)溶解在乙酸中，加熱回流12小時(shí)。冷卻反應(yīng)物并收集析出的沉淀，洗滌并空氣干燥得到純產(chǎn)物。將濾液傾入到水中，過(guò)濾得到的沉淀得到額外的產(chǎn)物。
MS(ESI)250，實(shí)測(cè)249(M-H)步驟B硝基的還原將5-(3-硝基-次芐基)噻唑烷-2,4-二酮溶解在過(guò)量乙酸中。加入少量甲醇以使反應(yīng)物充分溶解。將溶液緩慢加熱，加入鐵粉(5當(dāng)量)。4小時(shí)后，過(guò)濾混合物以除去鐵粉，用等量水稀釋?zhuān)⒂肊tOAc萃取。將有機(jī)層真空濃縮，得到棕色固體。殘余物溶解在甲醇中，通過(guò)過(guò)濾除去雜質(zhì)。濃縮濾液，所得殘余物用己烷研制，經(jīng)過(guò)濾收集得到產(chǎn)物。
MS(ESI)220，實(shí)測(cè)219(M-H)步驟C與乙酸酐縮合將5-(3-氨基-次芐基)-噻唑烷-2,4-二酮溶解在THF中，用4,5-二氯鄰苯二甲酸酐和催化劑量的DMAP處理。將溶液攪拌8小時(shí)，過(guò)濾并真空濃縮。將殘余物溶解于EtOAc中并用水洗滌。將有機(jī)層濃縮到油狀，用己烷研制所得到的固體產(chǎn)物，過(guò)濾收集得到產(chǎn)物，為固體。
MS(ESI)436，實(shí)測(cè)435(M-H)實(shí)施例194制備3,6-二氯-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-鄰氨甲酰苯甲酸 應(yīng)用實(shí)施例193的方法，由3,6-二氯鄰苯二甲酸酐制備3,6-二氯-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-鄰氨甲酰苯甲酸。
MS(ESI)436，實(shí)測(cè)435(M-H)
實(shí)施例1954-叔丁基-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-鄰氨甲酰苯甲酸 應(yīng)用實(shí)施例193的方法，由4-叔丁基-鄰苯二甲酸酐制備4-叔丁基-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-鄰氨甲酰苯甲酸，其以64∶36區(qū)域異構(gòu)體的混合物形式分離。
MS(ESI)425，實(shí)測(cè)423(M-2H)實(shí)施例196制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5亞基甲基)-苯基]-3-羥基-鄰氨甲酰苯甲酸 應(yīng)用實(shí)施例193的方法，由3-羥基鄰苯二甲酸酐制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-3-羥基-鄰氨甲酰苯甲酸，得到的是80∶20的區(qū)域異構(gòu)體的混合物。
MS(ESI)384，實(shí)測(cè)383(M-H)
實(shí)施例197制備3-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基氨甲?；鵠-吡嗪-2-羧酸 應(yīng)用實(shí)施例193的方法，由2,3-吡嗪二甲酸酐制備3-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基氨甲?；鵠-吡嗪-2-羧酸。
MS(ESI)370，實(shí)測(cè)369(M-H)實(shí)施例198制備3-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基氨甲酰基]-異煙酸 應(yīng)用實(shí)施例193的方法，由吡啶-3,4-二甲酸酐得到3-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基氨甲?；鵠-異煙酸，其以70∶30異構(gòu)體的混合物形式存在。
MS(ESI)369，實(shí)測(cè)368(M-H)
實(shí)施例199制備3-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基氨甲?；鵠-吡啶-2-羧酸 應(yīng)用實(shí)施例193的方法，由2,3-吡啶二甲酸酐制備3-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基氨甲酰基]-比啶-2-羧酸，并分離得到其異構(gòu)體的混合物。
MS(ESI)369，實(shí)測(cè)368(M-H)實(shí)施例200制備4-(4-氯-苯磺?；被?-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-苯甲酰胺 步驟A與酰氯縮合將制得的5-(3-氨基-次芐基)-噻唑烷-2,4-二酮溶解在吡啶中，并用4-硝基苯甲酰氯和催化劑量的DMAP處理。反應(yīng)溶液攪拌20分鐘，然后通過(guò)過(guò)濾收集沉淀。固體反復(fù)用水、飽和NaHCO3水溶液和10％鹽酸水溶液洗滌。將得到的固體空氣干燥。
MS(ESI)369，實(shí)測(cè)368(M-H)步驟B硝基的還原將4-硝基-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-苯甲酰胺懸浮在異丙醇中。將少量氯化銨溶解在水中，并加入到上述溶液中。將混合物加熱到70℃持續(xù)數(shù)小時(shí)。加入鐵粉，持續(xù)攪拌4小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾除去固體，濾液真空濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中，并用水洗滌。將有機(jī)層濃縮到油狀，通過(guò)加入己烷使產(chǎn)物沉淀。
MS(ESI)339，實(shí)測(cè)338(M-H)步驟C與磺酰氯縮合將4-氨基-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-苯甲酰胺溶解在吡啶中，并在60℃下于吡啶中用4-氯-苯磺酰氯處理12小時(shí)。冷卻溶液，用EtOAc稀釋?zhuān)缓笥?0％硫酸氫鈉水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗滌。分離有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮成油狀物。用己烷研磨，得到純產(chǎn)物。
MS(ESI)513，實(shí)測(cè)512(M-H)
實(shí)施例201制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-4-(甲苯-4-磺酰氨基)-苯甲酰胺 應(yīng)用實(shí)施例200的方法，由p-甲苯磺酰氯制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-4-(甲苯-4-磺酰氨基)-苯甲酰胺。
MS(ESI)493，實(shí)測(cè)492(M-H)實(shí)施例202制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-4-(4-甲氧基-苯磺酰氨基)-苯甲酰胺 應(yīng)用實(shí)施例200的方法，由4-甲氧基苯磺酰氯制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-4-(4-甲氧基-苯磺酰氨基)-苯甲酰胺。
MS(ESI)509，實(shí)測(cè)508(M-H)
實(shí)施例203制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-4-(4-三氟甲氧基-苯磺酰氨基)-苯甲酰胺 應(yīng)用實(shí)施例200的方法，由4-(三氟甲氧基)苯磺酰氯制備N(xiāo)-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-4-(4-三氟甲氧基-苯磺酰氨基)-苯甲酰胺。
MS(ESI)563，實(shí)測(cè)562(M-H)實(shí)施例204制備4-苯磺酰氨基-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-苯甲酰胺 應(yīng)用實(shí)施例200的方法，由苯磺酰氯制備4-苯磺酰氨基-N-[3-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯基]-苯甲酰胺。
MS(ESI)479，實(shí)測(cè)478(M-H)。
實(shí)施例205制備N(xiāo)-(4-氯-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰胺 步驟A制備4-苯氧基-苯甲醛將碳酸鉀(1當(dāng)量)、4-氟苯甲醛和苯酚(1.2當(dāng)量)的懸浮液加熱到150℃并攪拌2天。反應(yīng)液冷卻到室溫并傾入到飽和碳酸氫鈉溶液和冰中。溶液用乙醚萃取。合并的有機(jī)層用水洗滌，用Na2SO4干燥。真空濃縮得到橙色油狀的純產(chǎn)物。步驟B與TZD縮合得到5-(4-苯氧基-次芐基)-噻唑烷-2,4-二酮將4-苯氧基-苯甲醛、TDZ(1.5當(dāng)量)和哌啶(2當(dāng)量)的乙醇溶液加熱到70℃，攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)液冷卻到室溫，傾入到10％鹽酸溶液中。將得到的沉淀過(guò)濾，用水洗滌并空氣干燥。
MS(ESI)297，實(shí)測(cè)296(M-H)。步驟C氯磺酰化得到4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰氯將5-(4-苯氧基-次芐基)-噻唑烷-2,4-二酮溶解在氯磺酸中，在0℃下攪拌30分鐘。然后將溶液傾入到入冰中，過(guò)濾收集沉淀，空氣干燥得到純產(chǎn)物。
MS(ESI)395，實(shí)測(cè)394(M-H)。步驟D與4-氯苯胺縮合得到磺酰胺將4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰氯和4-氯苯胺(1.1當(dāng)量)的吡啶溶液在溫?zé)嵯聰嚢?。然后真空除去吡啶，殘余物溶解在EtOAc中。有機(jī)層用10％鹽酸水溶液、碳酸氫鈉水溶液和氯化鈉水溶液洗滌，然后真空濃縮。得到的反應(yīng)殘余物用己烷研制得到純產(chǎn)物。
MS(ESI)486，實(shí)測(cè)485(M-H)。
實(shí)施例206制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-p-甲苯基-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由p-甲苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-p-甲苯基-苯磺酰胺。
MS(ESI)466，實(shí)測(cè)465(M-H)。
實(shí)施例207制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯磺酰胺
應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由4-(三氟甲氧基)苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)536，實(shí)測(cè)535(M-H)。
實(shí)施例208制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-甲氧基-苯基)-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由p-茴香胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-甲氧基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)482，實(shí)測(cè)481(M-H)。
實(shí)施例209制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-苯基-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-苯基-苯磺酰胺。
MS(ESI)452，實(shí)測(cè)451(M-H)。
實(shí)施例210制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基-苯基)-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由3,4,5-三甲氧基苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(3,4,5-三甲氧基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)542，實(shí)測(cè)541(M-H)。
實(shí)施例211制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-嗎啉-4-基苯基)-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由4-嗎啉代苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-嗎啉-4-基苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)537，實(shí)測(cè)536(M-H)。
實(shí)施例212制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-異丙基-苯基)-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由4-異丙基苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-異丙基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)494，實(shí)測(cè)493(M-H)。
實(shí)施例213制備N(xiāo)-(2-氯-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由2-氯苯胺制備N(xiāo)-(2-氯-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰胺。
MS(ESI)486，實(shí)測(cè)485(M-H)。
實(shí)施例214制備N(xiāo)-(3-氯-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由3-氯苯胺制備N(xiāo)-(3-氯-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-苯磺酰胺。
MS(ESI)486，實(shí)測(cè)485(M-H)。
實(shí)施例215制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-羥基-苯基)-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由4-氨基苯酚制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(4-羥基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)486，實(shí)測(cè)467(M-H)。
實(shí)施例216制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(2-羥基-苯基)-苯磺酰胺
應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由2-氨基苯酚制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(2-羥基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)468，實(shí)測(cè)467(M-H)。
實(shí)施例217制備N(xiāo)-(2-叔丁基-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由2-叔丁基苯胺制備N(xiāo)-(2-叔丁基-苯基)-4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]苯磺酰胺。
MS(ESI)508，實(shí)測(cè)507(M-H)。
實(shí)施例218制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-異丙基-N-苯基-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由N-異丙基苯胺制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-異丙基-N-苯基-苯磺酰胺。
MS(ESI)494，實(shí)測(cè)493(M-H)。
實(shí)施例219制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5-亞基甲基)-苯氧基]-N-(3-羥基-苯基)-苯磺酰胺 應(yīng)用實(shí)施例205的方法，由3-氨基苯酚制備4-[4-(2,4-二氧-噻唑烷-5亞基甲基)-苯氧基]-N-(3-羥基-苯基)-苯磺酰胺。
MS(ESI)468，實(shí)測(cè)467(M-H)。
實(shí)施例220制備5-[2-(3,4-二氯-芐基磺基)-嘧啶-4-亞基甲基]-2-硫代-噻唑烷-4-酮 步驟A用芐基鹵對(duì)嘧啶硫醇進(jìn)行烷基化向4-二甲氧基甲基-嘧啶-2-硫醇的鈉鹽在DMF和碳酸鉀(2當(dāng)量)中的懸浮液中加入α,3,4-三氯甲苯(1當(dāng)量)，將懸浮液攪拌兩天。反應(yīng)混合物用水稀釋?zhuān)肊tOAc萃取。有機(jī)層用水、氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮。步騾B縮醛的去保護(hù)將2-(3,4-二氯-芐基磺基)-4-二甲氧基甲基-嘧啶的濃鹽酸懸浮液回流5分鐘。將反應(yīng)液冷卻并傾入到水中。加入飽和碳酸氫鈉水溶液，將中和后的溶液用EtOAc萃取。有機(jī)層用Na2SO4干燥，真空濃縮得到產(chǎn)物。步驟C與繞丹寧縮合將繞丹寧(1當(dāng)量)、乙二胺二乙酸(1當(dāng)量)和2-(3,4-二氯-芐基磺基)-嘧啶-4-甲醛在甲醇中攪拌回流1小時(shí)。所得沉淀通過(guò)過(guò)濾收集,用甲醇、水、硫酸氫鈉水溶液和碳酸氫鈉水溶液洗滌。固體物質(zhì)空氣干燥。步驟D雙鍵還原在2,6-二甲基-1,4-二氫-3,5-吡啶羧酸鹽(1.1當(dāng)量)和活性硅膠的存在下，將5-[2-(3,4-二氯-芐基磺基)-密啶-4-基甲基]-2-硫代-噻唑烷-4-酮在甲苯中的懸浮液加熱到80℃。將懸浮液過(guò)濾并用EtOAc洗滌。濾液真空蒸發(fā)，所得殘余物重新溶解在EtOAc中，用1N HCL水溶液洗滌。有機(jī)層用Na2SO4干燥，真空濃縮得到粗產(chǎn)物。通過(guò)快速色譜得到純產(chǎn)物。
MS(ESI)415，實(shí)測(cè)414(M-H)。
實(shí)施例221制備5-[3-氨基-2-(2,4-二氯-苯甲?；?-噻吩并[2,3-b]吡啶-6-基亞甲基]-噻唑烷-2,4-二酮 步驟A6-二甲氧基甲基-2-巰基-煙酰腈的烷基化和環(huán)化將6-二甲氧甲基-2-巰基-煙酰腈和碳酸鉀(1.52當(dāng)量)的混合物用2,4-二溴乙酰苯(3.1當(dāng)量)處理，攪拌過(guò)夜。烷基化和環(huán)化的產(chǎn)物作為固體物質(zhì)被分離出來(lái)。步驟B縮醛的去保護(hù)(3-氨基-6-二甲氧基甲基-噻吩并[2,3-b]吡啶-2-基)-(2,4-二氯-苯基)-甲酮溶液在TFA和水的混合物中的溶液在室溫下攪拌，直到TLC顯示反應(yīng)結(jié)束。反應(yīng)液用冷的NaHCO3水溶液中和，并用EtOAc萃取。有機(jī)層用氯化鈉水溶液洗滌，真空下部分濃縮，并0℃保存過(guò)夜。收集析出的沉淀得到產(chǎn)物，為純的黃色粉末。步驟C與TZD縮合將醛與TZD和哌啶在乙醇中加熱到90℃，持續(xù)3天。將反應(yīng)液冷卻，然后傾入到10％HCL水溶液中。通過(guò)過(guò)濾分離得到純產(chǎn)物，為黃色固體。MS(ESI)449，實(shí)測(cè)448(M-H)。
實(shí)施例222制備2-氯-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 步驟A在堿性條件下將2,4-噻唑烷二酮(TZD)偶聯(lián)為醛將2-氯-3-喹啉甲醛、TZD(1.5當(dāng)量)和哌啶(1.5)溶解在乙醇中，并加熱回流5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻到室溫，傾入到乙醇中，加入1N HCL，收集黃色沉淀，用乙醚洗滌數(shù)次，室溫下空氣干燥24小時(shí)得到純產(chǎn)物(得率為45％)。
1HNMR(DMSO-d6)δ:12.8(br s,1H,NH),8.5(s,1H),8.2(d,1H),8.0-7.8(m,3H),7.7(t,1H)MS(ESI)290，實(shí)測(cè)289(M-H)。HPLC:92％純度實(shí)施例223制備2-苯硫基-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 步驟A將2-氯-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉和苯硫酚(1.2當(dāng)量)與乙氧基乙醇混合，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻到室溫，加入乙醚，過(guò)濾除去淺黃色沉淀，用乙醚清洗數(shù)次，室溫下空氣干燥24小時(shí)得到純產(chǎn)物(得率為36％)。
1HNMR(DMSO-d6)δ(br s,1H,NH),8.3(s,1H),8.1(d,1H),7.7(t,1H),7.6-7.5(m,4H),7.5-7.4(m,3H)MS(ESI)364，實(shí)測(cè)363(M-H)。HPLC:88％純度實(shí)施例224制備2-(4-氯苯硫基)-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 標(biāo)題化合物通過(guò)實(shí)施例223的方法制備。得率為69％。
1HNMR(DMSO-d6)δ12.8(br s,1H,NH),8.3(s,1H),8.00(d,2H),7.9(s,1H),7.7(t,1H),7.6-7.4(m,6H)MS(ESI)398，實(shí)測(cè)397(M-H)；399(M+H)。HPLC:92％純度實(shí)施例225制備2-(3,4-二氯苯硫基)-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 標(biāo)題化合物采用實(shí)施例223的方法并用乙醇為溶劑制備。得率為72％。
1HNMR(DMSO-d6)δ12.8(br s,1H,NH),8.34(s,1H),8.05(d,1H,J=8),7.87(d,1H,J=1.6),7.83(s,1H),7.71-7.53(m,6H)MS(ESI)433，實(shí)測(cè)431；432；433(M-H)433；435；436(M+H),HPLC純度為96％
實(shí)施例226制備2-(4-氟苯硫基)-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 上述化合物通過(guò)實(shí)施例223的方法制備，得率為23％。
1HNMR(DMSO-d6)δ12.6(br s 1H,NH),8.3(s,1H),8.00(d,1H),7.9(s,1H),7.7-7.4(m,5H),7.3(t,2H)MS(ESI)382，實(shí)測(cè)381(M-H)HPLC:100％純度實(shí)施例227制備2-(4-甲基苯硫基)-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉標(biāo)題化合物采用實(shí)施例223的方法制備。得率為24％。1HNMR(DMSO-d6)δ12.8(br s,1H,NH),8.3(s,1H),8.00(d,1H),7.9(s,1H),7.7(t,1H),7.6-7.5(m,2H),7.4(d,2H),7.3(d,2H),2.1(s,3H)MS(ESI)378，實(shí)測(cè)377(M-H)HPLC:86％純度實(shí)施例228制備2-(4-甲氧基苯硫基)-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 標(biāo)題化合物采用實(shí)施例223的方法制備。得率為35％。
1HNMR(DMSO-d6)δ12.8(br s,1H,NH),8.2(s,1H),8.0(d,1H),7.9(s,1H),7.8-7.4(m,5H),7.0(d,2H),3.8(s,3H)MS(ESI)394，實(shí)測(cè)393(M-H)HPLC:98％純度實(shí)施例229制備2-[4-(三氟甲基)苯硫基]-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 標(biāo)題化合物采用實(shí)施例223的方法制備。得率為55％。
1HNMR(DMSO-d6)δ12.8(br s,1H,NH),8.3(s,1H),8.1(d,1H),7.9(s,1H),7.8-7.6(m,5H),7.5(t,2H)MS(ESI)432，實(shí)測(cè)431(M-H).HPLC:100％純度實(shí)施例230制備2-(4-氯苯基亞硫酰基)-3-(2,4-二氧噻唑烷-5-亞基-甲基)喹啉 步驟A將實(shí)施例224制備的化合物溶解在CH2Cl2/CH3OH(5∶1)中，向該溶液中加入3-氯過(guò)氧苯甲酸(2當(dāng)量的77％最高純度物質(zhì))。在TLC分析顯示初始反應(yīng)物消失前，在室溫下攪拌混合物4小時(shí)。反應(yīng)混合物再額外攪拌2小時(shí)。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，白色結(jié)晶產(chǎn)物析出。過(guò)濾收集產(chǎn)物，用乙醚洗滌數(shù)次，空氣干燥48小時(shí)得到最終產(chǎn)物，得率為30％。
1HNMR(DMSO-d6)δ12.8(br s,1H,NH),8.5(s,1H),8.4(s,1H),8.2(d,1H),8.1(d,1H),7.9(t,1H),7.7(t,1H),7.6-7.4(m.4H)MS(ESI)414，實(shí)測(cè)413(M-H)；415(M+H).HPLC:100％純度參考實(shí)施例1制備化合物122將實(shí)施例5制備的化合物5(23mg,0.056mmol)溶解在二甲基亞砜(2.0mL)和0.04mol/L緩沖溶液(pH7.2)(4.1mL)中，加入2-巰基乙醇(0.012mL,0.17mmo1),25℃攪拌40分鐘。在常規(guī)后處理之后，殘余物通過(guò)薄層色譜提純(用氯仿/甲醇=10/1展開(kāi))純制，得到初步純化的產(chǎn)物。產(chǎn)物進(jìn)一步用制備HPLC[ODS柱；用乙腈/磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖溶液洗脫(0.04mol/L；pH7.2)=30/70]，得到化合物122(5.7mg,31％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.26-3.39(m,2H),3.65-3.73(m,2H),5.12(m,1H),7.73(d,J=8.6Hz,1H),7.82(s,1H),8.16-8.24(m,2H),12.80(m,1H)FABMS m/z 325(M-H)-C12H10N2O5S2=326參考實(shí)施例2制備化合物123將2-氟-5-硝基苯甲醛(48mg,0.28mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(2.4mL)中，加入二正丙基胺(0.15mL,1.1mmol)和碳酸鉀(0.16g,1.1mmol),25℃攪拌1小時(shí)。在常規(guī)后處理后，殘余物用硅膠色譜提純(用氯仿洗脫)，得到2-(N,N-二-正丙基氨基)-5-硝基苯甲醛(49mg,69％)。
1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)0.89(t,J=7.6Hz,6H),1.66(tq,J=7.6,7.6Hz,4H),3.38(m,4H),7.03(d,J=9.1Hz,1H),8.21(dd,J=9.1,2.7Hz,1H),8.60(d,J=3.0Hz,1H),10.01(s,1H)FABMS m/z 251(M+H)+C13H18O3N2=250將2-(N,N-二-正丙基氨基)-5-硝基苯甲醛(46mg,0.18mmol)溶解在乙醇(1.8mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(86mg,0.74mmol)和哌啶(0.0073mL,0.073mmol),80℃攪拌6.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層柱色譜(用氯仿/乙腈=10/1展開(kāi))提純，得到化合物123(53mg,82％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)0.81(t,J=7.3Hz,6H),1.48-1.61(m,4H),3.21(t,J=7.2Hz,4H),7.24(d,J=9.4Hz,1H),7.62(s,1H),8.13(m,1H),8.20(m,1H),12,63(br s,1H)FABMS m/z 348(M-H)-C16H19O4N3S=349參考實(shí)施例3制備化合物124將2-氟-5-硝基苯甲醛(0.11g,0.63mmol)溶解在乙醇(4.2mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.29mg,2.5mmol)和哌啶(0.025mL,0.25mmol),80℃攪拌6.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，殘余物通過(guò)薄層柱色譜(用氯仿/7腈=10/1展開(kāi))提純，得到化合物124(24mg,12％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)1.57-1.72(m,6H),3.08-3.14(m,4H),7.26(d,J=8.6Hz,1H),7.56(s,1H),8.20(m,1H),8.21(s,1H),12.66(m,1H)FABMS m/z 332(M-H)-C15H15N3O4S=333參考實(shí)施例4制備化合物125將市場(chǎng)上可獲得的2-嗎啉代-5-硝基苯甲醛(0.11g,0.44mmol)(MAYBRIDGE，目錄號(hào)RHO1290)溶解在乙醇(4.2mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.21mg,1.8mmol)和哌啶(0.018mL,0.18mmol),80℃攪拌6小時(shí)。將反應(yīng)溶液冷卻到25℃，過(guò)濾收集析出的晶體，得到化合物125(0.12g,82％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.10-3.16(m,4H),3.73-3.80(m,4H),7.30(m,1H),7.67(br s,1H),8.221-8.28(m,2H),12.65(m,1H)FABMS m/z 334(M-H)-C14H13N3O5S=335參考實(shí)施例5制備化合物126采用與參考實(shí)施例4相同的方法，由4-羥基-2-甲氧基苯甲醛(71mg,0.47mmol)、乙醇(2.8mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.22mg,1.9mmol)和哌啶(0.019mL,0.19mmol)制備化合物126(85mg,73％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)3.82(s,3H),6.51(s,1H),6.53(dd,J=11.7,2.2Hz,1H),7.25(d,J=8.5Hz,1H),7.93(s,1H),10.39(s,1H),12.38(br s,1H)FABMS m/z 250(M-H)-C11H9NO4S=251參考實(shí)施例6制備化合物127采用與參考實(shí)施例3相同的方法，由2-三氟甲氧基苯甲醛(73mg,0.38mmol)、乙醇(2.9mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.18g,1.5mmol)和哌啶(0.015mL,0.15mmol)制備化合物127(53mg,47％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.53-7.68(m,4H),7.80(s,1H)FABMS m/z 288(M-H)-C11H619NO3S=289
參考實(shí)施例7制備化合物128采用與參考實(shí)施例4相同的方法，由10-[(4-氯苯基)硫基]蒽-9-甲醛(0.13mg,0.38mmol)、乙醇(5.4mL)、2,4-噻唑烷二酮(0.18g,1.5mmol)和哌啶(0.015mL,0.15mmol)制備化合物128(34mg,20％)。
1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)6.92(d,J=8.6Hz,2H),7.25(d,J=8.4Hz,2H),7.64-7.77(m,4H),8.18(d,J=7.9Hz,2H),8.65(2,1H),8.78(d,J=8.1Hz,2H),12.68(m,1H)FABMS m/z 446(M-H)-C24H1435ClNO2S2=447參考實(shí)施例8制備化合物171向2-萘硫醇中加入2.5mol/L氫氧化鈉水溶液(2.1mL,5.2mmol)和四丁基溴化銨(0.020g,0.0061mmol)，隨后在25℃攪拌15分鐘。向反應(yīng)溶液中加入2-氟-5-硝基苯甲醛(0.21g,1.2mmol)的甲苯(2.1mL)溶液，隨后在110℃攪拌3.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，得到2-[(2-甲?；?4-硝基苯基)硫基]萘。將2-[(2-甲?；?4-硝基苯基)硫基]萘(0.3g,0.98mmol)溶解在甲苯(15mL)中，加入2,4-噻唑烷二酮(0.46g,3.9mmol)、哌啶(0.039mL,0.39mmol)、乙酸(0.022mL,0.039mmol)和分子篩4A(1.5g),110℃攪拌2.5小時(shí)。在常規(guī)后處理后，產(chǎn)物用乙醇研制得到化合物171(0.13g，得率為33％)。
2-[(2-甲?；?4-硝基苯基)硫基]萘1HNMR(300MHz,CDCl3)δ(ppm)6.99(d,J=8.8Hz,1H),7.52(dd,J=8.4,1.7Hz,1H),7.56-7.68(m,2H),7.85-7.98(m,3H),8.05(dd,J=2.4,8.8Hz,1H),8.15(s,1H),8.68(d,J=2.4Hz,1H),10.33(s,1H)FABMS m/z 310(M+H)+C17H11NO3S=309化合物1711HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)7.19(d,J=8.8Hz,1H),7.57(br d,J=8.5Hz,1H),7.59-7.68(m,2H),7.95(s,1H),7.97-8.04(m,2H),8.08(d,J=8.8Hz,1H),8.13(dd,J=8.4,1.8Hz,1H),8.28(br s,2H),12.82(m,1H)FABMS m/z 407(M-H)+C20H12N2O4S2=464實(shí)施例231制備具有親和力的純提取液用于篩選端粒酶抑制劑的提取液通常從過(guò)度表達(dá)端粒酶之蛋白催化亞單位(hTERT)的293細(xì)胞來(lái)制備。這些細(xì)胞端粒酶活性比母體293個(gè)細(xì)胞端粒酶活性大2-5倍。200ml堆積細(xì)胞(從約100升培養(yǎng)物中獲得的)再懸浮于等體積的等滲緩沖液(10mM Hepes pH7.9,1mM MgCl2,lmM DTT,20mM KCL,1mM PMSF)中，用dounce均質(zhì)器溶解。丙三醇濃度調(diào)節(jié)到10％，緩慢加入NaCl溶液，使最終濃度變?yōu)?.3M。溶解的細(xì)胞攪拌30分鐘，在100000xg下離心1小時(shí)。向S100上清液中加入固體硫酸銨達(dá)到42％飽和濃度。對(duì)材料進(jìn)行離心處理，沉淀物再懸浮于原溶液的1/5容量中，相對(duì)于含有50mM NaCl的緩沖溶液“A”中滲析。滲析后，提取液在25000xg下離心30分鐘。在親合色譜法前，加入三硝基甲苯X-100(0.5％)、KCL(0.3M)和tRNA(50μg/ml)。向提取液中加入寡親和物(affinity oligo)(5′生物素TEG-生物素TEG-生物素TEG-GTAGAC CTG TTA CCA guu agg guu ag3′；低級(jí)親和物的情況下代表2′O-甲基核糖核苷酸，高級(jí)親和物的情況下代表脫氧核糖核苷酸)(1nmol每10毫升提取液)。在30℃下培養(yǎng)10分鐘后，加入Nneutravidin小珠(Pierce；250μl的50％懸浮液)，混合物在4℃攪拌過(guò)夜。珠粒沉淀，用含有0.3M KCL的緩沖液“B”洗滌三次，用含有0.6M KCL的緩沖液“B”洗滌兩次，用含有0.3M KCL的緩沖液“B”再洗滌兩次。端粒酶在含有0.3M KCl、0.15％三硝基甲苯X-100和2.5摩爾過(guò)量的替代寡親和物(5′-CTAACC CTA ACT GGT AAC AGG TCT AC-3′，為0.5ml每125μl堆積的Neutravidin小珠)的緩沖液“B”中于室溫下洗脫30分鐘。進(jìn)行第二次洗脫并將洗脫液與第一次洗脫液合并。提純的提取液通常具每分鐘每μl提取液有10fmol已結(jié)合的核苷酸的特異活性，或每分鐘每毫克總蛋白200核苷酸。
實(shí)施例232端粒酶特異活性的測(cè)定用以下緩沖溶液建立3個(gè)獨(dú)立的100μl端粒酶分析50mM Tris-乙酸，pH8.2、1mM DTT、1mM EGTA、1mM MgCl2、100mM乙酸鉀、500μM dATP、500μM TTP、10μM32p-dGTP(25Ci/mmol)和a00 nMd(TTAGGG)3。分別向各反應(yīng)液加入2.5、5或10μl親和提純的端粒酶(參看實(shí)施例231)，反應(yīng)物在37℃培養(yǎng)。在45和90分鐘，從每個(gè)反應(yīng)移走40μl等分，加入160μl停止緩沖溶液(100mM NaCl,10mM焦磷酸鈉，0.2％SDS,2mM EDTA,100μg/ml tRNA)。加入10μl三氯乙酸(TCA)(100％)，樣品在冰上培養(yǎng)30分鐘。樣品在微離心(12000xg力)下離心15分鐘。沉淀用1ml95％乙醇洗滌，再在微離心(12000xg力)下離心5分鐘。沉淀在50μl dH2O中再懸浮，轉(zhuǎn)移到含有2.5ml5％TCA的冰冷溶液和10mM焦磷酸鈉的12×75玻璃試管中。樣品在冰上培養(yǎng)30分鐘。樣品在真空過(guò)濾管中，通過(guò)2.5cm濕(dH2O)GFC膜(S&S)過(guò)濾。濾液在真空下用5ml冰冷1％TCA洗滌3次，用5ml95％乙醇洗滌1次。濾液被干燥，應(yīng)用閃爍液體在閃爍計(jì)數(shù)器記數(shù)。結(jié)合的核苷酸的fmol通過(guò)放射性示蹤物的具體活性測(cè)定。提取液的活性以結(jié)合的dNTP為基礎(chǔ)計(jì)算，用fmol dNTP/min/μl提取液表示。
實(shí)施例233端粒酶活性測(cè)試Bio-Tel閃爍涂層分析通過(guò)測(cè)量TTAGGG端粒酶重復(fù)片段加入到生物素化端粒酶底物引物--端粒酶催化的反應(yīng)，提供了一種檢測(cè)和/或測(cè)量端粒酶活性的方法。生物素化的產(chǎn)物在鏈霉抗生物素蛋白包被的微量滴定板中獲得。如下面所描述的，寡核糖核酸探針補(bǔ)足標(biāo)記有[33p]3.5端粒酶重復(fù)被用來(lái)檢測(cè)端粒酶產(chǎn)物。未結(jié)合的探針通過(guò)洗滌除去，用于熱處理端粒酶產(chǎn)物的探針的數(shù)量通過(guò)閃爍記數(shù)測(cè)定。方法1．化合物以濃縮原料液儲(chǔ)存，并溶解于100％二甲基亞砜(DMSO)中。
2．為了測(cè)試，化合物在50％DMSO中稀釋為15X工作原料液，將2μl分配到兩個(gè)96-孔微滴定盤(pán)中(雙份分析)。
3．端粒酶提取液稀釋到特異活性為0.04-0.09fmol未結(jié)合的dNTP/每分鐘/每μl端粒酶緩沖液，并將18μl該提取液的稀釋液加入每個(gè)樣品孔中，在室溫下與化合物預(yù)培養(yǎng)30分鐘。
4．端粒酶反應(yīng)通過(guò)在含有端粒酶提取物和化合物的孔中加入10μlMaster Mix引發(fā)。這些盤(pán)被密封，在37℃培養(yǎng)90分鐘。
5．反應(yīng)通過(guò)加入10μl HCS停止。
6．25μl反應(yīng)混合物移入96-孔鏈霉抗生物素蛋白包被的閃爍盤(pán)(NEN)，室溫輕微攪拌下培養(yǎng)2小時(shí)。
7．各孔用180μl沒(méi)有培養(yǎng)的2X SSC洗滌3次。
8．用于熱處理生物素化的端粒酶產(chǎn)物的探針的數(shù)量通過(guò)閃爍記數(shù)測(cè)定。緩沖液端粒酶稀釋緩沖液
50mM Tris-乙酸，pH8.21mM DTT1mM EGTA1mM MgCl2830nM BSAMaster Mix(MM)50mM Tris-乙酸，pH8.21mM DTT1mM EGTA1mM MgCl2150mM乙酸鉀10μM dATP20μM dGTP120μM dTTP100nM生物素化引物(5′-生物素-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3′)5.4nM標(biāo)記的探針[5′-CCCTAACCCTAACCCTAACCC-(33P)A1-50-3′]；特異活性為約109cpm/μg或更高雜化俘獲溶液(HCS)12X SSC(1X=150mM NaCl/30mM檸檬酸三鈉)40mM EDTA40mM Tris-HCl,pH7.0應(yīng)用上述檢測(cè)方法，檢測(cè)結(jié)果表明實(shí)施例1-29的化合物的端粒酶IC50低于100μM。
實(shí)施例234抗腫瘤活性Exvivo研究a．腫瘤細(xì)胞中端粒長(zhǎng)度縮短應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的方法和物質(zhì)，以正常細(xì)胞作為對(duì)照組(如正常人BJ細(xì)胞)，制備腫瘤細(xì)胞系的集落，例如卵巢癌細(xì)胞系OVCAR-5和SK-OV-3。在一個(gè)測(cè)試中，通過(guò)在每個(gè)15cm盤(pán)中接種約106個(gè)細(xì)胞制備所述的集落。通過(guò)培養(yǎng)，可以使這些盤(pán)中的細(xì)胞集落發(fā)展到80％融合，此時(shí)將每個(gè)集落分為2組。在分裂、涂層之后，其中一組用預(yù)定濃度亞急性劑量的本發(fā)明化合物處理(例如在約5μM和20μM之間)4-8小時(shí)；另一組為對(duì)照組(例如DMSO)。
每組繼續(xù)分裂，然后所有組再次均分(接近融合)。接種同樣數(shù)量的細(xì)胞以使其繼續(xù)生長(zhǎng)。每隔四天，以初始加入的濃度向樣品中加入化合物或?qū)φ瘴?。保留的?xì)胞用來(lái)進(jìn)行端粒酶長(zhǎng)度分析。當(dāng)未測(cè)定的細(xì)胞培養(yǎng)到接近于融合，樣品再次按照所描述的進(jìn)行分裂。這一系列的細(xì)胞倍增和分裂持續(xù)約20-25倍增。因此，可以獲得端粒酶長(zhǎng)度與細(xì)胞倍增的函數(shù)關(guān)系。
端粒酶長(zhǎng)度通過(guò)用限制酶消化細(xì)胞的DNA(TRF分析)測(cè)定，這些酶針對(duì)人端粒酶中除重復(fù)性T2AG3序列以外的序列。被消化的DNA用標(biāo)準(zhǔn)凝膠電泳技術(shù)按大小分開(kāi)，以測(cè)定端粒酶重復(fù)片段的長(zhǎng)度。在用端粒酶DNA探針探測(cè)后，端粒酶重復(fù)片段在凝膠中作為高分子量DNA的涂層(大約2Kb-15Kb)。
端粒長(zhǎng)度的分析結(jié)果將顯示作為漸進(jìn)性細(xì)胞倍增的函數(shù)，本發(fā)明化合物對(duì)于對(duì)照細(xì)胞端粒酶的長(zhǎng)度減短的速度沒(méi)有影響。但是，用本發(fā)明化合物處理腫瘤細(xì)胞系，可測(cè)到端粒長(zhǎng)度的減短。用對(duì)照物處理的腫瘤細(xì)胞維持著穩(wěn)定的端粒長(zhǎng)度。因此，作為腫瘤細(xì)胞分裂的函數(shù)，本發(fā)明的化合物對(duì)端粒酶酶長(zhǎng)度正?？s短有恢復(fù)作用。
在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用上述方法，用濃度在1μM至約20μM的本發(fā)明化合物和對(duì)照物處理HEK-293細(xì)胞。在給藥本發(fā)明的測(cè)試化合物的隨后幾周內(nèi)，細(xì)胞進(jìn)入危機(jī)(即細(xì)胞功能的停止)。此外，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)方法，細(xì)胞TRF分析顯示了本發(fā)明的測(cè)試化合物對(duì)于減短端粒酶的長(zhǎng)度是有效的。除了上述HEK-293細(xì)胞，這個(gè)分析可用于任何端粒酶-陽(yáng)性細(xì)胞系，例如HeLa細(xì)胞。
b．特異性本發(fā)明的化合物應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的方法篩選出抗端粒酶以及具有核酸結(jié)合或?qū)τ诙肆Ｃ赣行迯?fù)活性的其它酶。被篩選的酶包括端粒酶、DNA聚合酶Ⅰ、HeLa RNA聚合酶Ⅱ、T3 RNA聚合酶、MMLV反轉(zhuǎn)錄酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ、末端轉(zhuǎn)移酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)。本發(fā)明化合物對(duì)端粒酶的特異性通過(guò)比較該化合物對(duì)端粒酶的IC50值和對(duì)其它每種被篩選酶的IC50值進(jìn)行測(cè)定。如果對(duì)端粒酶的IC50值比對(duì)其它每種被篩選酶的IC50值低，則該化合物對(duì)端粒酶有高度特異性。
另一種方法是，本發(fā)明化合物的端粒酶抑制活性可根據(jù)已知方法(美國(guó)專(zhuān)利5,760,062)進(jìn)行測(cè)定。即，每種藥劑的二甲基亞砜(DMSO)溶液與從HEK293細(xì)胞的核提取液中不完全提純的端粒酶混合，并且用作為底物的寡脫氧核苷酸和三磷酸脫氧核苷酸處理。得到的反應(yīng)產(chǎn)物(具有端粒序列的DNA)在細(xì)胞膜上被吸收，應(yīng)用被標(biāo)記的具有補(bǔ)足端粒序列的寡脫氧核苷酸探針進(jìn)行雜化。抑制的比例以有藥劑時(shí)在細(xì)胞膜上標(biāo)記的信號(hào)與無(wú)藥劑(對(duì)照)時(shí)標(biāo)記的信號(hào)的比例來(lái)計(jì)算。同時(shí)，每種以對(duì)照為基礎(chǔ)抑制50％酶活性的藥劑濃度作為IC50值使用。表7是被選擇化合物抑制活性的測(cè)定結(jié)果。
表7體外端粒酶抑制活性
括號(hào)中的數(shù)據(jù)為化合物濃度為10μM時(shí)體外端粒酶的殘余活性。
c．細(xì)胞毒性用HeLa細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性的XTT分析。在分析中使用的細(xì)胞系用濃度在1μM至1,000μM的本發(fā)明化合物處理72小時(shí)。在這段時(shí)期，樣品的光密度(OD)在540納米(nm)下進(jìn)行測(cè)定。在濃度小于5μM下沒(méi)有顯著細(xì)胞毒性影響。除了對(duì)照細(xì)胞系如正常人的BJ細(xì)胞，其他腫瘤細(xì)胞系例如子宮腫瘤細(xì)胞系OVCAR-5和SK-OV-3可用于測(cè)定細(xì)胞毒性。其它對(duì)于細(xì)胞毒性的分析方法例如MTT分析(參看Berridge等人，1996，生物化學(xué)4:14-19)和alarmBlueTM分析(美國(guó)專(zhuān)利5,501,959)可被很好的使用。
有些化合物可能在高于5μM(例如在10-20μM濃度或更高)時(shí)導(dǎo)致G2抑制。優(yōu)選地，應(yīng)在低于細(xì)胞毒性水平下觀察化合物對(duì)端粒酶抑制的影響。然而，因?yàn)樵S多癌化學(xué)療法的有效性源于細(xì)胞毒性的影響，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明化合物以任何以化學(xué)治療有效的劑量給藥。體外研究可應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和材料構(gòu)建人腫瘤細(xì)胞的異種移植模型，其中將OVCAR-5細(xì)胞植入裸鼠。小鼠被分為兩組。其中的一組用本發(fā)明的化合物進(jìn)行腹膜內(nèi)處理。另一組用含有DMSO或乙醇、emulphor(油)和磷酸緩沖溶液(PBS)處理。在用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行異種移植后，周期性地測(cè)定每組小鼠的平均腫瘤重。
用本發(fā)明化合物處理的組中，平均腫瘤重在最初處理一段時(shí)間后會(huì)增加，在此之后，腫瘤重穩(wěn)定然后開(kāi)始下降。通過(guò)研究，對(duì)照組中的腫瘤會(huì)增加。因此，本發(fā)明的化合物預(yù)計(jì)會(huì)顯著減慢腫瘤增長(zhǎng)的速度并最終導(dǎo)致腫瘤減小及腫瘤的消失。
在另一實(shí)驗(yàn)中，每種藥劑與人的腎腫瘤細(xì)胞系A(chǔ)CHN接觸3天，然后通過(guò)已知的方法(美國(guó)專(zhuān)利5,629,154)制備細(xì)胞提取液以測(cè)量酶的活性。也就是說(shuō)，用包含0.5％CHAPS的緩沖溶液制備細(xì)胞提取液。使用提取液，TRAP(端粒重復(fù)放大方法)分析在體外進(jìn)行(TRAPEZETMELISA端粒酶檢測(cè)試劑盒，由Intergen制造)。計(jì)算經(jīng)藥劑處理后的細(xì)胞提取液酶的活性與未經(jīng)處理的細(xì)胞提取液酶的活性的比例。結(jié)果示于表8中。
表8體內(nèi)端粒酶抑制活性
因此，本發(fā)明提供了抑制端粒酶活性和治療端粒酶活性在其中具有有害影響的疾病狀態(tài)的新化合物、藥物組合物和方法，尤其是癌癥。本發(fā)明的化合物提供了一種對(duì)于惡性細(xì)胞有高度選擇性且有效的治療方法，這些細(xì)胞需要端粒酶活性來(lái)保持不死；但是，這種治療不影響非惡性細(xì)胞。
盡管對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行了說(shuō)明和描述，但應(yīng)該理解的是，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變。
權(quán)利要求
1.一種抑制端粒酶的組合物，其包含具有2,4-二氧噻唑烷或4-氧代-2-硫代-噻唑烷骨架并具有端粒酶抑制活性的化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物具有2,4-二氧噻唑烷骨架。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述的化合物具有4-氧代-2-硫代-噻唑烷骨架。
4.一種抗腫瘤組合物，其包括具有2,4-二氧噻唑烷或4-氧代-2-硫代-噻唑烷骨架并具有抑制端粒酶活性的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述的化合物具有2,4-二氧噻唑烷骨架。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述的化合物具有4-氧代-2-硫代-噻唑烷骨架。
7.一種抑制端粒酶的組合物，包括式(Ⅰ)的化合物或其藥物可接受的鹽 其中X是O或S； 是單鍵或雙鍵；A是芳基或雜芳基；R1是氫或低級(jí)烷基；R2、R3和R4獨(dú)立地從以下組中選擇氫、鹵素、烷基、芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、氰基、硝基、烷基脲基、芳香基脲基、二烷基脲基、二芳基脲基、烷基芳基脲基、烷基硫脲基、芳基硫脲基、二烷基硫脲基、二芳基硫脲基、烷基芳基硫脲基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、二烷基氨基、二芳基氨基、芳基烷基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、二烷基氨基羰基、二芳基氨基羰基、芳基烷基氨基羰基、烷羰氧基、芳羰氧基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、磺基、烷磺酰氨基、芳磺酰氨基、烷基磺酰基、芳基磺?；?、烷基亞硫?；?、芳基亞硫?；碗s芳基；L是一個(gè)直接的鍵或一個(gè)連接基團(tuán)，其具有1-3個(gè)原子，并獨(dú)立地選自于非取代或取代的碳、氮、氧或硫；以及n等于1或2。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中X是O。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中 是一個(gè)單鍵。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中 是一個(gè)雙鍵。
11.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中R1是氫。
12.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中A是芳基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的組合物，其中芳基選自于以下組中苯基、聯(lián)苯基、萘基和蒽基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中化合物是式(Ⅱ)的化合物或其藥物可接受的鹽 其中X、R2、R3、R4、L和n如上所限定。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中X是O,R1是H,A是蒽基，L是S,R3是4-鹵素，R4是H，而n是1。
16.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中A是雜芳基。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中雜芳基選自于以下組中吡啶、喹啉、異喹啉、噻吩、呋喃、咪唑、苯并咪唑和吡唑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中化合物是式(Ⅲ)的化合物或其藥物可接受的鹽 其中X、R1、R2、R3和R4和L如上所限定。
19.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中R3和R4是鹵素。
20.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中n是1且R2不是氫。
21.根據(jù)權(quán)利要求7的組合物，其中所述的化合物選自于以下組中5-(2-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(3-(3,4-二氯苯基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯苯甲酰氨基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(N-3,4-二氯苯基脲基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(3-(N-3,4-二氯苯基氨甲酰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(N-3,4-二氯苯基氨甲?；?次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(N-3,4-二氯苯基氨甲酰氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(3,4-二氯苯氧基羰基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(3-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯苯基乙酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(3-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯苯甲酸基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(3,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(4-(3,4-二氯苯氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2,5-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2,4-二-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(2-(3,4-二氯芐硫基)-3H-嘧啶-4-酮-6-基次甲基)繞丹寧，5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧，5-(2-(3,4-二氯芐硫基)嘧啶-4-基次甲基)繞丹寧，5-(3-氰基-2-(3,4-二氯芐硫基)吡啶-6-基次甲基)噻唑烷-2,4-二酮，5-(3-(3,4-二氯芐氧基)次芐基)噻唑烷-2,4-二酮，以及它們藥物學(xué)上可接受的鹽。
22.一種抑制端粒酶的藥物組合物，其包括式(Ⅳ)的化合物或其藥物可接受的鹽 其中X是O或S； 是一個(gè)單鍵或雙鍵；R5是H或低級(jí)烷基；以及Ar是取代或非取代的芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、芳基鏈烯基、雜芳基鏈烯基、芳基炔基或雜芳基炔基。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的組合物，其中 是一個(gè)雙鍵。
24.一種抑制端粒酶的藥物組合物，其包括式(Ⅴ)的化合物或其藥物可接受的鹽 其中X是S或O；W是CH=CH、S或-N=C-；R6是H或低級(jí)烷基；R7是OH、鹵素、巰基、硝基、氰基、低級(jí)烷硫基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷酰氧基、NR11R12(其中R11和R12獨(dú)立地選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷?；?、芳基、雜芳基、雜芳烷基，或R11和R12形成取代或非取代雜環(huán))、CO2R13(其中R13選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、芳烷基和雜芳烷基)、CONR11R12、取代或非取代的芳基、取代或非取代雜芳基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、低級(jí)烷?；⒎减；?、低級(jí)鏈烯基、芳硫基或低級(jí)炔基；而且當(dāng)W代表S時(shí)，R7也可以是氫；L是O、S、SO、SO2、OCH2、SCH2、SOCH2、SO2CH2或N(R10)(CH2)m(其中R10是取代或非取代芳基、雜芳基、芳烷基、或雜芳烷基，m是0或1)、(CH2)N(R10)(CH2)m或CR13R14(其中R13和R14獨(dú)立地選自于氫、羥基、芳基和雜芳基)；以及A1是以下式(A1)的環(huán)烷基 其中Z1到Z5獨(dú)立地選自于以下組中氫、低級(jí)烷基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)烷酰氧基、巰基、烷硫基、NR11R12、硝基、氰基、CO2R13、CONR11R12、芳基、雜芳基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷氧基、雜芳烷氧基、鹵素和低級(jí)烷?；?，條件是當(dāng)W為CH=CH時(shí)，A也可以是吡啶基。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中W是S。
26.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中W是CH=CH。
27.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中L是OCH2。
28.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中L是N(R10)(CH2)。
29.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中L是S。
30.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中L是SO。
31.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中L是SO2。
32.根據(jù)權(quán)利要求26的組合物，其中L是SO。
33.根據(jù)權(quán)利要求26的組合物，其中L是SO2。
34.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中R7是硝基。
35.根據(jù)權(quán)利要求24的組合物，其中A1是4-甲基苯基。
36.根據(jù)權(quán)利要求26的組合物，其中A1是4-甲基苯基。
37.一種抑制端粒酶的方法，其包括使端粒酶接觸如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物。
38.一種抑制端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞增殖的方法，其包括使細(xì)胞接觸如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物。
39.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中所述的細(xì)胞是哺乳動(dòng)物的細(xì)胞。
40.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中所述的細(xì)胞是人的細(xì)胞。
41.根據(jù)權(quán)利要求40中的方法，其中所述的細(xì)胞是癌細(xì)胞。
42.一種治療腫瘤的方法，其包括使腫瘤接觸如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物。
43.一種藥物組合物，其包括藥物有效量的如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的化合物以及藥物可接受的載體。
44.權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物在抑制端粒酶活性方面的應(yīng)用。
45.權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物在抑制端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞增殖方面的應(yīng)用。
46.權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物在制備抑制端粒酶活性的藥物方面的應(yīng)用。
47.權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物在制備抑制細(xì)胞中的端粒酶活性的藥物方面的應(yīng)用。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的藥物，其中所述的疾病為癌癥。
49.權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物在制備抑制細(xì)胞中的端粒酶活性的藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及體外抑制端粒酶活性并治療端粒酶介導(dǎo)的病癥或疾病的噻唑烷酮類(lèi)化合物、組合物及方法。本發(fā)明的方法、化合物和組合物可單獨(dú)或與其它藥物活性劑組合用于治療由端粒酶介導(dǎo)的病癥或疾病如癌癥。還公開(kāi)了測(cè)試或篩選端粒酶活性抑制劑的新方法。
文檔編號(hào)A61K31/5377GK1321153SQ00801875
公開(kāi)日2001年11月7日 申請(qǐng)日期2000年6月30日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月1日
發(fā)明者阿利森·C·欽, 瑞安·霍爾庫(kù)姆, 米奇斯瓦夫·A·皮亞蒂什科, 烏品德·辛格, 理查德·L·托爾曼, 赤間務(wù), 菅田豐, 淺井彰, 山下義則, 遠(yuǎn)藤薰, 山口弘之 申請(qǐng)人:杰龍公司, 協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會(huì)社