組合及其用圖
【專利說明】組合及其用途
[0001] 本申請要求2012年9月25日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?1/705, 172和2013年 3月8日提交的美國臨時(shí)專利申請?zhí)?1/774, 595的優(yōu)先權(quán)，其每一個(gè)的公開內(nèi)容通過引用 以其整體結(jié)合到本文中。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本公開內(nèi)容描述了抗CD38抗體和美法侖的藥物組合。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 多發(fā)性骨髓瘤是B細(xì)胞惡性腫瘤，其特征在于在增殖指數(shù)低和壽命長的骨髓分泌 性漿細(xì)胞中潛在蓄積。該病最終攻擊骨和骨髓，導(dǎo)致整個(gè)骨骼系統(tǒng)中的多發(fā)性腫瘤和損傷。
[0005] 所有癌癥中有約1%且所有血液性惡性腫瘤中有近超過10%可歸因于多發(fā)性骨 髓瘤（MM)。MM的發(fā)生率在老年人群中增加，確診時(shí)年齡中位數(shù)為約61歲。目前可使用的 針對多發(fā)性骨髓瘤的療法包括化學(xué)療法，例如長春新堿、BCNU、美法侖、環(huán)磷酰胺、阿霉素 和潑尼松或地塞米松、干細(xì)胞移植、Thalomid? (沙利度胺）、Velcade? (硼替佐米）、 Aredia? (帕米膦酸鹽）和Zometa? (唑來膦酸）。目前的治療方案（包括化療劑的組 合）的完全緩解率僅約5%，而中位生存時(shí)間為從確診時(shí)間起大概36至48個(gè)月。使用高 劑量的化學(xué)治療之后接著自體骨髓或外周血液單核細(xì)胞移植的最新進(jìn)展增加了完整緩解 率和緩解持續(xù)時(shí)間。然而，總體生存時(shí)間僅略微延長，并且沒有證據(jù)顯示得到治愈。最終， MM患者常常復(fù)發(fā)，甚至在單獨(dú)或與類固醇類組合使用干擾素 a (IFN-α)進(jìn)行維持治療時(shí) 也如此。
[0006] ⑶38是在這類惡性漿細(xì)胞上表達(dá)的抗原的實(shí)例。⑶38所具有的功能包括在黏附 和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件中的受體介導(dǎo)以及（胞外）酶活性這二者。作為一種胞外酶，CD38使用 NAD+作為底物，用于環(huán)ADP-核糖（cADPR)和ADPR的形成，但也用于煙酰胺和煙酸-腺嘌 呤二核苷酸磷酸鹽（NAADP)的形成。已表明cADPR和NAADP起Ca2+動(dòng)員的第二信使的作 用。通過將NAD+轉(zhuǎn)化成cADPR，⑶38調(diào)節(jié)胞外NAD+濃度，因此通過調(diào)節(jié)NAD誘導(dǎo)的細(xì)胞死 亡（NCID)而調(diào)節(jié)細(xì)胞存活。除了經(jīng)由Ca2+進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)之外，⑶38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)經(jīng)由與T細(xì) 胞和B細(xì)胞上的抗原-受體復(fù)合物或其他類型的受體復(fù)合物（例如MHC分子）相互作用而 發(fā)生，并以此方式參與若干細(xì)胞反應(yīng)，并且還參與IgG轉(zhuǎn)換和分泌。
[0007] 現(xiàn)今，本領(lǐng)域公開了靶向CD38的各種方法。例如CD38特異性抗體 描述于 W01999/62526 (Mayo Foundation) ;W0200206347 (Crucell Holland); US2002164788 (Jonathan Ellis)，其通過引用以其整體予以結(jié)合；W02005/103083,美 國序列號(hào)10/588,568,其通過引用以其整體予以結(jié)合；W02006/125640,美國序列號(hào) 11/920, 830,其通過引用以其整體予以結(jié)合；W02007/042309,美國序列號(hào)12/089, 806,其 通過引用以其整體予以結(jié)合（MorphoSys AG) ;W02006099875,美國序列號(hào)11/886, 932,其 通過引用以其整體予以結(jié)合（Genmab);以及W008/047242,美國序列號(hào)12/441，466,其通過 引用以其整體予以結(jié)合（Sanofi-Aventis)。然而，為了改進(jìn)CD38抗體的功效，CD38特異性 抗體和其它作用劑的不同組合療法已公開于例如W0200040265,美國序列號(hào)09/226,895， 其通過引用以其整體予以結(jié)合（Research Development Foundation) ;W02006099875 和 W02008037257,美國序列號(hào)11/886,932和12/442,808,其通過引用以其整體予以結(jié)合 (Genmab) ;TO2012/041800(MorphoSys AG)和 TO2010061360,美國序列號(hào) 13/131，389,其 通過引用以其整體予以結(jié)合；W02010061359,美國序列號(hào)13130867,其通過引用以其整 體予以結(jié)合，W02010061358,美國序列號(hào)13130865,其通過引用以其整體予以結(jié)合；以及 W02010061357,美國序列號(hào)13/130, 862,其通過引用以其整體予以結(jié)合（Sanofi Aventis)， 所有文獻(xiàn)均通過引用以其整體予以結(jié)合。
[0008] 然而涉及表達(dá)⑶38的腫瘤的許多形式的癌癥的預(yù)后仍差，且現(xiàn)有療法并不足夠。 因此，需要用于治療這類形式的癌癥的改進(jìn)方法。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 出乎意料的是，發(fā)現(xiàn)特定抗CD38抗體與美法侖的組合顯示在臨床相關(guān)的多發(fā)性 骨髓瘤體內(nèi)模型中降低骨溶解的協(xié)同水平。由于其出乎意料的協(xié)同效應(yīng)所致，該組合提供 用于治療人的多發(fā)性骨髓瘤的有前景的改進(jìn)方法。
[0011] 一方面，本公開內(nèi)容涉及⑶38特異性抗體和美法侖的協(xié)同組合。另一方面，本公 開內(nèi)容涉及包含CD38特異性抗體和氮芥烷化劑的藥物組合物。所述組合可用于治療涉及 腫瘤細(xì)胞（例如多發(fā)性骨髓瘤）的癌癥。
[0012] 美法侖是一種氮芥烷化劑，因此，其它氮芥烷化劑，例如環(huán)磷酰胺、氮芥、烏拉莫司 汀、苯丁酸氮芥、異環(huán)磷酰胺或苯達(dá)莫司汀，當(dāng)與抗CD38抗體組合使用時(shí)也可導(dǎo)致協(xié)同效 應(yīng)。
[0013] 另一方面包括抗CD38抗體和氮芥烷化劑的協(xié)同組合在治療慢性淋巴細(xì)胞白血 病、慢性髓細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞白血病和/或急性淋巴細(xì)胞白血病中的用途。
[0014] 本公開內(nèi)容的一個(gè)方面包括CD38特異性抗體和美法侖的組合，其中所述CD38特 異性抗體包含序列 GFTFSSYYMN(SEQ ID N0:1)的 HCDR1、序列 GIS⑶PSNTYYADSVKG(SEQ ID N0:2)的 HCDR2、序列 DLPLVYTGFAY(SEQ ID N0:3)的 HCDR3、序列 S ⑶ NLRHYYVY(SEQ ID NO: 4)的 LCDR1、序列⑶SKRPS(SEQ ID N0:5)的 LCDR2 和序列 QTYTGGASL(SEQ ID N0:6)的 LCDR3。在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述組合用于治療多發(fā)性骨髓瘤。
[0015] 附圖描述
[0016] 圖1顯示實(shí)施例3中所述各研宄組的MicroCT掃描平均總骨體積。在各組中，使 用 3. Omg/kg M0R03087 和 4. Omg/kg 美法侖。
[0017] 圖2顯示實(shí)施例3中所述各研宄組的MicroCT掃描平均總骨體積。在各組中，使 用 3. Omg/kg M0R03087 和 8. Omg/kg 美法侖。
[0018] 圖3顯示分離自使用⑶38抗體（M0R03087)和美法侖及其組合的原位骨質(zhì)溶解模 型小鼠的血清中的平均蛋白質(zhì)M濃度。
[0019] 圖4顯示M0R202的氨基酸序列。
[0020] 發(fā)明詳述
[0021] 定義
[0022] "藥物組合物"包括至少一種活性劑，例如在人體內(nèi)用于治療用途的抗體。藥物組 合物還包括活性劑（例如在人體內(nèi)用于治療用途的抗體）和氮芥的組合。藥物組合物可包 括可接受的載體或賦形劑。
[0023] "給予"或"給藥"包括但不限于通過可注射形式遞送，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮內(nèi)或皮 下途徑或粘膜途徑，例如作為鼻噴霧劑或氣霧劑用于吸入法，或作為可攝食的溶液劑、膠囊 劑或片劑。
[0024] "協(xié)同"、"協(xié)同作用"或"協(xié)同活性"意指超過預(yù)期的組合的相加效應(yīng)。組合的"協(xié) 同"、"協(xié)同作用"或"協(xié)同活性"在本文通過Clarke等人的方法測定。參見Clarke等，Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models (乳腺癌和其它模型中 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)性細(xì)胞毒性劑研宄的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和終點(diǎn)分析中的問題），Breast Cancer Research and Treatment46 :255-278(1997)，其通過引用以其整體予以結(jié)合。
[0025] 術(shù)語"抗體"意指單克隆抗體，包括任何同種型，例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。 IgG抗體由通過二硫鍵相連接的兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈組成。每條重鏈和輕鏈 含有一個(gè)恒定區(qū)和一個(gè)可變區(qū)。每個(gè)可變區(qū)含有被稱為"互補(bǔ)決定區(qū)"（"CDR"）或"超變 區(qū)"的三個(gè)區(qū)段，主要負(fù)責(zé)結(jié)合抗原的表位。它們按順序從N末端編號(hào)，被稱為CDR1、CDR2 和CDR3。CDR以外的可變區(qū)的更高度保守的部分被稱為"構(gòu)架區(qū)"。"抗體片段"是指Fv、 scFV、dsFv、Fab、Fab'、F(ab' )2片段或其他片段，它包含至少一個(gè)可變重鏈或可變輕鏈， 各自含有CDR和構(gòu)架區(qū)。"抗原結(jié)合片段"是與目標(biāo)抗原（例如CD38)特異性結(jié)合的抗體片 段。
[0026] 本文所用術(shù)語"單克隆抗體"是指單一分子組成的抗體分子的制備物。單克隆抗 體組成對特定表位顯示單一結(jié)合特異性和親和力。
[0027] "VH"是指抗體或抗體片段的免疫球蛋白重鏈的可變區(qū)。"VL"是指抗體或抗體片 段的免疫球蛋白輕鏈的可變區(qū)。
[0028] 術(shù)語"⑶38"是指稱為⑶38的蛋白質(zhì)。
[0029] 人⑶38具有以下氨基酸序列：
[0030] MANCEFSPVS⑶KPCCRLSRRAQLCLGVSILVLILVVVLAVVVPRWRQQWSGPGTTKRFPETVLARC VKYTEIHPEMRHVDCQSVffDAFKGAFISKHPCNITEEDYQPLMKLGTQTVPCNKILLffSRIKDLAHQFTQVQRDM FTLEDTLLGYLADDLTWCGEFNTSKINYQSCPDWRKDCSNNPVSVFWKTVSRRFAEAACDVVHVMLNGSRSKIFD KNSTFGSVEVHNLQPEKVQTLEAWVIHGGREDSRDLCQDPTIKELESIISKRNIQFSCKNIYRPDKFLQCVKNPE DSSCTSEIo (SEQ ID NO ：11)
[0031] "M0R202"，一種抗CD38抗體，圖4提供了其氨基酸序列和DNA序列。"M0R202"和 "M0R03087"作為同義詞使用，描述圖4所示抗體。M0R03087公開于美國專利8, 088, 896,其 通過引用以其整體予以結(jié)合。
[0032] 術(shù)語"表位"是指被免疫球蛋白或T細(xì)