專利名稱：毒蕈堿受體激動劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物與有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，并提供了對毒蕈堿受體具有活性的化合物。
本發(fā)明化合物為毒蕈堿受體激動劑。更具體講，本發(fā)明的化合物是毒蕈堿M-1受體的選擇性激動劑。因而，它們可用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)及其它身體系統(tǒng)的多種不同疾病。這些疾病包括認(rèn)知障礙、ADHD、肥胖癥、阿爾茨海默病(Alzheimer病)、包括精神分裂癥在內(nèi)的精神病，并且這些化合物還可用于緩解如青光眼的眼內(nèi)壓。
在PCT公開號WO 97/25983(
公開日1997年7月24日)和WO99/04778(
公開日1999年2月4日)中，描述了一些可用于治療毒蕈堿性膽堿能系統(tǒng)機(jī)能不良相關(guān)疾病的2，3-二氫化茚類化合物。
本發(fā)明提供了式I化合物或其可藥用的加成鹽 式I其中Q，X，Y，和Z獨立地選自CR1和N，條件是Q、X、Y、和Z中至多兩個是N，且Q、X、Y和Z中至少兩個為CH；或者Y為CH，Z為CH，而“Q＝X”部分表示“S”以形成噻吩環(huán)；R1在每次出現(xiàn)時獨立選自氫，鹵素，C1-C4烷氧基和C1-C4烷基；R2選自鹵素；C1-C4烷氧基；C1-C4烷基；C3-C8環(huán)烷基；氰基；三氟甲基；任選被一個或兩個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的吡啶基；任選被一個選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的噻吩基；任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基和氰基的取代基取代的苯基；以及任選被一個或兩個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的吡咯基；R3選自任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代的苯基；任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代的萘基；任選被一個或兩個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的雜芳基；或任選被一個選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基(benzodioxolyl)；R4選自氫，羥基和氟；R5選自氫，鹵素，C1-C4烷氧基，和C1-C4烷基；Ra選自氫和甲基；t為1，2，或3；和m為1或2。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包括式I化合物和可藥用的稀釋劑。
由于式I化合物為M-1毒蕈堿受體的激動劑，因此這些式I化合物可用于治療與毒蕈堿受體有關(guān)的各種不同疾病，包括認(rèn)知疾病(包括與年齡有關(guān)的認(rèn)知疾病、輕度認(rèn)知缺損、與精神分裂癥有關(guān)的認(rèn)知缺損和化學(xué)治療誘發(fā)的認(rèn)知缺損)，ADHD，心境障礙(包括抑郁癥、躁狂、雙相性精神障礙)，精神病(特別是精神分裂癥)，癡呆癥(包括阿爾茨海默病(Alzheimer病)、AIDS誘發(fā)的癡呆、血管性癡呆、以及缺乏區(qū)別組織學(xué)性癡呆(dementia lacking distinctivehistology))，帕金森病和杭廷頓氏舞蹈病。同樣，本發(fā)明化合物也可用于治療慢性結(jié)腸炎，包括Crohn’s病。此外，本發(fā)明化合物還可用于治療疼痛(包括急性疼痛和慢性疼痛)，口腔干燥(口干燥)，Lewy體病(leuy body disease)(包括彌散性Lewy體病)，失語癥(包括原發(fā)性失語和原發(fā)性失語綜合征)，以及低血壓綜合征。
在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供了治療與毒蕈堿受體有關(guān)疾病的方法，包括向需要的患者施用有效量的式I化合物。亦即，本發(fā)明提供了式I化合物或其藥物組合物在制備用于治療與毒蕈堿受體有關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了用于治療的式I化合物。
本文使用的下列術(shù)語具有指定含義術(shù)語“鹵素”是指氯、氟、溴或碘原子。
術(shù)語“C1-C4烷基”是指具有1到4個碳原子的直鏈或支鏈烷基，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基等。術(shù)語“C3-C8環(huán)烷基”是指環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。
術(shù)語“C1-C4烷氧基”是指連接在氧原子上具有1到4個碳原子的直鏈或支鏈烷基鏈，并且包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
術(shù)語“雜芳基”是指包含1-2個選自氮、氧和硫的雜原子的穩(wěn)定不飽和五-或六-元環(huán)。雜芳基的實例包括吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吡咯基、噁唑基、異噁唑基、咪唑基、噻唑基、噠嗪基、呋喃基、噻吩基等。優(yōu)選的雜芳基為噻吩基、吡啶基和呋喃基。
本發(fā)明化合物能夠與各種不同的有機(jī)酸與無機(jī)酸形成可藥用的酸加成鹽，包括藥物化學(xué)中常用的生理上可接受的鹽。這些鹽也是本發(fā)明的一部分?！翱伤幱玫乃峒映甥}”是由本領(lǐng)域公知的可藥用酸形成的。這些鹽包括Journal of Pharmaceutical Science，66，2-19(1977)中列出的可藥用鹽，它們是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。用于形成這類鹽的典型無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、次磷酸、偏磷酸、焦磷酸等。也可以使用由有機(jī)酸形成的鹽，這些酸如脂族單和二羧酸，苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二酸、芳酸、脂族和芳族磺酸。這些可藥用鹽因此包括氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、α-羥基丁酸鹽，丁炔-1，4-二羧酸鹽，己炔-1，4-二羧酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽。丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二甲酸鹽(teraphthalate)、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、苯磺酸鹽、對-溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、萘-1，5-磺酸鹽，對-甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。
本發(fā)明包括式I化合物的立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體。本文使用(R)-和(S)-的Cahn-Prelog-Ingold命名法和相對立體化學(xué)的順式與反式命名法來表示特定異構(gòu)體與相對立體化學(xué)。
如同藥物活性化合物的任何組一樣，某些組化合物在它們的最終應(yīng)用中是優(yōu)選的。下列段落對優(yōu)選種類進(jìn)行了定義。
a)當(dāng)R4不為氫時，優(yōu)選1-和2-位為反式的化合物。
b)當(dāng)R4不為氫時，更優(yōu)選下面所示的1-和2-位為反式的化合物 c)Ra為甲基。
d)R5為氫。
e)R4為羥基。
f)t為1。
g)m為1。
h)Ra為甲基，R5為氫，R4為羥基，t為1，且m為1。
i)Q、X、Y、和Z各自為CR1，條件是Q、X、Y、和Z中至少兩個為CH。
j)R1為氫。
k)R1為鹵素。
l)R1為氟。
m)Q、X、Y和Z各自為CH。
n)Q、X、Y和Z中一個為CF，其余的為CH。
o)Q為CF，且X、Y和Z各自為CH。
q)R2為任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基和氰基的取代基取代的苯基。
r)R2為苯基。
s)R3為任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代的苯基。
t)R3為被一個選自鹵素、三氟甲基、氰基、或硝基的取代基取代的苯基。
u)R3為被鹵素單取代的苯基。
v)R3為被氟單取代的苯基。
w)R3為被氟在對位上單取代的苯基。
x)R2為苯基，R3為被氟在對位上單取代的苯基，且Q、X、Y和Z各自為CH。
y)R2為苯基，R3為被氟在對位上單取代的苯基，Q為CF，且X、Y和Z各自為CH。
z)Ra為甲基，R5為氫，R4為羥基，t為1，m為1，R2為苯基，且Q、X、Y和Z各自為CH。
aa)Ra為甲基，R5為氫，R4為羥基，t為1，m為1，R2為苯基，Q為CF，且X、Y和Z各自為CH。
bb)Ra為甲基，R5為氫，R4為羥基，t為1，m為1，且R3為被氟在對位上單取代的苯基。
上面各段可以加以組合用于定義其它優(yōu)選種類的化合物。
其中R4為羥基的式I化合物用流程A中描述的方法制備。在流程A中，除另有說明外，所有的取代基均同前定義，而且所有的試劑都是本領(lǐng)域公知和所認(rèn)同的。
流程A 式I，其中R4為羥基和m為1在流程A，步驟a中，拆分式(1)化合物得到基本純的式(2)化合物。式(1)化合物用本領(lǐng)域公知和認(rèn)同的方法很容易制備，例如下列文獻(xiàn)中描述的方法PCT公開號WO 97/25983(
公開日1997年7月24日)和WO 99/04778(
公開日1999年2月4日)。本文使用的術(shù)語“基本純”是指對映體純度。在流程A，步驟a中，通過拆分式(1)化合物，能夠很方便地在最終式I化合物中引入需要的立體化學(xué)性。經(jīng)過步驟b，c，d，以及下文描述的任選步驟e進(jìn)一步加工拆分的式(1)化合物，結(jié)果生成基本純的式I化合物。所制備的基本純式I化合物的純度可以大于80％，優(yōu)選大于90％，更優(yōu)選大于95％，最優(yōu)選大于97％的對映體純度。式(1)化合物可以用手性層析或通過分級結(jié)晶非對映體酸加成鹽進(jìn)行拆分。預(yù)計各種不同的這類鹽都適于此目的。實際上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)扁桃酸的異構(gòu)體是特別適用的。
例如，使式(1)化合物與所選擇的酸接觸。一般來講，可以使用大約0.4摩爾當(dāng)量至更多過量的所選酸，優(yōu)選使用大約0.4到1.5摩爾當(dāng)量，更優(yōu)選大約0.5到1.1摩爾當(dāng)量的酸。拆分典型的是通過從溶液中結(jié)晶出酸加成鹽來進(jìn)行的。諸如低級醇(包括甲醇在內(nèi))的溶劑特別適用。為了使拆分在適當(dāng)體積中進(jìn)行，對于選定的溶劑使用少量水可能是有利的。使用反溶劑(anti-solvent)可能也是有利的。本文使用的術(shù)語“反溶劑”是指與其它選定溶劑相比鹽在其中的溶解性明顯降低的溶劑。當(dāng)使用反溶劑時，優(yōu)選它與其它選定溶劑能夠混溶。適宜的反溶劑包括醚類，如乙醚、甲基叔丁基醚等，乙酸低級烷基酯，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸丙酯、乙酸異丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯等，以及烷烴類，例如戊烷、己烷、庚烷、環(huán)己烷等。當(dāng)使用外消旋混合物時，使用反溶劑時應(yīng)當(dāng)小心，以避免不需要的非對映體鹽發(fā)生結(jié)晶。
結(jié)晶一般在大約40℃至選定溶劑的回流溫度的起始溫度下進(jìn)行。然后冷卻混合物，得到鹽。加入晶種可能是有利的。優(yōu)選緩慢冷卻結(jié)晶溶液。結(jié)晶最適宜是冷卻到室溫-大約-20℃的溫度。鹽可以使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)收集，包括過濾、潷析、離心、蒸發(fā)、干燥等。式(2)化合物可以以所選酸的酸加成鹽形式直接使用?；蛘?，在使用前，式(2)化合物可以在酸交換后以其它酸加成鹽形式分離得到，或者可以在本領(lǐng)域公知和認(rèn)同的堿性條件下通過萃取分離成堿形式而得到。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，圖示式(2)化合物在2，3-二氫化茚核的1-和2-位為反式構(gòu)型。順式化合物的制備可以很容易地以這種反式化合物為原料通過保護(hù)胺、反轉(zhuǎn)羥基中心，如果需要隨后脫保護(hù)來進(jìn)行。羥基中心的反轉(zhuǎn)可以使用多種方法，例如通過與適當(dāng)羧酸(包括乙酸和苯甲酸)進(jìn)行Mitsunobu反應(yīng)，其后加以水解。
反應(yīng)流程A，步驟b描述了式(3)化合物的生成。應(yīng)當(dāng)理解，式(3)化合物可以是其中R為上述式I終產(chǎn)物中所需基團(tuán)的化合物。R還可以與羰基結(jié)合形成保護(hù)基，如t-BOC，后者可以在引入式I終產(chǎn)物需要的R基團(tuán)之前除去。合適保護(hù)基的選擇與使用是本領(lǐng)域公知和認(rèn)同的(Protecting Groups in Organic Synthesis，Theodora Greene(Wiley-Interscience))。
例如，當(dāng)R為終產(chǎn)物所需要的基團(tuán)時，步驟b所述的偶聯(lián)反應(yīng)使用適當(dāng)酸或由其衍生形成的酰鹵來進(jìn)行。適當(dāng)酸包括各種取代的苯甲酸與酰鹵，雜芳酸與酰鹵，以及各種聯(lián)芳基酸與酰鹵。其實例包括聯(lián)苯羧酸和3-氟聯(lián)苯-4-羧酸。
例如，使式(2)化合物與適當(dāng)?shù)乃峤佑|，生成式(3)化合物。這種偶聯(lián)反應(yīng)是肽合成中的普通反應(yīng)，可以應(yīng)用肽合成中使用的合成方法。例如，為促進(jìn)這種?；磻?yīng)，可以使用公知的偶聯(lián)劑，如樹脂結(jié)合試劑和碳二亞胺，同時使用或不使用公知的添加劑如N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑等。反應(yīng)能夠很方便地在惰性非質(zhì)子極性稀釋劑如二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃(THF)等中進(jìn)行。典型的是，反應(yīng)在大約0℃-大約60℃的溫度下進(jìn)行，通常需要大約1-大約24小時。反應(yīng)完成后用常規(guī)方法回收式(3)產(chǎn)物，包括萃取、沉淀、層析、過濾、研磨、結(jié)晶等。
或者，例如，使式(2)化合物與合適酸的酰鹵接觸，也能獲得式(3)化合物。這種酰鹵為市售品或者很容易以相應(yīng)的酸為原料按本領(lǐng)域公知的方法制得，例如在有或無少量二甲基甲酰胺存在下，在惰性溶劑如甲苯、二氯甲烷或氯仿中，使三氯化磷、三溴化磷、磷酰氯、五氯化磷、亞硫酰氯、亞硫酰溴、或草酰氯在大約0-80℃的溫度下反應(yīng)。反應(yīng)典型進(jìn)行1小時-24小時。酰鹵可以分離出來并加以純化，或者常常是直接使用，即進(jìn)行或不進(jìn)行分離和/或純化。偶聯(lián)反應(yīng)一般使用合適的堿以捕獲反應(yīng)過程中產(chǎn)生的酸。舉例來講，合適的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、吡啶、三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉等。反應(yīng)習(xí)慣在溶劑如二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃等中進(jìn)行，或者在Schotten-Baumann條件下在溶劑混合物如二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯與水中進(jìn)行。偶聯(lián)反應(yīng)通常在大約-20℃至約80℃的溫度下進(jìn)行，常需要大約1-大約24小時。一旦反應(yīng)完成，用常規(guī)方法包括萃取、沉淀、層析、過濾、研磨、結(jié)晶等方法回收式(3)產(chǎn)物。
反應(yīng)流程A，步驟c描述了還原硝基生成式(4)化合物的反應(yīng)。這種還原反應(yīng)可以用本領(lǐng)域公知的各種方法進(jìn)行。
例如，式(3)化合物可以通過催化劑如鈀-碳進(jìn)行氫化，生成式(4)化合物。這種氫化反應(yīng)通常是在溶劑中進(jìn)行，并且各種不同溶劑都適用，例如甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、或乙酸乙酯或它們的混合物。氫化可以在20-180psi(137-1241kPa)的初始?xì)錃鈮合逻M(jìn)行。反應(yīng)典型地在大約0℃-大約60℃的溫度下進(jìn)行。反應(yīng)通常需要1小時到3天。產(chǎn)物可以用本領(lǐng)域公知的技術(shù)進(jìn)行分離與純化，例如過濾、萃取、蒸發(fā)、研磨、沉淀、層析、和重結(jié)晶。
在流程A，步驟d中，式(4)化合物與合適的成脒劑接觸生成式I化合物。合適的脒形成劑包括三氟甲磺酸1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基亞銨(1-methylthio-1-methyl-N-(4-fluorobenzyl)-N-methylimmonium triflate)和1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基碘化亞銨(1-methylthio-1-methyl-N-(4-fluorobenzyl)-N-methylimmonium iodide)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道，合適的成脒劑可以預(yù)先制備，或者如果需要也可以就地制備。
例如，使式(4)化合物與大約1-3當(dāng)量的合適成脒劑接觸。反應(yīng)通常在無水溶劑如二氯甲烷、甲苯、或四氫呋喃中于大約-20℃到50℃的溫度下進(jìn)行。反應(yīng)采用適當(dāng)?shù)膲A如吡啶、三甲吡啶或三乙胺來進(jìn)行。反應(yīng)典型地需要1-18小時。產(chǎn)物可以用本領(lǐng)域公知的技術(shù)加以分離與純化，例如猝滅、過濾、萃取、蒸發(fā)、研磨、沉淀、層析和重結(jié)晶。
顯而易見的是，當(dāng)R為步驟b中引入的保護(hù)基時，該保護(hù)基可以在步驟d之后除去，并且所得胺與適當(dāng)酸或酰鹵如上步驟b所述進(jìn)行偶聯(lián)，生成式I化合物。
某些式I化合物是其它式I最終化合物的中間體。例如，當(dāng)R2為碘時，可以適用其它試劑例如2-(三丁基甲錫烷基)噻吩或2-(三丁基甲錫烷基)吡啶來置換碘作為離去基團(tuán)，并且根據(jù)終產(chǎn)物的需要取代不同的R2基團(tuán)。
在流程A的任選步驟e中(未示出)，使用可藥用酸形成式I化合物的酸加成鹽。酸加成鹽的形成方法是本領(lǐng)域公知和認(rèn)同的。
其中R4為氫的式I化合物由式(3)化合物或由式(2)的胺被護(hù)化合物通過脫氧反應(yīng)制備。這種脫氧反應(yīng)使用本領(lǐng)域公知的方法，例如Larock在Comprehensive Organic Transformations，pg.44-52(1999)中描述的方法能夠很容易地進(jìn)行。另一方面，其中R4為氫的式I化合物也可以用流程B中描述的方法制備。在流程B中，除另有說明外，所有的取代基均同前定義，并且所有試劑也都是本領(lǐng)域公知和認(rèn)同的。
流程B 式I，其中R4為氫和m為1反應(yīng)流程B，步驟a描述了式(5)化合物的還原性胺化生成式(6)化合物的反應(yīng)。這種還原性胺化可以在各種條件下進(jìn)行。流程B，步驟a所述反應(yīng)可以采用氨或被護(hù)胺如芐胺、二芐胺等進(jìn)行，進(jìn)而脫保護(hù)生成式(6)化合物。
例如，式(5)化合物與過量的氨和氰基硼氫化鈉反應(yīng)生成式(6)化合物。本領(lǐng)域公知的是，在此類反應(yīng)過程中監(jiān)測和調(diào)節(jié)pH可能是有利的。反應(yīng)在溶劑如甲醇、乙醇、異丙醇和水或它們的混合物中進(jìn)行。反應(yīng)典型地在大約0℃-大約60℃的溫度下進(jìn)行，通常需要大約1-大約24小時。一旦反應(yīng)完成，可以用常規(guī)方法回收式(6)產(chǎn)物，包括萃取、沉淀、層析、過濾、研磨、結(jié)晶等方法。
反應(yīng)流程B，步驟b、c、d以及任選的步驟e分別按照流程A的步驟b、c、d和任選的步驟e描述的方法進(jìn)行，生成式I化合物。
其中R4為氟的式I化合物是以式(3)化合物或胺保護(hù)的式(2)化合物為原料按照本領(lǐng)域公知的鹵化方法制備，例如采用Larock在Comprehensive Organic Transformations，pg.689-701(1999)中描述的方法。
本發(fā)明用下列實施例和制備例進(jìn)一步說明。這些實施例與制備例旨在舉例說明，不得認(rèn)作是以任何方式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
實施例與制備例中使用的各術(shù)語具有它們的正常含義，但另有說明除外。例如，“℃”表示攝氏度；“M”表示摩爾或摩爾濃度；“mmol”表示毫摩爾；“g”表示克；“mL”表示毫升；“mp”表示熔點；“鹽水(brine)”表示飽和氯化鈉水溶液；等等。在1H NMR中，所有化學(xué)位移都以δ給出，但另有說明除外。
偶聯(lián)方法方法A2’-氯聯(lián)苯-4-羧酸攪拌下在DMF(20mL)和水(2.0mL)中混合4-溴苯甲酸甲酯(1.0g，4.65mmol)、2-氯苯硼酸(799mg，5.1mmol)、Pd(OAc)2(51mg，0.46mmol)與碳酸鈉(1.5g，13.9mmol)。用氬氣吹掃反應(yīng)混合物，加入三苯膦(61mg，0.23mmol)，再次用氬氣吹掃。將密封反應(yīng)物置于油浴中(保持在80℃)，攪拌1小時。冷卻反應(yīng)物到室溫，用乙酸乙酯稀釋，通過硅藻土(celite)短塞過濾(使用另外的乙酸乙酯)。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得2’-氯聯(lián)苯-4-羧酸甲酯，為黃色固體。將純化的酯溶解在THF中(0.25M)，加入等體積的1M NaOH。在室溫下劇烈攪拌15小時。當(dāng)反應(yīng)完成后用濃鹽酸酸化反應(yīng)物，繼用乙酸乙酯萃取。蒸發(fā)溶劑，得762mg(67％)標(biāo)題化合物。
MS(m/e)231.1(M-)。
下列化合物基本上按上文所述方法制備。
方法B5-苯基吡嗪-2-羧酸攪拌下在DMF(5mL)和水(5mL)中混合5-氯吡嗪-2-羧酸甲酯(626mg，3.64mmol)、苯硼酸(666mg，5.45mmol)、氟化銫(55mg，0.36mmol)和Na2CO3(964mg，9.09mmol)。將與大氣相通的多相反應(yīng)混合物置于保持在80℃的油浴中。加熱5分鐘后，一次性加入81mg(0.36mmol)Pd(OAc)2，一直攪拌到反應(yīng)物變?yōu)楹谏?。冷卻反應(yīng)物到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并借助額外的乙酸乙酯通過硅藻土短塞過濾。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得2-苯基嘧啶-5-羧酸甲酯，為黃色固體。將純化的酯溶解在THF中(0.25M)，加入等體積的1M NaOH。在室溫下劇烈攪拌15小時。反應(yīng)完成后用濃鹽酸酸化反應(yīng)物，繼用乙酸乙酯萃取。蒸發(fā)溶劑，得63mg(8％)標(biāo)題化合物。1H NMR(DMSO)9.37(s，1H)，9.21(s，1H)，8.23-8.21(m，2H)，7.57-7.77(m，3H)。
下列化合物基本上按上文所述方法制備
方法C3’，4’-二氟聯(lián)苯-4-羧酸混合3，4-二氟苯硼酸(1.0g，5.2mmol)、4-溴苯甲酸甲酯(0.241g，1.73mmol)、Pd(OAc)2(0.019g，0.086mmol)、四丁基溴化銨(0.111g，0.345mmol)和磷酸鉀(0.733g，3.454mmol)。用氬氣吹掃反應(yīng)容器，向反應(yīng)混合物中加入無水DMF(20ml)。攪拌下加熱密封反應(yīng)容器到120℃，一直加熱到反應(yīng)結(jié)束。冷卻反應(yīng)物到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并進(jìn)一步借助乙酸乙酯通過硅藻土短塞過濾。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得3’，4’-二氟聯(lián)苯-4-羧酸甲酯，為黃色固體。將純化的酯溶解于二噁烷(45ml)，加入等體積的1M NaOH水溶液。攪拌下加熱反應(yīng)容器到60℃，一直加熱到反應(yīng)完成。蒸發(fā)除去溶劑。將殘留物溶于二氯甲烷，用1N鹽酸水溶液洗滌。硫酸鎂干燥有機(jī)物，過濾，蒸發(fā)得0.048g(12％)標(biāo)題化合物。MS(m/e)235(M+)。
下列化合物基本上按上文所述方法制備。
方法D2’，4’，6’-三甲基聯(lián)苯-4-羧酸混合1-碘代-2，4，6-三甲基苯(2.966g，12.05mmol)、4-羧基苯硼酸(1.0g，6.026mmol)、Pd(OAc)2(0.0067g，0.005mmol)、四丁基溴化銨(0.388g，1.2055mmol)和磷酸鉀(2.557g，12.05mmol)。用氬氣吹掃反應(yīng)器，向反應(yīng)混合物中加入無水DMF(20ml)。攪拌下加熱密封反應(yīng)容器到120℃，一直加熱到反應(yīng)完成(根據(jù)TLC測定)。冷卻反應(yīng)物到室溫。向反應(yīng)混合物中加入碘甲烷(1.0ml，36.63mmol)，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完成。反應(yīng)物用乙酸乙酯稀釋，并進(jìn)一步借助乙酸乙酯通過硅藻土短塞過濾。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得2’，4’，6’-三甲基聯(lián)苯-4-羧酸甲酯，為黃色固體。攪拌下，于60℃將純化的酯溶解在二噁烷(45ml)和含有5eq LiOH的水(5ml)中。反應(yīng)完成后蒸發(fā)溶劑，用鹽酸酸化反應(yīng)混合物，繼用乙酸乙酯萃取。用硫酸鎂干燥有機(jī)物，過濾，蒸發(fā)得到0.023g(16％)標(biāo)題化合物。MS(m/e)239.1(M-)。
下列化合物基本上按上文所述方法制備。
方法E2’，4’-二氟聯(lián)苯-4-羧酸混合4-甲氧基羰基苯硼酸(1.021g，5.67mmol)、1-溴-2，4-二氟苯(1.000g，5.181mmol)、Pd(OAc)2(0.113g，0.50mmol)、三苯膦(0.149g，0.505mmol)和碳酸鈉(1.664g，0.568mmol)。用氬氣吹掃反應(yīng)容器。攪拌下加入DMF(20mL)和水(2.0mL)。將密封反應(yīng)物置于80℃的油浴中，攪拌24小時。冷卻反應(yīng)物到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并進(jìn)一步借助乙酸乙酯通過硅藻土短塞過濾。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得2’，4’-二氟聯(lián)苯-4-羧酸甲酯，為黃色固體。將純化的酯溶解于二噁烷(5ml)，加入5M NaOH(1ml)。50℃劇烈攪拌15小時。反應(yīng)完成后用濃鹽酸酸化反應(yīng)物，繼用乙酸乙酯萃取。蒸發(fā)溶劑得300mg(24.7％)標(biāo)題化合物。MS(m/e)233.0(M-)。
方法F6-(2，6-二氟苯基)吡啶-3-羧酸將6-氯吡啶-3-羧酸甲酯(6.86g，40mmol)溶解在甲苯(100mL)中，加熱到90℃。分?jǐn)?shù)次加入三溴氧化磷(25g，87mmol)，繼續(xù)加熱3小時。冷卻反應(yīng)物到室溫，倒入冰水中。用乙酸乙酯萃取反應(yīng)物，有機(jī)物再用水、NaHCO3順序洗滌。合并有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)得橙色固體(8.1g，94％)，為8∶1的6-溴吡啶-3-羧酸甲酯6-氯吡啶-3-羧酸甲酯混合物(根據(jù)1H NMR)。
在甲苯(5mL)中混合上面得到的混合物(0.225g，1.04mmol)與六甲基二錫(0.375g，1.15mmol)、Pd(OAc)2(21mg，0.09mmol)和三苯膦(25mg，0.09mmol)。用氬氣吹掃，在80℃下攪拌18小時。冷卻反應(yīng)物到室溫。加入1-溴-2，6-二氟苯(250mg，1.29mmol)的甲苯(1mL)溶液，接著再加入Pd(OAc)2(21mg，0.09mmol)和三苯膦(25mg，0.09mmol)。用氮氣吹掃，于80℃再攪拌18小時。冷卻反應(yīng)到室溫。蒸發(fā)溶劑，經(jīng)柱層析純化(硅膠，10％乙酸乙酯/己烷)，得50mg(20％收率)6-(2，6-二氟苯基)吡啶-3-羧酸乙酯。室溫下，將該酯用1N氫氧化鈉溶液(0.22mL，0.22mmol)在甲醇(3mL)中水解3天。真空除去揮發(fā)物，混合殘留物與1N鹽酸溶液。過濾收集白色固體，水洗、真空干燥，得30mg(63％收率)標(biāo)題化合物。MS(m/e)235.9(MH+)。
方法G3-氟聯(lián)苯-4-羧酸攪拌下，在DMF(25mL)和水(3.0mL)中混合2-氟-4-溴苯甲酸甲酯(1.25g，5.36mmol)、苯硼酸(1.30g，10.72mmol)和CsF(2.02g，13.40mmol)。將與大氣相通的多相反應(yīng)混合物置于保持在80℃的油浴中。加熱5分鐘后，一次性加入Pd(OAc)2(120mg，0.536mmol)，一直攪拌到反應(yīng)物變?yōu)楹谏＠鋮s反應(yīng)物到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并進(jìn)一步借助乙酸乙酯通過硅藻土短塞過濾。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得3-氟聯(lián)苯-4-羧酸甲酯固體。將此純化的酯溶解于THF(0.25M)，加入等體積的1M NaOH。在室溫下劇烈攪拌15小時。反應(yīng)完成后用濃鹽酸酸化反應(yīng)物，繼用乙酸乙酯萃取。蒸發(fā)溶劑，得965mg(84％)標(biāo)題化合物。MS(m/e)214.9(M-)。
下列化合物基本上按上文所述方法制備。
方法H2-氟-6-苯基吡啶-3-羧酸將2，6-二氟吡啶(5.0mL，5.51mmol)溶解在無水THF(30mL)中，冷卻到-40℃。用5分鐘逐滴加入苯基鋰溶液(1.8M己烷溶液，30.6mL)。-40℃攪拌所得紫色反應(yīng)物30分鐘，升溫至室溫。加水終止反應(yīng)，溶液用乙酸乙酯萃取數(shù)次。合并有機(jī)萃取物，硫酸鎂干燥，過濾，在硅膠上蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化，得黃色油狀物2-氟-6-苯基吡啶1.0g(12％)。
將LDA(3.46mmol)在無水THF(6mL)中的溶液冷卻到-78℃。通過套管向冷卻的LDA溶液中加入2-氟-6-苯基吡啶的無水THF(6mL)溶液。-78℃攪拌30分鐘，然后向溶液中通二氧化碳?xì)怏w10分鐘。任反應(yīng)物升溫到室溫，用氬氣吹掃。反應(yīng)物用1M NaOH萃取，棄去有機(jī)物。水層用濃鹽酸酸化，繼用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)得到亮黃色固體標(biāo)題化合物(405mg，65％)。MS(m/e)216.1(M-)。
方法J3，5-二氟聯(lián)苯-4-羧酸混合1-溴-3，5-二氟苯(0.863mL，7.50mmol)和苯硼酸(1.22g，10.00mmol)，在方法G所述的條件下進(jìn)行反應(yīng)，得1.3g 3，5-二氟聯(lián)苯。
將粗品3，5-二氟聯(lián)苯(1.3g，6.83mmol)溶于THF(14mL)，冷卻到-78℃。通過在-78℃下向四甲基哌啶(1.4mL，1.25當(dāng)量)/THF(14mL)中加入BuLi(1.6M己烷溶液，5.33mL)制備LiTMP。冷卻的LiTMP經(jīng)套管加入到冷卻的3，5-二氟聯(lián)苯中，于-78℃攪拌反應(yīng)物1小時。向溶液中通二氧化碳5分鐘，溫?zé)岱磻?yīng)物到室溫，傾入到50mL 1M NaOH中，用50mL EtOAc萃取。棄去有機(jī)層，剩余的水層用濃鹽酸酸化，繼用乙酸乙酯萃取兩次。硫酸鎂干燥有機(jī)物，過濾，蒸發(fā)得到1.22g白色固體標(biāo)題化合物(77％)。MS(m/e)233.1(M-)。
方法K3，2’，6’-三氟聯(lián)苯-4-羧酸在DMSO(40mL)中混合4-溴-2-氟苯甲酸甲酯(3.66g，15.75mmol)、4，4，5，5，4’，4’，5’，5’-八甲基-2，2’-聯(lián)-1，3，2-二氧雜硼雜戊烷(dioxaborolanyl)(5.0g，19.68mmol)與乙酸鉀(4.63g，47.19mmol)，用氬氣吹掃所得溶液。加入PdCl2(1，1’-雙(二苯膦基)二茂鐵)2(10mol％，1.35g)，溶液再次用氬氣吹掃。加熱反應(yīng)物到80℃反應(yīng)3小時，然后冷卻到室溫。水洗反應(yīng)物，繼用乙酸乙酯萃取，然后濃縮。將所得黑色油狀物再溶于1∶2的乙酸乙酯∶己烷中，通過硅膠短塞過濾，濃縮。得到黃色油狀物2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼雜戊烷-2-基)苯甲酸甲酯。
將所得黃色油狀物溶于丙酮(100mL)，在室溫下與NaIO4(10.1g，47.25mmol)、NH4OAc(3.63g，47.25mmol)和水(50mL)混合。室溫攪拌18小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗內(nèi)，用乙酸乙酯萃取數(shù)次。硫酸鎂干燥合并的有機(jī)物，過濾，濃縮，得3.0g灰白色固體3-氟-4-甲氧基羰基苯硼酸。
按照方法G描述的方法，偶聯(lián)上面得到的硼酸(800mg，4.04mmol)與2，6-二氟溴苯(1.17g，6.06mmol)，得到380mg標(biāo)題化合物。MS(m/e)251.1(M-)。
方法L6-苯基噠嗪-3-羧酸將6-苯基噠嗪-3-醇(5.0g，29.06mmol)溶于甲苯(100mL)，加熱到90℃。分?jǐn)?shù)次加入三溴氧化磷(25g，87.19mmol)，加熱反應(yīng)30分鐘。冷卻形成的黃色溶液到室溫，倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層進(jìn)一步用水和1M NaOH洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)得到黃色固體。氯仿重結(jié)晶，得2.17g 3-溴-6-苯基噠嗪。
混合3-溴-6-苯基噠嗪(1.0g，4.25mmol)與DMF(5mL)、MeOH(5mL)、三乙胺(1.18mL，8.50mmol)和Pd(OAc)2(76mg，0.33mmol)，并且抽空混合物。加入1，1’-雙(二苯膦基)二茂鐵(235mg，0.42mmol)，再次抽空反應(yīng)物。向溶液中通二氧化碳?xì)怏w5分鐘，然后將反應(yīng)物置于50psi(345kPa)二氧化碳?xì)鈮合隆?0℃加熱所得溶液18小時。冷卻反應(yīng)物到室溫，加水稀釋，繼用乙酸乙酯萃取。硫酸鎂干燥有機(jī)物，過濾，蒸發(fā)到硅膠上，其后進(jìn)行快速柱層析。
使用方法A中列出的條件進(jìn)行水解，得80mg標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)8.24(d，1H，J＝8.8Hz)，8.18-8.15(m，2H)，8.0(d，1H，J＝9.2Hz)，7.56-7.55(m，3H)。
方法M6-(4-氟苯基)吡啶-3-羧酸攪拌下，在DMF(25mL)和水(4mL)中混合6-溴吡啶-3-羧酸甲酯(1.03g，4.78mmol)4-氟苯硼酸(1.88g，13.41mmol)和氟化銫(2.55g，16.78mmol)。將與大氣相通的多相反應(yīng)混合物置于保持在80℃的油浴中。加熱5分鐘后，一次性加入Pd(OAc)2(150mg，0.67mmol)，17小時后，冷卻反應(yīng)物到室溫，用乙酸乙酯稀釋，并進(jìn)一步借助乙酸乙酯通過硅藻土短塞過濾。水洗有機(jī)物，硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。經(jīng)快速柱層析純化得黃色固體6-(4-氟苯基)吡啶-3-羧酸甲酯。將此純化的酯溶解于THF(0.25M)，加入等體積的1M NaOH。在室溫下劇烈攪拌15小時。反應(yīng)完成后用濃鹽酸酸化反應(yīng)物，過濾收集白色沉淀物。真空干燥得385mg(37％)標(biāo)題化合物。MS(m/e)218.1(MH+)。
下述化合物基本上按上文所述方法制備。
方法N6-(4-氟-2-甲基苯基)吡啶-3-羧酸攪拌下，在DMF(6mL)和水(6mL)中混合6-溴吡啶-3-羧酸甲酯(387mg，1.79mmol)，4-氟-2-甲基苯硼酸(338mg，2.19mmol)、Pd(OAc)2(40mg，0.18mmol)、氟化銫(27mg，0.18mmol)和碳酸鈉(570mg，5.38mmol)。反應(yīng)混合物用氮氣吹掃，加入三苯膦(47mg，0.18mmol)，繼而再用氮氣吹掃。將密封反應(yīng)物置于保持在80℃的油浴中，攪拌17小時。冷卻反應(yīng)物到室溫，通過硅膠短塞柱過濾。短塞柱用二氯甲烷(100mL)、甲醇水溶液(100mL，3甲醇/1水)洗滌。真空縮減合并的部分，將殘留固體懸浮于水(10mL)中。濾除黑色固體，用1N鹽酸溶液酸化至pH4。過濾收集白色沉淀物，干燥得306mg(74％)標(biāo)題化合物。MS(m/e)231.9(MH+)。
下列化合物基本上按上文所述方法制備。
實施例1-1聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺
將375g(5.13mol，1.12當(dāng)量)N-甲基乙酰胺的THF(1.76L)溶液緩慢加到224g(5.55mol，1.2當(dāng)量)氫化鈉(60％礦物油分散體)在THF(8.75mL)中形成的漿液內(nèi)。30分鐘后，當(dāng)加入25％的溶液時，加入875g(4.63摩爾，1當(dāng)量)4-氟芐基溴，然后用3小時將剩余的N-甲基乙酰胺和4-氟芐基溴溶液并行加入。使用水浴保持溫度低于40℃。攪拌所得混合物過夜，倒入由20％NH4Cl(2.5L)、水(6.5L)和乙酸乙酯(9L)組成的混合物中。分離各層，水層用乙酸乙酯(4.5L，然后2L)反萃取。合并有機(jī)層，依次用水(4L)、鹽水(7L)洗滌。干燥有機(jī)層(硫酸鈉)，除去溶劑得一殘留物。將殘留物溶于乙腈(7L)與庚烷(1.75L)中。分離各層，乙腈層再用庚烷(1.75L)洗滌。合并庚烷層，用乙腈(0.5L)反萃取。合并乙腈層，蒸發(fā)得到0.814g N-甲基-N-(4-氟芐基)乙酰胺。
將N-甲基-N-(4-氟芐基)乙酰胺(0.500kg，2.76mol)溶于THF(11.5L)。加入五硫化二磷(0.737kg，1.65mol，0.6當(dāng)量)，用1-2小時加熱混合物到回流狀態(tài)?；亓?小時后，任混合物冷卻到室溫，濾出固體，用12.5L THF洗滌。合并濾液和另一獨立反應(yīng)得到相同濾液，濃縮得到0.978kg殘留物。溶解殘留物，在2.7kg硅膠上利用CH2Cl2進(jìn)行層析，得1.01kg固體。用二氯甲烷(1L)淤漿化固體15-30分鐘，加入庚烷(5L)，冷卻該混合物到0-5℃，攪拌2小時。過濾收集固體，干燥，得0.814kg N-甲基-N-(4-氟芐基)硫代乙酰胺。
向2.30kg(11.6mol)N-甲基-N-(4-氟芐基)乙酰胺中加入11.5L乙腈和2.52kg(17.7mol，1.5當(dāng)量)碘甲烷。加熱混合物到35℃反應(yīng)21小時。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上將體積縮減一半，加入14L MTBF。再次減少體積一半，另加入14L MTBE。冷卻形成的漿液到0℃，過濾收集固體，干燥得到3.92kg 1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基碘化亞銨，系白色固體。
向6.20kg(35.0mol)1，2-環(huán)氧-6-硝基-2，3-二氫化茚中加入85L濃NH4OH和28L水。36℃加熱混合物21小時，使之冷卻到室溫。通過濕硅藻土床(10kg)過濾反應(yīng)混合物，濾餅用水沖洗。向濕濾餅中加入155L甲醇、1.3L水和5.80kg(38.1mol，1.09當(dāng)量)(S)-(+)-扁桃酸。55℃加熱混合物2小時，通過碳浸漬濾筒過濾。真空蒸餾縮減濾液體積至大約35L，加入130L EtOAc。真空蒸餾縮減體積到大約65L。冷卻混合物到-8℃，攪拌8小時。過濾漿液，干燥固體得到7.6kg固體。在30L甲醇和0.3L水中淤漿該固體，在回流狀態(tài)下加熱混合物0.5小時。在0.5小時內(nèi)冷卻混合物到45℃，攪拌12小時。接著冷卻到22℃，攪拌10小時。過濾收集固體，干燥，得2.7kg 1(R)-氨基-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚(S)-扁桃酸鹽。
向甲苯(9.6L)與1N氫氧化鈉水溶液(4.8L，4.8mol，2.6當(dāng)量)的混合物中加入1(R)-氨基-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚(S)-扁桃酸鹽(0.64kg，1.85mol)。1小時后，用20-30分鐘分批加入4-聯(lián)苯碳酰氯(0.44kg，2.0mol，1.1當(dāng)量)。22小時后，真空過濾固體，順序用0.5L甲苯、2L水、和2L甲苯?jīng)_洗。干燥濾餅得0.74kg聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-硝基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。向按類似方法制備的1.914kg聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-硝基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺中加入38.2L乙酸乙酯。攪拌漿液18小時，過濾收集固體，干燥，得1.76kg白色固體聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-硝基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。
用氫氣(50psi，345kPa)，在17.5L DMF中混合0.176kg 10％Pd-C(50％含水量)和1.7kg聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-硝基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。19小時后，過濾反應(yīng)混合物，向水(10L)中加入部分DMF溶液(5L)，攪拌漿液2小時-重復(fù)兩次以處理全部反應(yīng)體積量。一同過濾漿液，水(3×7L)洗所得濾餅。干燥濾餅，得1.42kg聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-氨基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。
在THF(9.7L)中淤漿化聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-氨基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺，加入1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基碘化亞銨(0.954kg，2.81mol)和4-二甲氨基吡啶(34.5g，0.281)。攪拌混合物24小時，真空除去溶劑。將所得泡沫狀物溶于二氯甲烷(12.5L)，有機(jī)相用1.0N HCl(1×4L和1×3L)，1.0M NaOH(1×2.4L)和飽和NaCl(1×4L)洗滌。分離有機(jī)相，硫酸鈉干燥，過濾，除去溶劑，得一固體。將此固體溶于乙腈(9L)，同時加熱到35-40℃。大約30分鐘后，加入晶種，產(chǎn)生粘稠白色漿液。冷卻混合物到-15℃，在此溫度下攪拌1-2小時。過濾漿液，干燥，得1.10kg標(biāo)題化合物，為部分乙腈溶劑化物。
1H NMR(CDCl3)δ7.90(d，2，J＝8.6)，7.69(d，2，J＝8.6)，7.63(d，2，J＝8.2)，7.48(t，2，J＝8.2，7.6)，7.41(d，1，J＝7.3)，7.24(dd，2，J＝8.5，5.2)，7.14(d，1，J＝7.9)，7.04(t，2，J＝8.7)，6.72-6.63(m，3)，5.31(t，1，J＝5.6)，4.84(br s，1)，4.64(dd，2，J＝21.4，15.6)，4.54(dd，1，J＝14.0，7.9)，3.32(dd，1，J＝15.6，7.9)，3.01(s，3)，2.95(dd，1，J＝15.7，8.0)，1.97(s，3).MS(m/z)508.2(M+1).
實施例2-1聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 在173mL甲醇和3.6mL水中混合反式-1-氨基-2-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚(20.2g，0.10mol)和S-扁桃酸(16.7g，0.11mol，1.1當(dāng)量)。加熱回流，然后加入200mL乙酸乙酯。引入晶種，冷卻到23℃。23℃攪拌4小時后，在-3℃冷卻3小時，然后過濾并用冷40％甲醇和60％乙酸乙酯沖洗，得到固體物。在烘箱中45℃干燥固體16小時，得到59∶41的非對映體鹽混合物，1(R)-氨基-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚占優(yōu)。
混合59∶41的非對映體鹽混合物與35mL甲醇和0.32g水。加熱到大約64℃，任其冷卻到大約45℃，攪拌14小時，然后于23℃攪拌14小時，得到一固體物。過濾收集固體，用甲醇沖洗，在真空烘箱中45℃干燥26小時，得到2.64g高對映體純度的1(R)-氨基-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚S-扁桃酸鹽，HRMS(m/z)194.0691.IR(CHCl3)1347，1074cm-1.
混合1(R)-氨基-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚S-扁桃酸鹽40.2g(116.1mmol)、320mL水、650mL乙酸乙酯、26.6g二碳酸二叔丁酯(121.9mmol，1.05當(dāng)量)，以及另外的200mL乙酸乙酯。逐滴加入120mL 1N氫氧化鈉水溶液(120mmol，1.03當(dāng)量)。15小時后，有固體生成。收集固體，用水(3遍)和乙酸乙酯(3遍)沖洗。干燥，得白色固體1(R)-(叔丁氧基羰基氨基)-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚19.4g(57％)。MS(m/z)295(M+1)。[α]D＝-111(c＝1，MeOH)。
混合1(R)-(叔丁氧基羰基氨基)-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚30.5g(0.11mol)、800mL THF、800乙酸乙酯和6.3g 5％的鈀-碳。在50psi(345kPa)氫氣壓下氫化2小時。過濾除去催化劑，蒸發(fā)溶劑，得到29.5g 1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-氨基-2，3-二氫化茚MS(m/z)265(M+1)。IR(KBr)1699，1625，1535cm-1.[α]D＝-122(c＝1，MeOH)。
向NaH(6.86g，0.172摩爾，60％/礦物油，1.3當(dāng)量)的THF(250mL)溶液中逐滴加入N-甲基乙酰胺(11.6g，0.159摩爾，1.2當(dāng)量)的THF(90mL)溶液。大約20分鐘后，加入4-氟芐基溴(25g，0.132摩爾)。攪拌大約62小時，然后傾入冰水(300mL)中，用乙酸乙酯(400mL和200mL)萃取。合并有機(jī)層，用水(300mL)洗滌，硫酸鈉干燥，過濾，濃縮得一油狀物。將此油狀物溶于乙腈，用己烷萃取以除去礦物油，得到22.79g N-甲基-N-(4-氟芐基)乙酰胺mp＝48-54℃；Rf＝0.45(4％MeOH/二氯甲烷)；1H NMR(CDCl3)7.27-6.93(m，4)，4.5(d，2)，2.91(s，3)，2.14(s，3)。
混合N-甲基-N-(4-氟芐基)乙酰胺(364.8g，2.01mol)和THF(9L)。攪拌形成溶液，然后加入五硫化二磷(537.7g，1.21mol)。45分鐘后，加熱到回流狀態(tài)。3小時后，冷卻，并攪拌過夜，有固體生成。濾除固體，濾餅用THF(4L)沖洗。蒸發(fā)濾液，得一殘留物，進(jìn)而溶于二氯甲烷(500mL)，通過用庚烷預(yù)穩(wěn)定的硅膠60(1.2kg)短柱。以4L庚烷/二氯甲烷(1∶1)、100％二氯甲烷順序洗脫，收集并且干燥，得到217.98g N-甲基-N-(4-氟芐基)硫代乙酰胺mp＝99＝104℃；Rf＝0.42(二氯甲烷)；1HNMR(CDCl3)7.35-7.26(m，1)，7.14-6.96(m，3)，5.28(s，1.2)和4.79(s，0.8)，3.42(s，1.2)和3.15(s，1.8)，2.72(s，1.2)和2.69(s，1.8)。注部分質(zhì)子被認(rèn)為歸屬于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(rotomer)。
在氮氣氛圍中混合N-甲基-N-(4-氟芐基)硫代乙酰胺(14.03g，0.0711摩爾)與二氯甲烷(140mL)，在冰水浴中冷卻。滴加三氟甲磺酸甲酯(9.66mL，0.085摩爾，1.2當(dāng)量)。15分鐘后，移去冰浴，攪拌2小時。真空除去溶劑，，得25.89g(100％)三氟甲磺酸(triflate)1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基亞銨。
在氮氣氛圍中混合三氟甲磺酸1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基亞銨(5g，13.8mmol)、二氯甲烷(50mL)和1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-氨基-2，3-二氫化茚(3.65g，13.8mmol)。加入吡啶(0.15mL)。2.5小時后有固體生成。過濾收集固體，用少量二氯甲烷沖洗，在真空烘箱中干燥，得6.29g(79％)白色固體1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-(1-甲基-N’-(4-氟芐基)-N’-甲基脒基)-2，3-二氫化茚三氟甲磺酸鹽。Mp＝123-132℃。
在冰浴中冷卻三氟乙酸(TFA，66mL)，分批加入1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-(1-甲基-N’-(4-氟芐基)-N’-甲基脒基)-2，3-二氫化茚三氟甲磺酸鹽(29.65g，0.051摩爾)，同時加入3mL二氯甲烷。在冰浴中攪拌10分鐘，然后溫?zé)岬绞覝?，攪?.5小時。將反應(yīng)混合物在二氯甲烷(500mL)與冰水(500mL)之間分配。加入2M氫氧化鈉水溶液(450mL)，分離各層。水層用二氯甲烷(250mL)萃取，合并的有機(jī)層用水(300mL)洗滌。冷卻有機(jī)層，加入1N氫氧化鈉水溶液(76mL)和水(76mL)，攪拌得到。
向按上述方法生成的N’-(3-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-5-基)-N-(4-氟芐基)-N-甲基乙脒中分批加入4-聯(lián)苯碳酰氯(11.05g，0.051摩爾，1當(dāng)量)。再加入50mL水。2小時后，分離各層，有機(jī)層用水(300mL)萃取，硫酸鈉干燥，過濾，蒸發(fā)，得到27.06g白色泡沫狀標(biāo)題化合物。
取10g上述標(biāo)題化合物用10mL/g乙腈結(jié)晶，得到5.96g標(biāo)題化合物mp103-111℃。MS(m/z)508(M+1)。
將上面重結(jié)晶獲得的標(biāo)題化合物在45mL乙酸乙酯與45mL己烷組成的混合物中淤漿16小時，得標(biāo)題化合物，mp139-142℃。
混合具有mp＝139-142℃的標(biāo)題化合物(1g)與無水乙醇(12mL)。加熱到大約50℃直至固體溶解。滴加去離子水(4.5mL)，接著加入在大約150-152℃下熔化的多晶型物晶種。用1.5小時冷卻到大約23℃，形成粘稠懸浮液。在冰浴中冷卻懸浮液，過濾，在真空烘箱中于50-60℃干燥，得0.76g標(biāo)題化合物mp150-152℃。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，標(biāo)題化合物又稱為6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2-羥基-1-聯(lián)苯酰氨基-2，3-二氫化茚。
實施例2-2聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-酰胺 混合1(R)-氨基-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚S-扁桃酸鹽50.0g(0.144摩爾)與750mL甲苯。加入375mL(0.375摩爾，2.6當(dāng)量)1N氫氧化鈉水溶液，接著加入470mL水。攪拌約22分鐘，然后用大約6分鐘分批加入35.5g(0.159摩爾，1.1當(dāng)量)4-聯(lián)苯碳酰氯。3.5小時后過濾形成的漿液，濾餅用甲苯?jīng)_洗，于50℃真空干燥18小時，得56.1g 1(R)-(4-聯(lián)苯羰基氨基)-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚IR(KBr，cm-1)3293，1640，1549，1528，1345，1329，1086，739；C22H18N2O4的HRMS計算值374，1267，實測值374.1266。
混合1(R)-(4-聯(lián)苯羰基氨基)-2(R)-羥基-6-硝基-2，3-二氫化茚55.7g、550mL DMF和2.8g 10％Pd/C催化劑。在50psi(345kPa)氫氣壓下環(huán)境溫度氫化4.75小時。過濾反應(yīng)混合物，濾液用1200mL水稀釋，形成漿液。攪拌該漿液30分鐘，過濾，水洗，于50℃真空干燥?；旌细稍锂a(chǎn)物與大約1L的水，攪拌該漿液30分鐘，過濾，水洗，50℃真空干燥，得45.4g(90％)1(R)-(4-聯(lián)苯羰基氨基)-2(R)-羥基-6-氨基-2，3-二氫化茚IR(KBr，cm-1)3584，3364，3277，1632，1543，1326，1073，743；C22H20N2O2的HRMS計算值344.4120；實測值344.1525。
混合N-甲基-N-(4-氟芐基)乙酰胺(364.8g，2.01mol)與THF(9L)。攪拌溶解，然后加入五硫化二磷(537.7g，1.21mol)。45分鐘后，加熱回流3小時，然后冷卻并攪拌過夜，得一固體。過濾收集固體物，濾餅用THF(4L)沖洗，真空蒸發(fā)濾液，得一殘留物，進(jìn)而將該殘留物溶于二氯甲烷(約500mL)，通過庚烷預(yù)平衡過的硅膠60餅(1.2kg)。用4L庚烷/二氯甲烷(1∶1)、100％二氯甲烷順序洗滌，得217.98g N-甲基-N-(4-氟芐基)硫代乙酰胺(55％)mp＝99-104℃；Rf＝0.42(二氯甲烷)；1H NMR(CDCl3)7.35-7.26(m，1)，7.14-6.96(m，3)，5.28(s，1.2)和4.79(s，0.8)，3.42(s，1.2)和3.15(s，1.8)，2.72(s，1.2)和2.69(s，1.8)。附注部分質(zhì)子被認(rèn)為應(yīng)歸屬于旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體(rotomers)。
向N-甲基-N-(4-氟芐基)硫代乙酰胺(10g，50.6mmol)的乙腈(50mL)懸浮液中一次性加入10.76g(75.8mmol)碘甲烷。35℃加熱46小時，然后冷卻到大約23℃。蒸發(fā)縮減反應(yīng)體積到大約25mL，然后加入甲基叔丁基醚(50mL)。通過蒸發(fā)再次將體積減少到25mL，然后再用50mL甲基叔丁基醚稀釋，產(chǎn)生固體。冷卻到0℃，過濾，用15mL冷甲基叔丁基醚沖洗，干燥，得16.89g黃色固體1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基碘化亞銨，mp142-150℃。MS(電噴霧)亞銨部分C11H15FNS的理論值212；實測值212.
混合1(R)-(4-聯(lián)苯羰基氨基)-2(R)-羥基-6-氨基-2，3-二氫化茚10.0g(0.029mol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)0.4g(0.0032mol，0.011eqiv)、200mL丙酮和1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基碘化亞銨10.8g(96％效力，0.0305mol，1.05當(dāng)量)。6小時后，濃縮反應(yīng)混合物生成泡沫狀物?；旌洗伺菽瓲钗锱c120mL甲苯，室溫攪拌19.5h，過濾，50℃真空干燥，得到殘留物，即標(biāo)題化合物的氫碘酸鹽，由NMR表征1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.02(d，J＝9.0Hz，2H)；7.82-7.93(m，1H)；6.90-7.69(m，14H)；4.85-5.25(m，2H)；4.60-4.80(m，2H)；3.45(s，2H)；3.00-3.20(m，2H)；2.60-2.75(m，1H)；2.10-2.35(m，4H)。
將殘留物溶于200mL二氯甲烷，用200mL 1.0M氫氧化鈉水溶液、200mL鹽水順序萃取。硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾，真空蒸發(fā)，得15g標(biāo)題化合物。
取5.0g上面得到的化合物與200mL二氯甲烷混合。加入1.00gDARCO碳，攪拌1小時，然后通過Hyflo床過濾。真空蒸發(fā)，得4.0g殘留物。將殘留物溶于絕對乙醇(約40mL)，加入去離子水(12mL)，產(chǎn)生固體物。加熱淤漿固體到55℃保持30分鐘，然后冷卻到室溫，攪拌。24小時后，過濾，用10mL 10∶3 EtOH水混合物沖洗，真空干燥，得1.5g標(biāo)題化合物mp108-112℃。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)能認(rèn)識到，標(biāo)題化合物的其它名稱為6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2-羥基-1-聯(lián)苯酰氨基-2，3-二氫化茚。
實施例3-13-氟聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-酰胺 混合4-溴-2-氟苯甲酸(10g，45.7mmol)、甲醇(100mL)和濃硫酸(5.0mL)。加熱回流。16小時后，冷卻到室溫，真空蒸發(fā)，得白色固體。將此固體溶于乙酸乙酯(大約40mL)，用2×80mL飽和碳酸氫鈉水溶液和1×80mL鹽水萃取，硫酸鎂干燥，過濾，真空蒸發(fā)，得9.32g(88％)白色固體4-溴-2-氟苯甲酸甲酯。1H NMR(d6-DMSO，300MHz)8.80(t，J＝8.4Hz，1H)，7.72(dd，J＝10.8Hz，1.8Hz，1H)，7.54(ddd，J＝8.4Hz，1.8Hz，0.6Hz，1H)，3.83(s，3H)；IR(cm-1，KBr)3010，2995，1723，1603，1484，1438，1406，1294，1277，1095，885；C8H6BrFO2的元素分析計算值C，41.23；H，2.60；實測值C，40.97；H，2.61。
混合4-溴-2-氟苯甲酸甲酯(9.3g，40.0mmol)、苯硼酸(9.75g，80.0mmol)、氟化銫(32.6g，100.1mmol)、DMF(190mL)和去離子水(50mL)。加熱到80℃，加入Pd(OAc)2(303g，4.0mmol)。20分鐘后，冷卻到室溫，借助100mL乙酸乙酯通過HyFlo過濾，濾液用2×100mL 5％氯化鋰水溶液、2×50mL 1.0M氫氧化鈉水溶液、和2×100mL鹽水萃取。分離有機(jī)相，硫酸鎂干燥，過濾，真空蒸發(fā)，得8.85g(96％)白色固體3-氟聯(lián)苯-4-羧酸甲酯。1H NMR(CDCl3，300MHz)8.01(t，J＝7.8Hz，1H)，7.58-7.62(m，2H)，7.41-7.51(m，4H)，7.37(m，1H)，3.96(s，3H)；IR(cm-1，KBr)3033，2954，1721，1622，1437，1409，1298，1289，1266，1097；C14H11FO2的元素分析計算值C，73.03；H，4.82；實測值C，73.06；H，4.86。
混合3-氟聯(lián)苯-4-羧酸甲酯(8.18g，35.5mmol)、THF(225mL)和1.0M氫氧化鈉水溶液(225mL)。50℃加熱8小時。冷卻到室溫，加入1.0M鹽酸水溶液(300mL)，用2×200mL乙酸乙酯萃取。分離有機(jī)相，硫酸鎂干燥，過濾，真空蒸發(fā)，得7.12g(93％)白色固體3-氟聯(lián)苯-4-羧酸。1H NMR(d6-DMSO，300MHz)13.22(br s，1H)，7.93(t，J＝8.1Hz，1H)，7.74-7.78(m，2H)，7.60-7.66(m，2H)，7.40-7.52(m，3H)；IR(cm-1，KBr)3035，2666，2575，1699，1621，1563，1408，1298，1265，1193，904；C13H9FO2的元素分析計算值C，72.22；H，4.20；實測值C，72.18；H，4.35。
混合3-氟聯(lián)苯-4-羧酸10.46g(0.048mol)，432mL二氯甲烷，7滴二甲基甲酰胺，和5.44mL(0.062mol，1.3當(dāng)量)草酰氯。2小時后，蒸發(fā)溶劑，得3-氟聯(lián)苯-4-碳酰氯固體。
混合三氟甲磺酸1-甲硫基-1-甲基-N-(4-氟芐基)-N-甲基亞銨20.96g(0.58mol)、53mL吡啶和1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-氨基-2，3-二氫化茚15.33g(0.58mol，1當(dāng)量)。4.2小時后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分吡啶，加入乙酸乙酯，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得一殘留物。將此殘留物于0℃貯藏過夜，加入乙酸乙酯(400mL)，用200mL 1N氫氧化鈉水溶液、200mL水依次萃取。以硫酸鈉干燥有機(jī)層，過濾，蒸發(fā)得一殘留物。殘留物經(jīng)硅膠層析，以3-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得18.85g(76％)1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-(1-甲基-N’-(4-氟芐基)-N’-甲基脒基)-2，3-二氫化茚MS m/z＝428(M+1)，mp＝123-132℃。
在冰浴中混合1(R)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-6-(1-甲基-N’-(4-氟芐基)-N’-甲基脒基)-2，3-二氫化茚18.86g(0.044mol)和110mL三氟乙酸。加畢后移去冷卻浴，在室溫下攪拌2.5h。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)反應(yīng)混合物得一殘留物。將殘留物溶于100mL二氯甲烷，在冰浴中冷卻到大約13℃，加入1N氫氧化鈉水溶液(272mL)，接著加入溶在120mL二氯甲烷中的3-氟聯(lián)苯-4-碳酰氯11.26g(0.048mol，1.1當(dāng)量)。再加入30mL 1N氫氧化鈉水溶液后于大約10℃攪拌40分鐘。將反應(yīng)混合物在水與二氯甲烷之間分配。分離各層，有機(jī)層用水萃取，干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，得20.67g殘留物。殘留物經(jīng)硅膠層析，以3-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，接著使用Prep 2000進(jìn)行第二次硅膠層析，以3-10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫，得11.34g(49％)標(biāo)題化合物MS m/z＝526(M+1)。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，標(biāo)題化合物的另一名稱為6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2-羥基-1-(2-氟聯(lián)苯酰氨基)-2，3-二氫化茚。
實施例4-12’，6’-二氯聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 向N-環(huán)己基碳二亞胺-N-甲基聚苯乙烯樹脂(Novobiochem，2.0mmol/g)(150mg，0.30mmol)和2’，6’-二氯聯(lián)苯-4-羧酸(14mg，0.05mol)的混合物中順序加入DMF(1.6mL)、N-羥基琥珀酰亞胺(2.3mg，0.02mmol)的DMF(0.2mL)溶液和N’-(3-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-5-基)-N-(4-氟芐基)-N-甲基-乙脒(6.6mg，0.02mmol)的DMF(0.2mL)溶液。攪拌混合物16小時，然后加入聚苯乙烯三羥甲基氨基甲烷樹脂(polystyrene trisamineresin)(Argonaut Technologies，3.7mmol/g)(100mg，0.37mmol)，進(jìn)一步攪拌24小時。過濾混合物以提供0.01M標(biāo)題化合物溶液。MS(m/e)577(M+)。
實施例4-2到4-37基本上按實施例4-1所述制備。
實施例5-16-氰基吡啶-3-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺
將等摩爾量的N’-(3-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-5-基)-N-(4-氟芐基)-N-甲基乙脒(229mg，0.70mmol)和6-氰基-3-羧酸吡啶(0.70mmol，103mg)溶于無水DMF(4.0mL)。加入三乙胺(0.487mL，3.50mmol)，接著再加入苯并三唑-1-基氧基三-二甲氨基鏻六氟磷酸鹽(296mg，0.70mmol)。室溫攪拌反應(yīng)物0.5小時。加水(100mL)稀釋反應(yīng)物，繼用EtOAc(3×50mL)萃取。硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，濃縮。將反應(yīng)粗產(chǎn)物溶于THF(5.0mL)。加入氫氧化物樹脂(BIO-RAD AG 1-X8樹脂，20-50目-用水洗滌)，1M NaOH，MeOH，乙醚，真空干燥，至溶液呈堿性，在環(huán)境溫度下攪拌24小時。過濾反應(yīng)物，進(jìn)一步用THF洗滌，蒸發(fā)到硅膠上，利用EtOAc/己烷進(jìn)行快速柱層析純化，得253mg(79％)白色固體標(biāo)題化合物。MS(m/e)458(M+)。
實施例5-2到5-8基本上按實施例5-1所述制備。
實施例6-16-(2-氯苯基)吡啶-3-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺
將N’-(3(R)-氨基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-5-基)-N-(4-氟芐基)-N-甲基乙脒(42mg，0.13mmol)和6-(2-氯苯基)吡啶-3-羧酸(103mg，0.70mmol)溶于無水DMF(2.5mL)。加入三乙胺(0.178mL)，接著加入苯并三唑-1-基氧基三-二甲基氨基鏻六氟磷酸鹽(54mg，0.13mmol)。在室溫下攪拌到反應(yīng)完成。加水(100mL)稀釋反應(yīng)物，用EtOAc萃取。硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾，濃縮。以CHCl3/MeOH混合物進(jìn)行快速柱層析，分離得到276mg(35.7％)固體標(biāo)題化合物。
MS(m/e)543.0(M+)。
實施例6-2到6-4基本上按實施例6-1所述制備。
實施例7-14-(吡啶-3-基)苯基-1-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 80℃在二噁烷中混合4-碘代苯基-1-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺(0.131g，0.235mmol)、2-(三丁基甲錫烷基)吡啶(0.129g，0.352mmol)和四(三苯膦)鈀(O)(0.406g，0.352mmol)。攪拌下加熱至反應(yīng)完成。蒸除溶劑。殘留物用乙酸乙酯稀釋，與等體積量的飽和氟化鉀一起攪拌3小時。通過硅藻土墊過濾溶液。使有機(jī)層與水層分開，硫酸鎂干燥有機(jī)層。蒸除有機(jī)溶劑，利用二氯甲烷和甲醇通過快速層析純化，得0.035g(30％)標(biāo)題化合物固體。MS(m/e)509.2(M+)。
實施例8-12’，4’，6’-三氟聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 在二氯甲烷中混合2’，4’，6’-三氟聯(lián)苯-4-羧酸(66mg，0.26mmol)、EDC(53mg，0.28mmol)和N-羥基琥珀酰亞胺(0.33mg，0.28mmol)，攪拌至完全反應(yīng)。所得溶液用1N鹽酸洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，濃縮。在二氯甲烷中混合殘留物與N’-(3(R)-氨基-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-5-基)-N-(4-氟芐基)-N-甲基乙脒(42mg，0.13mmol)，攪拌至反應(yīng)完成。蒸除溶劑，利用二氯甲烷和甲醇進(jìn)行快速層析純化，得37mg標(biāo)題化合物。MS(m/e)562.0(M+)。
實施例9-13，4’-二氟聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 室溫攪拌由3，4’-二氟聯(lián)苯-4-羧酸(160mg，0.684mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(79mg，0.684mmol)和DCC(141mg，0.684mmol)以及15mL二氯甲烷組成的混合物2小時。0℃混合(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(256mg，0.62mmol)與TFA(2mL)，攪拌2小時。減壓蒸發(fā)TFA。將殘留物溶于二氯甲烷，蒸發(fā)至干-重復(fù)該過程3遍。加入5mL二氯甲烷和1mL三乙胺。將此溶液加到上面的混合物中，室溫攪拌12小時。將混合物傾入二氯甲烷中，水洗，硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物經(jīng)柱層析純化(硅膠，3％MeOH/CH2Cl2)，得到199mg白色固體標(biāo)題化合物(55％收率)。
1H NMR(CDCl3)δ8.21(1H，t，J＝8.4Hz)，7.58(2H，dd，J＝8.8和4.8Hz)，7.32(1H，d，J＝13.2Hz)，7.26-7.23(2H，m)，7.19-7.12(3H，m)，7.04(2H，t，J＝8.8Hz)，6.68(1H，s)，6.66(1H，s)，5.32(1H，t，J＝5.2Hz)，4.82-4.72(1H，m)，4.64(2H，s)，4.56(1H，q，J＝6.4Hz)，3.32(1H，dd，J＝15.6和8.0Hz)，3.00(3H，s)，2.96(1H，dd，J＝15.2和8.4Hz)，1.96(3H，s).MS 544(MH+).
實施例9-2到9-6基本上按實施例9-1所述制備。
實施例10-14-溴苯基-1-羧酸(R)-(6-(1-((呋喃-2-基甲基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺
0℃下，向硫代乙酰胺(10.04g，133.64mmol)和碳酸鉀(45.80g，331.38mmol)、100ml THF組成的混合物中滴加鄰苯二甲酰氯(28.49g，140.32mmol)。2小時后升溫反應(yīng)溫度到25℃，另攪拌2小時，然后再將反應(yīng)混合物冷卻到0℃。滴加125mL冰水猝滅反應(yīng)混合物。用EtOAc(2X)萃取反應(yīng)混合物。硫酸鎂干燥有機(jī)層，真空除去溶劑，得3.7g N-硫代乙酰基-異吲哚-1，3-二酮，為淡紅色固體粗品。
25℃將N-甲基糠胺(117.2mg，1.05mmol)溶于20ml乙醚。向其中加入N-硫代乙?；?異吲哚-1，3-二酮(294.4mg，1.43mmol)，攪拌24小時。向反應(yīng)混合物中加入MeOTf(181.7mg，1.11mmol)，再攪拌23小時。從油狀物中潷去乙醚，并將油狀物用乙醚研磨-重復(fù)此過程三遍。在真空下除去油狀殘留物中過量的乙醚，得到320.4mg硫代亞氨酸酯(thioimidate)油粗品。將此粗產(chǎn)物(161.1mg，0.483mmol)溶于10mL吡啶，加入N-(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-4-溴苯甲酰胺(107.5mg，0.310mmol)。25℃攪拌反應(yīng)物22小時。真空除去溶劑，將殘留物在二氯甲烷與飽和碳酸氫鈉水溶液間分配。有機(jī)層以硫酸鎂干燥。過濾，真空除去溶劑，得146.2mg粗產(chǎn)物。經(jīng)Biotage色譜純化(1％MeOH/EtOAc)，得63.6mg標(biāo)題化合物(43％)，為灰白色固體。MS(m/e)483(M+1)。
實施例11-14-溴苯基-1-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 步驟a)0℃混合(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3.7g，14.0mmol)與10mL TFA。攪拌混合物1小時，蒸發(fā)至干。向殘留物中加入6.5mL三乙胺和30mL二氯甲烷。將此混合物與4-溴苯甲酸苯并三唑-1-基酯在15mL二氯甲烷中的溶液在0℃下緩慢混合。室溫攪拌所得混合物12小時。過濾，得到3.4g(70％收率)N-(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-4-溴苯甲酰胺白色固體。MS 348(MH+)。
步驟b)0℃下，向三乙胺(16.0g，158mmol)和4-氟芐胺(9.90g，78.8mmol)在200mL乙酸乙酯中的混合物內(nèi)加入乙酰氯(9.28g，118mmol)，攪拌12小時。向混合物中加入100mL水。水層用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并有機(jī)層，鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑，得N-(4-氟芐基)乙酰胺(13.5gm)，100％收率，為黃色油狀物。0℃下向N-(4-氟芐基)-乙酰胺(13.5g，80.8mmol)/200mL四氫呋喃中加入NaH(6.5g，162mmol)，攪拌4小時。然后向上述混合物中加入碘甲烷(22.9g，161.6mmol)，攪拌12小時。將混合物傾入200mL水中。水層用二氯甲烷(3×200mL)萃取。合并有機(jī)層，鹽水洗滌，然后以無水硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)柱色譜純化(硅膠，5％丙酮/己烷，50％丙酮/己烷)，得到N-(4-氟芐基)-N-甲基乙酰胺(9.1gm)，收率64％，為黃色油狀物。向N-(4-氟芐基)-N-甲基乙酰胺(9.1g，50.3mmol)/200mL甲苯中加入Lawesson試劑(20.3g，50.3mmol)，加熱到100℃持續(xù)3小時。減壓除去溶劑。殘留物用柱層析純化(硅膠，2％二氯甲烷/己烷，100％二氯甲烷)，得到N-(4-氟芐基)-N-甲基硫代乙酰胺(5.6g)黃色固體，56.5％MS 198(MH+)。
步驟c)向N-(4-氟芐基)乙酰胺(0.9g，5.4mmol)/50mL甲苯中加入Lawesson試劑(1.8g，3.6mmol)，80℃加熱12小時。減壓除去溶劑。殘留物經(jīng)柱層析純化(硅膠，丙酮∶己烷＝20∶80)，得一混合物。用乙醚洗滌，過濾棄去不溶固體雜質(zhì)。減壓除去溶劑，得到黃色固體N-(4-氟芐基)-硫代乙酰胺(0.7gm)，收率71％MS 184(MH+)。
步驟d)室溫下向N-(3-氟芐基)硫代乙酰胺(0.106g，0.580mmol)在10mL二氯甲烷中的溶液內(nèi)加入三氟甲磺酸甲酯(0.190g，1.16mmol)。攪拌混合物30分鐘，減壓除去溶劑。將殘留物溶于5mL吡啶。然后向溶液中加入N-(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-4-溴苯甲酰胺的三氟乙酸鹽。攪拌3小時。減壓除去吡啶。殘留物經(jīng)柱層析純化(硅膠/己烷∶丙酮＝7∶3，1∶1)，得到40mg白色固體標(biāo)題化合物，14％收率MS 496(MH+)。
實施例11-2到11-17基本上按實施例11-1所述制備。
實施例12-1聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺在0℃下混合(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，5.68mmol)與5mL TFA。攪拌混合物1小時，然后蒸發(fā)至干。向殘留物中加入3.0mL三乙胺和30mL二氯甲烷。向此混合物內(nèi)加入聯(lián)苯-4-羧酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(1.76g，5.96mmol)在15mL二氯甲烷中的溶液。攪拌所得混合物12小時。蒸發(fā)溶劑，殘留物以柱層析純化(硅膠/MeOH∶CH2Cl2＝9∶1)，得1.88g(96％收率)聯(lián)苯-4-羧酸(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺；MS 345(MH+)。
室溫下，向N-(4-氟芐基)硫代乙酰胺(0.2mg，1.0mmol)在5mL二氯甲烷中的溶液內(nèi)加入三氟甲磺酸甲酯(0.290g，1.76mmol)。攪拌混合物30分鐘，減壓除去溶劑。將殘留物溶于5mL吡啶。然后向溶液中加入聯(lián)苯-4-羧酸(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。攪拌12小時。減壓除去吡啶。殘留物以柱層析純化(硅膠/己烷∶丙酮＝7∶3，1∶1)，得78mg白色固體標(biāo)題化合物，收率35％1H NMR(DMSO-d6)δ8.78(1H，d，J＝8.8Hz)，8.04(2H，d，J＝8.8Hz)，7.79(2H，d，J＝8.4Hz)，7.74(2H，dd，J＝7.4，1.6Hz)，7.50(2H，t，J＝8.0Hz)，7.41(1H，t，J＝7.2Hz)，7.28(2H，dd，J＝8.8，6.6Hz)，7.14(2H，t，J＝8.8Hz)，7.04(1H，t，J＝7.6Hz)，6.78(1H，d，J＝7.2Hz)，6.37(1H，s)，5.33(1H，d，J＝5.6Hz)，5.27(1H，t，J＝7.6Hz)，4.59(2H，s)，4.45(1H，q，J＝6.0Hz)，3.10(1H，dd，J＝14.8，7.2Hz)，2.90(3H，s)，2.68(1H，dd，J＝14.8，7.2Hz)，1.88(3H，s)；MS 508(MH+).
實施例12-2到12-7基本上按實施例12-1所述制備。
實施例13-1聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(7-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-1，2，3，4-四氫化萘-1-基)酰胺 在50mL甲苯與50mL水的混合液中攪拌1-氨基-7-硝基-1，2，3，4-四氫化萘-2-醇(500mg，2.40mmol)與1N NaOH(4.8mL，4.8mmol)的混合物共計30分鐘。緩慢加入聯(lián)苯-4-碳酰氯(570mg，2.64mmol)，室溫攪拌4小時。濾除固體，用甲苯洗滌。減壓蒸發(fā)溶劑。以54％的收率得到白色固體聯(lián)苯-4-羧酸(2-羥基-7-硝基-1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-酰胺1H NMR(DMSO-d6)δ8.87(1H，d，J＝8.4Hz)，8.03(2H，d，J＝8.4Hz)，7.99(2H，d，J＝7.6Hz)，7.79(2H，d，J＝8.4Hz)，7.74(2H，d，J＝8.4Hz)，7.50(2H，t，J＝7.2Hz)，7.43(2H，t，J＝6.8Hz)，5.22(1H，d，J＝4.4Hz)，5.11(1H，t，J＝7.6Hz)，3.95-4.01(1H，m)，2.87-3.07(2H，m)，2.08-2.15(1H，m)，1.81-1.94(1H，m)；MS 389(MH+)。室溫、60psi(414kPa)下在10mL DMF中用48mg 10％Pd-C還原上述化合物(0.25g，0.64mmol)過夜，以96％的收率得到黃色油狀物聯(lián)苯-4-羧酸(7-氨基-2-羥基-1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-酰胺。MS 359(MH+)。
室溫下，向N-4-氟芐基-N-甲基硫代乙酰胺(0.145g，0.736mmol)在10mL二氯甲烷中的溶液內(nèi)加入三氟甲磺酸甲酯(0.150g，0.915mmol)。攪拌混合物30分鐘，減壓除去溶劑。然后加入聯(lián)苯-4-羧酸(7-氨基-2-羥基-1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-酰胺(0.22g，0.61mmol)，接著加入5mL吡啶。攪拌所得混合物12小時。蒸發(fā)吡啶，殘留物通過柱層析純化(硅膠，5％MeOH/CH2Cl2)，得到10mg亮黃色固體標(biāo)題化合物，收率2.6％
1H NMR(CDCl3)δ7.89(2H，d，J＝8.0Hz)，8.66(2H，d，J＝8.4Hz)，7.61(2H，d，J＝7.2Hz)，7.47(2H，t，J＝7.6Hz)，7.39(1H，t，J＝7.6Hz)，7.21(1H，dd，J＝6.0，8.8Hz)，6.98-7.05(3H，m)，6.72(1H，s)，6.62(1H，dd，J＝2.0，8.4Hz)，6.56(1H，d，J＝7.2Hz)，5.22(1H，t，J＝7.6Hz)，4.60(2H，s)，3.98-4.04(2H，m)，3.41(1H，t，J＝6.0Hz)，2.96(3H，s)，2.85(2H，t，J＝4.8Hz)，2.15-2.21(2H，m)，1.87-1.95(1H，m)，1.92(3H，s)，1.60-1.64(1H，m)；MS 522(MH+).
實施例14-13-氟聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((3，4-二氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 以3，4-二氟芐胺為原料，基本上按照實施例11-1，步驟b所述制備N-(3，4-二氟芐基)-N-甲基硫代乙酰胺，收率66％，為黃色固體MS216(MH+)。
室溫下，向N-(3，4-二氟芐基)-N-甲基硫代乙酰胺(0.145g，0.736mmol)的10mL二氯甲烷溶液中加入三氟甲磺酸甲酯(0.750g，3.49mmol)。攪拌混合物30分鐘，減壓除去溶劑。然后順序加入(6-氨基-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-氨基甲酸叔丁酯(0.78g，2.97mmol)、5mL吡啶。攪拌所得混合物12小時。蒸發(fā)吡啶，殘留物通過柱層析純化(硅膠，3％MeOH/CH2Cl2)，得0.98g白色固體(6-(1-((3，4-二氟芐基)-甲基氨基)亞乙基氨基)-2-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)-氨基甲酸叔丁酯MS 446(MH+)。
向(R)-(6-(1-((3，4-二氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(180mg，4.04mmol)中加入5mL三氟乙酸，攪拌30分鐘。減壓除去溶劑。將殘留物溶于15mL二氯甲烷。然后向溶液中加入3-氟聯(lián)苯-4-羧酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯(150mg，4.79mmol)和三乙胺(0.6mL，4.0mmol)，攪拌12小時。將混合物傾入二氯甲烷中，水洗，硫酸鈉干燥，然后濃縮。殘留物通過柱層析純化(硅膠，3％ MeOH/CH2Cl2)，得到35mg白色固體標(biāo)題化合物，收率16％1H NMR(CD3OD)δ7.88(2H，t，J＝8.0Hz)，7.7(2H，d，J＝8.4Hz)，7.60(2H，dd，J＝8.0，1.2Hz)，7.47-7.55(3H，m)，7.43-7.47(1H，m)，7.21-7.32(2H，m)，7.18(1H，d，J＝8.0Hz)，7.11-7.14(1H，m)，6.71(2H，dd，J＝10.0，1.2Hz)，5.47(1H，d，J＝6.8Hz)，4.69(2H，s)，4.54(1H，q，J＝7.2Hz)，4.54(1H，q，J＝6.4Hz)，3.29(1H，q，J＝7.2Hz)，3.07(3H，s)，2.88(1H，q，J＝7.8Hz)，1.99(3H，s)；MS544(MH+).
實施例15-12’-三氟甲基聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺 在-10℃下混合1-氨基-2，3-二氫化茚(1.0g，8.1mmol)與6.6mL發(fā)煙硝酸。攪拌形成的混合物30分鐘，倒入冰中，攪拌30分鐘。收集固體，水洗，干燥，得到0.614g(42％)產(chǎn)物。在THF中與二碳酸二叔丁酯(0.929g，4.26mmol)混合。將混合物用飽和碳酸鉀水溶液調(diào)和至大約pH11。攪拌8小時，傾入二氯甲烷，水洗，干燥，濃縮。將殘留物溶于1∶1的乙醚與己烷混合液中，然后在-10℃保持過夜。收集固體，干燥，得0.57g(59％)(6-硝基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3)d8.16(1H，br s)，8.11(1H，dd，J＝8.4 and 2.0Hz)，7.34(1H，d，J＝8.4Hz)，5.25(1H，q，J＝8.8Hz)，4.78(1h，br d，J＝6.4Hz)，3.08-2.00(1H，m)，2.96-2.78(1H，m)，2.72-2.62(1H，m)，1.93-1.83(1H，m)，1.51(9H，s).
0℃、用15分鐘，向(6-硝基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.17g，4.2mmol)和CuCl(1.25g，12.6mmol)在50mL甲醇中的混合物內(nèi)緩慢加入KBH4(1.59g，29.4mmol)。攪拌混合物1小時，然后通過Florisil墊過濾。蒸發(fā)THF，將所得固體溶于EtOAc。水洗混合物，干燥，濃縮，得到0.76g(73％)(6-氨基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(CDCl3)d6.99(1H，d，J＝8.0Hz)，6.65(1H，s)，6.56(1H，dd，J＝8.0和2.0Hz)，5.09(1H，q，J＝8.0Hz)，4.70(1H，br d，J＝7.2Hz)，3.60(2H，s)，2.86-2.79(1H，m)，2.75-2.67(1H，m)，2.58-2.47(1H，m)，1.78-1.69(1H，m)，1.48(3H，s).
室溫下，向N-4-氟芐基-N-甲基硫代乙酰胺(0.662g，3.4mmol)在10mL乙醚中的溶液內(nèi)加入MeI(0.623g，4.4mmol)。攪拌混合物3小時，真空蒸發(fā)乙醚。順序加入(6-氨基-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.7g，2.28mmol)、5mL吡啶。攪拌所得混合物12小時。蒸發(fā)吡啶，殘留物通過柱層析純化(硅膠，3％MeOH/CH2Cl2)，得到1.26g(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯，為亮黃色固體MS 412(MH+)；1H NMR(CD3OD)d7.35-7.29(2H，m)，7.18-7.10(3H，m)，6.70(1H，s)，6.65(1H，d，J＝7.6Hz)，5.06(1H，t，J＝6.8Hz)，4.69(2H，s)，3.05(3H，s)，2.97-2.91(1H，m)，2.84-2.77(1H，m)，2.55-2.48(1H，m)，1.97(3H，s)，1.52(9H，s).
室溫攪拌由2’-三氟甲基聯(lián)苯-4-羧酸(100mg，0.376mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(43mg，0.376mmol)和DCC(77mg，0.376mmol)以及15mL二氯甲烷組成的混合物2小時。0℃混合(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2，3-二氫化茚-1-基)氨基甲酸叔丁酯(129mg，0.313mmol)與TFA(2mL)，攪拌2小時。減壓蒸發(fā)TFA。將殘留物溶于二氯甲烷，蒸發(fā)至干；重復(fù)該過程三次。加入5mL二氯甲烷和1mL三乙胺。將此溶液加到上述混合物中，室溫攪拌12小時。將混合物傾入二氯甲烷內(nèi)，水洗，硫酸鈉干燥，濃縮。殘留物通過柱層析純化(硅膠，3％MeOH/CH2Cl2)，得82mg白色固體標(biāo)題化合物(47％收率)。
MS 560(MH+)；1H NMR(CDCl3)d7.83(2H，d，J＝8.0Hz)，7.75(1H，d，＝7.6Hz)，7.56(1H，t，J＝7.2Hz)，7.49(1H，t，J＝8.0Hz)，7.40(2H，d，J＝8.0Hz)，7.31(1H，d，J＝8.0Hz)，7.26-7.21(3H，m)，7.15(1H，d，J＝7.6Hz)，7.02(2H，t，J＝8.8Hz)，6.75(1H，s)，6.64(1H，d，J＝7.2Hz)，5.67(1H，q，J＝7.6Hz)，4.61(2H，q，J＝10.0Hz)，2.97(3H，s)，2.94-2.83(1H，m)，2.75-2.68(1H，m)，2.00-1.70(4H，br s)，1.69-1.58(1H，m).
實施例15-2到15-7基本上按實施例15-1所述制備。
實施例P-1聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺半水合物向2.86kg聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺溶劑化物中加入21.8L甲醇。將溶液過濾通過碳浸漬濾器，濾器用24L甲醇沖洗。35分鐘內(nèi)向溶液中加入5.7kg水，其后加入15g聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺半水合物晶種。20分鐘后，加入1.15kg水，接著再加入15g晶種。1小時后，在30分鐘內(nèi)進(jìn)一步加入1.15kg水，接著再加入15g晶種。10分鐘后，在1小時內(nèi)加入3.4kg水，室溫攪拌漿液1小時，繼而于0℃攪拌45分鐘。過濾收集固體，用11.4L甲醇和2.9L水組成的冷溶液沖洗，干燥，得到2.19kg白色固體標(biāo)題化合物。
實施例P-2聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺半水合物在20-23℃下，將聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺溶劑化物(2.0g)溶于甲醇(24mL)。向溶液中加入水(5ml)，接著加入半水合物晶種(20mg)。在20-23℃下攪拌混合物2小時，然后冷卻到0-5℃。過濾混合物，用甲醇(8mL)與水(2mL)組成的溶液洗滌，進(jìn)而在50-60℃下真空干燥16小時，得到1.66g標(biāo)題化合物。
實施例P-3聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺半水合物混合6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2-羥基-1-聯(lián)苯基氨基-2，3-二氫化茚乙腈溶劑化物(101g)和甲醇(1.2L)構(gòu)成的溶液與Darco G-60(5g)。在15-25℃下攪拌15-30分鐘，過濾混合物，濾出固體用甲醇(0.4L)沖洗。向合并的濾液中加入水(0.4L)，沖洗，加入半水合物晶種(1.5g)。在15-25℃下攪拌混合物2-3小時，然后冷卻到0-5℃，再攪拌90分鐘。過濾混合物，用0-5℃的甲醇(0.8L)與水(0.2L)組成的溶液洗滌，然后在47-53℃下真空干燥20小時，得到88.7g標(biāo)題化合物。
本發(fā)明化合物可以單獨給藥或者以藥物組合物即與可藥用載體或賦形劑組合的形式給藥，這些載體或賦形劑的用量比與性質(zhì)根據(jù)所選化合物的溶解性與化學(xué)性質(zhì)、選擇的給藥途徑以及標(biāo)準(zhǔn)制藥準(zhǔn)則而定。本發(fā)明化合物盡管它們本身是有效的，但考慮到穩(wěn)定性、方便性、溶解性等因素，可以對它們加以加工，以其可藥用鹽形式給藥。在實踐中，式I化合物通常是以藥物組合物即與可藥用載體或稀釋劑混合的形式給藥。
因此，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包括式I化合物和可藥用稀釋劑。本發(fā)明還提供了適宜的包含標(biāo)簽的包裝品，其中含有包含式I化合物的藥物組合物。
式I化合物能夠通過多種途徑給藥。為了有效治療患有本文所述疾病的患者，式I化合物可以以能使化合物獲得有效量生物利用度的任何形式或方式給藥。包括口服和非腸道途徑。例如，式I化合物可以通過口服、吸入、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、透皮、鼻內(nèi)、直腸、眼睛、局部、舌下、經(jīng)頰等途徑給藥。對于本文所述疾病的治療，通常優(yōu)選口服給藥。
制劑領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員能夠很容易地根據(jù)下列因素來選擇合適的給藥形式與方式所選擇化合物的具體性質(zhì)、受治療的疾病、疾病的程度以及其它相關(guān)情況。(Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th Edition，Mack Publishing Co.(1990))。
藥物組合物用制藥領(lǐng)域公知的方法制備。載體或賦形劑可以是固體、半固體或液體物質(zhì)，后者可用作活性成分的媒介物或介質(zhì)。適宜的載體或賦形劑是本領(lǐng)域熟知的。藥物組合物適合于口服、吸入、非腸道或局部使用，并且可以以片劑、膠囊劑、氣霧劑、吸入劑、栓劑、溶液、混懸劑等形式給予患者。
本發(fā)明化合物可以口服給藥，例如與惰性稀釋劑或膠囊一起給藥，或者可壓制成片劑。對于口服治療給藥，可以將化合物與賦形劑一起摻合，以片劑、糖錠劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑、糯米紙囊劑(wafers)、口香糖等形式使用。這些制劑應(yīng)含有至少4％的本發(fā)明化合物(活性成分)，但根據(jù)特定劑型可以改變，適宜的為單位重量的4％-約70％。組合物中化合物的存在量以能獲得適宜劑量為準(zhǔn)。優(yōu)選的本發(fā)明組合物與制劑可由本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員確定。
片劑、丸劑、膠囊劑、糖錠劑等還可以包含一種或多種下列輔劑粘合劑，如微晶纖維素、黃耆膠或凝膠；賦形劑如淀粉或乳糖，崩解劑如藻酸、Promogel，玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或Sterotex；助流劑如膠態(tài)二氧化硅；并且可以加入甜味劑如蔗糖或糖精或調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙味品。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時，除上述物質(zhì)外，它還可以包含液體載體，例如聚乙二醇或脂肪油。其它劑量單位形式可以包含能夠修飾劑量單位的物理形式(例如包衣)的其它各種物質(zhì)。因此，片劑或丸劑可以用糖、蟲膠或其它包衣物包衣。糖漿劑中除化合物外，還可以包含蔗糖作為甜味劑和一些防腐劑、染料和著色劑及調(diào)味劑。用于制備這些組合物的物質(zhì)應(yīng)當(dāng)是藥學(xué)純的，并且以無毒的量使用。
對于口服或非腸道治療給藥，可以將本發(fā)明化合物摻入到溶液或混懸液中。這些制劑典型地含有至少0.1％的本發(fā)明化合物，而且可以在其重量的0.1-約90％之間變化。這些組合物中式I化合物的存在量應(yīng)以能獲得適宜劑量為準(zhǔn)。溶液或混懸液也可以包含一種或多種下列輔劑無菌稀釋劑如注射用水，鹽水溶液，不揮發(fā)油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐醇或尼泊金甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及用于調(diào)節(jié)張力的物質(zhì)，如氯化鈉或環(huán)糊精。非腸道制劑可以包封在安瓿、一次性使用注射器或由玻璃或塑料制備的多劑量小瓶內(nèi)。優(yōu)選的組合物和制劑能夠由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。
本發(fā)明化合物也可以局部給藥，并且在以這種方式給藥時，載體宜包括溶液、軟膏或凝膠基質(zhì)。例如，這種基質(zhì)可以包括一種或多種下列成分凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蠟、礦物油、諸如水和乙醇之類稀釋劑，以及乳化劑和穩(wěn)定劑。局部用制劑中所包含的式I或其可藥用鹽的濃度為大約0.1-大約10％ w/v(重量/單位體積)。
式I化合物為M-1毒蕈堿受體激動劑。而且，式I化合物還是這種具體毒蕈堿受體的選擇性激動劑。本發(fā)明化合物具有特別有用的性質(zhì)，這些性質(zhì)與它們的生物利用度、藥代動力學(xué)、安全性和效力有關(guān)。毒蕈堿激動劑，包括其亞型結(jié)合分布方式，可以用本領(lǐng)域公知的方法鑒定。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療與毒蕈堿受體相關(guān)的疾病的方法，包括對需要的患者給藥有效量的式I化合物。因此，本發(fā)明不僅包括本文所述的受治療疾病，還包括本領(lǐng)域技術(shù)人員所知道的用這種激動劑能治療的其它疾病。
能用毒蕈堿激動劑治療的多種疾病根據(jù)已確立和公認(rèn)的分類是已知的，而其它則是未知的。例如，認(rèn)知是一種復(fù)雜且有時難以定義的現(xiàn)象。但普遍認(rèn)為認(rèn)知應(yīng)包括各種“功能域”(domain)。這些功能域包括短期記憶、長期記憶、工作記憶、執(zhí)行功能和注意力。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物可用于治療由任何上述認(rèn)知域中或認(rèn)知的其它方面的缺陷表征的疾病。因此，術(shù)語“認(rèn)知障礙”包括一個或多個認(rèn)知功能域缺陷表征的任何疾患，這些功能域包括但不限于短期記憶、長期記憶、工作記憶、執(zhí)行功能和注意力。
本發(fā)明能夠治療的一種認(rèn)知障礙是年齡相關(guān)性認(rèn)知衰退。這種疾病本領(lǐng)域尚不完全了解，但包括認(rèn)知功能域，特別是記憶和注意力功能域隨年齡老化而衰退，另一種認(rèn)知障礙是輕度認(rèn)知缺損。這種疾病本領(lǐng)域同樣未完全了解，但涉及到認(rèn)知功能域的衰退，被認(rèn)為代表了一類患者，其中的大多數(shù)患有初期阿爾茨海默病。另一種認(rèn)知障礙是與精神分裂癥有關(guān)的認(rèn)知缺損。認(rèn)知障礙與精神分裂癥的其它癥狀之間的關(guān)系目前還不是十分清楚。已經(jīng)觀察到一些人在他們顯現(xiàn)陽性癥狀之前經(jīng)歷過很多的認(rèn)知問題，而其它人則是在第一次發(fā)作和后續(xù)發(fā)作之后才發(fā)生認(rèn)知衰退。再一種認(rèn)知障礙是化療誘發(fā)的認(rèn)知缺損。進(jìn)行癌癥化療的病人可能會感受到認(rèn)知功能衰退，而且這種衰退會持續(xù)很久。還有，各種不同的損傷，包括中風(fēng)、局部出血、氧不足、炎癥、感染過程和心臟旁路手術(shù)及移植后引起的認(rèn)知缺陷、大腦局部缺血、脊髓創(chuàng)傷、頭創(chuàng)傷、產(chǎn)期低氧、胎兒酒精綜合征、心博停止、和低血糖神經(jīng)元損傷、血管性癡呆、多發(fā)性硬化性癡呆、肌萎縮性側(cè)索硬化、化療和多發(fā)性硬化都可以引起認(rèn)知缺陷，它們都可以按照本發(fā)明加以治療。
在用毒蕈堿激動劑治療的疾病按照確立和認(rèn)可的分類是已知的情況下，這些分類可見于各種來源。例如，當(dāng)前的第四版Diagnostic andStatistical Manual of Mental Disorder(DSM-IVTM)(1994，American Psychiatric Association，Washington，D.C.)提供了用于識別許多本文所述疾病的診斷工具。還有，《疾病的國際分類》(theInternational Classification of Diseases)，第十次修訂版(ICD-10)提供了對本文所述許多疾病的分類。專業(yè)技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)了解，對于本文所述疾病，還存在其它可選的命名法、疾病分類法和分類體系，包括DSM-IV和ICD-10中記載的那些，并且隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的進(jìn)步還會逐漸發(fā)展出其它命名法和分類體系。
在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了治療選自以下疾病的方法認(rèn)知疾病(包括年齡相關(guān)性認(rèn)知疾病、輕度認(rèn)知缺損、與精神分裂癥有關(guān)的認(rèn)知缺損、和化療誘發(fā)的認(rèn)知缺損)，ADHD，心境障礙(包括抑郁癥、躁狂、雙相障礙)，精神病(特別是精神分裂癥和精神分裂癥樣精神障礙)，癡呆癥(包括阿爾茨海默病、AIDS誘發(fā)的癡呆、血管性癡呆、以及缺乏區(qū)別組織學(xué)性癡呆)，帕金森病，杭廷頓氏舞蹈病，疼痛(包括急性疼痛和慢性疼痛)，口腔干燥(口干燥)，Lewy體病(包括彌散性Lewy體病)，失語癥(包括原發(fā)性失語和原發(fā)性失語綜合征)，失語癥(包括原發(fā)性失語和原發(fā)性失語綜合征)，低血壓綜合征和慢性結(jié)腸炎(包括Crohn’s病)；該方法包括對需要的患者給藥有效量的式I化合物。亦即，本發(fā)明提供了式I化合物或其藥物組合物在治療與毒蕈堿受體相關(guān)疾病方面的應(yīng)用。
一般公認(rèn)，術(shù)語“治療”包括對本文所述的每種毒蕈堿受體相關(guān)性疾病的相關(guān)癥狀學(xué)的改善。同樣還公認(rèn)的是，通過用有效量的式I化合物治療目前已患這種疾病或預(yù)防性治療據(jù)認(rèn)為易患這種疾病的患者，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠治療這些疾病。因此，術(shù)語“治療”的含義是指能夠減緩、中斷、阻止、控制、或終止本文所述疾病進(jìn)展的所有過程，但不一定顯示出所有癥狀完全消除，并且還包括對這類疾病的預(yù)防性治療。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括對本文所述疾病的輔助性治療。更具體來講，式I化合物可以與各種其它治療劑聯(lián)用來治療其中認(rèn)知缺陷為癥狀之一的疾病，這些可聯(lián)用的其它治療劑特別是AMPA增效劑；典型與非典型的抗精神病藥，包括olanzapine；各種不同的藥劑如mGLuR激動劑，NMDA拮抗劑，IL 1-6抑制劑，其它膽堿能藥，包括膽堿酯酶抑制劑，如9-氨基四氫吖啶和donepezil，以及能抑制淀粉樣蛋白加工的化合物，包括淀粉樣前體蛋白加工的抑制劑和針對淀粉樣蛋白的抗體；抗抑郁藥，包括SSRIs和SNRIs，如氟苯氧丙胺、氟苯哌苯醚和venlafaxine；以及抗焦慮劑等。據(jù)認(rèn)為，與單獨各組分產(chǎn)生相同效果需要的劑量相比，上述聯(lián)用可以在很少的劑量下產(chǎn)生增效效果。
根據(jù)上述輔助治療物，本發(fā)明還提供了包含式I化合物和一種或多種選自以下的治療劑的產(chǎn)物，這種產(chǎn)物在治療認(rèn)知缺陷是癥狀之一的疾病中用于同時、分別或相繼給藥的聯(lián)合制劑形式AMPA增效劑；典型與非典型的抗精神病藥，包括olanzapine；mGLuR激動劑；NMDA拮抗劑；IL 1-6抑制劑；膽堿酯酶抑制劑，如9-氨基四氫吖啶和donepezil；以及能抑制淀粉樣蛋白加工的化合物，包括淀粉樣前體蛋白加工的抑制劑和針對淀粉樣蛋白的抗體；抗抑郁藥，包括SSRIs和SNRIs，如氟苯氧丙胺、氟苯哌苯醚和venlafaxine；以及抗焦慮劑。在另一實施方案中，本發(fā)明也提供了式I化合物與一種或多種選自以下的治療劑一起在制備作為聯(lián)合制劑在治療認(rèn)知缺陷是癥狀之一的疾病中同時、分別或相繼給藥的藥物中的應(yīng)用AMPA增效劑；典型與非典型的抗精神病藥，包括olanzapine；mGLuR激動劑；NMDA拮抗劑；IL 1-6抑制劑；膽堿酯酶抑制劑，如9-氨基四氫吖啶和donepezil；以及能抑制淀粉樣蛋白加工的化合物，包括淀粉樣前體蛋白加工的抑制劑和針對淀粉樣蛋白的抗體；抗抑郁藥，包括SSRIs和SNRIs，如氟苯氧丙胺、氟苯哌苯醚和venlafaxine；以及抗焦慮劑。
本文使用的術(shù)語“同時、分別或相繼給藥”是指在能確保所有的治療劑在特定時刻能及時提供某些治療活性的時間范圍內(nèi)給藥兩種或更多種治療劑。也就是說，治療活性應(yīng)當(dāng)至少在某種程度上同時發(fā)生，盡管但它們不必是相接的。
本文所用的術(shù)語“患者”包括罹患一種或多種與毒蕈堿受體相關(guān)的疾病的哺乳動物。應(yīng)當(dāng)理解，豚鼠、狗、貓、大鼠、小鼠、馬、牛、羊、豬和人類為該術(shù)語意義范圍內(nèi)的動物實例。
本文使用的術(shù)語式I化物的“有效量”是指能夠有效治療本文所述疾病的劑量。
有效量很容易由作為本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員的主治醫(yī)師利用常規(guī)技術(shù)并根據(jù)在類似情況下獲得的觀察結(jié)果確定。在確定有效量即式I化合物的劑量時，主治醫(yī)師需考慮多種因素，包括但不限于要給用的式I化合物；共同給用的其它治療劑(如果使用的話)；哺乳動物的種類；其大小、年齡和一般健康狀況；所涉及的具體病癥；疾病所累及的程度或的嚴(yán)重程度；患者個體的反應(yīng)；給藥方式；給藥制劑的生物利用度特性；選擇的劑量方案；其它伴用藥物的使用情況；以及其它有關(guān)情況。
預(yù)期式I化合物的有效量可以在每日每千克體重約0.01毫克(mg/kg/日)-大約50mg/kg/日之間變化，優(yōu)選每日每千克體重0.1毫克(mg/kg/日)-大約20mg/kg/日。更優(yōu)選的量可以由本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員確定。
在上述按照本發(fā)明可以治療的疾病中，一些是特別優(yōu)選的。特別優(yōu)選的疾病包括認(rèn)知疾病(特別是輕度認(rèn)知缺損和與精神分裂癥有關(guān)的認(rèn)知缺損)，阿爾茨海默病，和精神病，包括精神分裂癥。
對于本文所述疾病，已經(jīng)建立了大量臨床前實驗動物模型。
實施例A輻射式支臂迷宮(radial arm maze)試驗在八臂輻射式迷宮實驗中使用對樣品任務(wù)的延遲非匹配性(thedelayed non-match to sample task)來研究藥物對記憶保持的影響(Pussinen，R＞和Sirvio，J.J of Psychopharm 13171-179(1999)；Staubli，U.等，Proc Natl Acad Sci 91777-781(1994))。
使受過良好訓(xùn)練的大鼠從隨機(jī)選擇的迷宮臂(取樣期)中接受食物獎勵。一段時間后，將大鼠置于八個相對開臂中，測試它們記憶和回避它們早先進(jìn)入獲得食物的臂的能力。在取樣階段(sampling session)的過程中再進(jìn)入餌誘臂視為參照錯誤(reference error)，而在保持階段(retention session)的過程中多于一次進(jìn)入同樣臂視為工作錯誤(working error)。保持階段過程中獲得的總錯誤次數(shù)(參照+工作錯誤次數(shù))隨延遲期增長而增加。例如，雄性幼鼠在1分鐘延遲時刻發(fā)生0.66(+0.4)錯誤，在1小時延遲時刻發(fā)生2(+0.5)錯誤，在7小時延遲時刻發(fā)生3.95(+0.2)錯誤(本實驗室的觀察結(jié)果)。
將雄性Sprague-Dawley鼠單獨放在籠內(nèi)，維持12小時光照-黑暗周期(早上6點開始光照)。大鼠自由飲用水，通過Puring Lab Chow給料補(bǔ)充裝置維持大鼠的重量為其自由進(jìn)食時的85％。
首先訓(xùn)練大鼠尋找位于八臂中每個臂末端的實物。一旦大鼠連續(xù)3天達(dá)到不超過兩次錯誤的標(biāo)準(zhǔn)(即在該階段多于一次進(jìn)入同一臂)，在第四和第五次臂選擇之間強(qiáng)加以1分鐘的延遲。這種訓(xùn)練能在給用任何藥物之前確保大鼠完全熟悉任務(wù)的各個程序方面。一旦對延遲任務(wù)獲得穩(wěn)定表現(xiàn)(即連續(xù)三天獲得不超過一次錯誤)，采用7小時延遲期開始藥物與載體試驗。對于每只大鼠，每天都用一套新臂進(jìn)行誘餌處理，并且在延遲期的過程中充分清洗迷宮裝置。
在取樣階段，將每只大鼠放在能夠到達(dá)迷宮所有八個被阻擋的臂的中央平臺上。隨機(jī)選擇八臂中的四個臂，用食物作為誘餌。將餌誘臂的門拉高，給大鼠5分鐘以獲得放在四臂中每一臂末端的食物。大鼠一獲得食物就將其取出，給予載體或不同劑量的化合物，然后再放回到其籠內(nèi)。7小時后(保持階段)，將大鼠放回到能到達(dá)迷宮所有八個被阻擋的臂的中央平臺上。將取樣階段已經(jīng)加以餌誘的四個臂再放入誘餌，將所有八個臂的門都升高。給大鼠5分鐘以獲得剩余的四部分食物。進(jìn)入未餌誘或再進(jìn)入早先到達(dá)過的臂視為錯誤。利用重復(fù)測量ANOVA，和其后的Dunnett檢驗測定顯著性(p＜0.05)，與對照組比較。
為了比較受試化合物與標(biāo)準(zhǔn)物，在取樣期后隨即皮下(s.c.)給藥東莨菪堿和9-氨基四氫吖啶。在三小時延遲期后測試東莨菪堿的作用(已知的記憶缺失)，而在6小時延遲期后測試9-氨基四氫吖啶(一種用于治療阿爾茨海默病的膽堿酯酶抑制劑)的作用。東莨菪堿以劑量相關(guān)方式在3小時延遲期后中斷記憶保持。9-氨基四氫吖啶在10而非3mg/kg劑量下在6小時延遲期后能顯著改善記憶保持情況。
實施例B八臂輻射式迷宮獲得性實驗阿爾茨海默病(AD)癥狀學(xué)的早期顯著特征是陳述記憶明顯缺失(R.W.Parks，R.F.Zec & R.S.Wilson(Eds)，Neuropsychology of阿爾茨海默’s disease and other dementias.NYOxford UniversityPress pp.3-80(1993)。
隨著疾病發(fā)展，認(rèn)知的其它功能域也受到嚴(yán)重影響。在Alzherimer病進(jìn)展過程中早期受影響的腦區(qū)為海馬，即陳述記憶的關(guān)鍵神經(jīng)基底。正常老化與阿爾茨海默病的海馬神經(jīng)損失方式是不同的。Lancet，344769-772(1994)。一種常用于在動物模型中評價海馬功能的行為試驗是八臂輻射式迷宮實驗(Olton D.S.行為藥理學(xué)中用作工具的輻射式支臂迷宮實驗.Physiology & Behavior，40793-797(1986))。
海馬的損傷或藥理學(xué)阻滯會中斷這種實驗的進(jìn)行。另外，老齡化動物在這種實驗中常表現(xiàn)出一些欠缺(Porsolt R.D.，Roux S.&Wettstein J.G.動物癡呆癥模型，Drug Development Research，35214-229(1995))。
在該空間學(xué)習(xí)與記憶試驗中，將饑餓大鼠放入迷宮的中央，讓小鼠在尋找放置在每個跑道臂末端的食物時穿過迷宮。在這種變型迷宮中，大鼠學(xué)習(xí)贏取改變策略(win-shift strategy)，其中到達(dá)過的臂未被替換。因此，最有效的搜尋食物的策略是到達(dá)每個臂一次。迷宮的改型也接進(jìn)總學(xué)習(xí)過程，因為大鼠在四天實驗中的第一天對迷宮是無經(jīng)驗的。
一旦達(dá)到學(xué)習(xí)目的，將雄性Sprague Dawley鼠單個置于有規(guī)律光照周期的菌落室內(nèi)，測試前至少適應(yīng)4天。將每只大鼠的體重減輕，實驗期間維持為其目標(biāo)體重的85％。根據(jù)年齡和大鼠每日體重記錄，通過調(diào)整實驗室食物的分配維持適當(dāng)體重。
試驗階段從將單個大鼠放入迷宮的中央開始，然后拉起所有的切斷門，讓小鼠自由到達(dá)迷宮的任何空間。在8跑道臂的每個支臂末端放置食料斗，在每個食料斗內(nèi)放入單粒食物丸。當(dāng)所有8個食料斗大鼠都到達(dá)過或當(dāng)大鼠超時(第1天15分鐘；第2-4天5分鐘)時，終止各個每日階段。記錄臂進(jìn)入次數(shù)。錯誤記為該階段期進(jìn)入重復(fù)臂或未能到達(dá)臂次數(shù)。如果動物在第1天未能到達(dá)至少一個臂，第2天2個臂，第3&4天至少4個臂，則從實驗中剔除此動物。
將每只大鼠非隨機(jī)性分配為載體組或藥物組，在實驗期間接受相同的處理。載體由5％在無菌水中的阿拉伯膠組成。在各個每日階段前20-30分鐘皮下注射。
在這種獲得性實驗中，與第1天犯錯誤的次數(shù)相比，載體處理動物不能始終如一地表現(xiàn)出顯著的迷宮學(xué)習(xí)獲得性。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在能促進(jìn)迷宮學(xué)習(xí)獲得性的化合物中，通常一直到訓(xùn)練的第4天才觀測到這些作用。因此，結(jié)果由全部處理組的第4天總錯誤組成。
實施例C胞內(nèi)鈣的功能性流通將表達(dá)毒蕈堿亞型(M1-M5)的CHO細(xì)胞在DMEMF-12(3∶1)，10％FBSnz，20mM HEPES，1％ pen/strp，250μg/mL G418(GibcoBRL#10131-027)中以單層生長。細(xì)胞保存在95％/5％O2/CO2中，每3-4天進(jìn)行傳代。細(xì)胞在試驗前24小時以50,000/孔的密度和試驗前48小時以25,000/孔(100μL/孔)的密度平鋪在Costar黑壁透明底部96孔板(Costar #3603)中。然后在含5％CO2的環(huán)境中于37℃用含胞質(zhì)Ca2+指示劑，F(xiàn)luo-3(1mM Fluo，與20％pluronic acid 1∶1混合，然后在生長培養(yǎng)基中稀釋到5μM終濃度，補(bǔ)加2.5M，50μL/孔)的最小必需培養(yǎng)基溫育60分鐘。細(xì)胞用100μL/孔洗滌緩沖液洗滌兩遍，其中的洗滌緩沖液含有Hanks Balanced Salt Solution(HBSS)(不含酚紅(1X)，GibcoBRL #14065-056)，20mM HEPES(Sigma #P8761)，和Probenecid(2.5mM)(100X1∶100)。對于該試驗，向各孔中加入100μL藥物(將通過FLIPR加入100μL 2X藥物)。板用LabSystems多分支頭洗滌三次，除去殘留的緩沖液。板也用紙巾吸干以除去剩余化合物。
在含2％DMSO，不含酚紅的HBSS(1X)(GibcoBRL #14065-056)，20mM HEPES(Sigma #P8761)，和Probenecid(2.5mM)(100X1∶100)的測定緩沖液中制備2X化合物(100μL藥物加到100μL存在于孔中的測定緩沖液中)。
然后將板置于FLIPR儀器內(nèi)(熒光成像板讀取系統(tǒng)，MolecularDevices，Sunnyvale，CA)，在加入化合物前后監(jiān)測細(xì)胞熒光(λEX＝488nm，λEX＝540nm)。
通過類似方式篩選其它毒蕈堿受體亞型(M2，M3，M4和M5)，評價M1激動劑的選擇性。同時也通過多種蛋白靶和結(jié)構(gòu)相關(guān)的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)靶對化合物進(jìn)行篩選，以保證對M1受體的選擇性。
實施例D功能性GTP結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)在懸浮液或單層中培養(yǎng)人M1-M5受體轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞。對于懸浮培養(yǎng)，使用補(bǔ)加有5％胎牛血清、50μg/ml妥布霉素，和20mMHEPES的Dlubecco改進(jìn)的Eagles培養(yǎng)基/F-12(3∶1)，在37℃和CO2以及恒速攪拌下，在滾瓶中培養(yǎng)細(xì)胞。單層培養(yǎng)在T-225燒瓶內(nèi)于37℃和5％CO2下生長，使用補(bǔ)加有10％胎牛血清和100,000U/升青霉素/鏈霉素的Dlubecco改進(jìn)的Eagles培養(yǎng)基。在95％鋪滿時使用無胰蛋白酶解離培養(yǎng)基收獲細(xì)胞，離心收集，80℃貯存。穩(wěn)定表達(dá)人毒蕈堿受體的細(xì)胞得自National Institutes of Health。
膜制備解凍細(xì)胞沉淀物，再懸浮于20倍體積的20mM磷酸鈉緩沖液，pH7.4中，使用Tissuemizer高速勻化30秒鐘共兩次。4℃，以200g離心勻漿物15分鐘。移出上清液，冰上貯存。重復(fù)該過程兩遍，匯集上清液，然后在4℃以40,000g離心45分鐘。以5mg蛋白/ml濃度懸浮膜制品，80℃貯存。除非在圖例說明中另有說明，M1、M2和M4細(xì)胞膜制品是由生長在懸浮液中的細(xì)胞制備，而M3和M5細(xì)胞膜制品由生長在單層中的細(xì)胞制備。受體密度(pmol mgl膜蛋白)對于M1-M5受體分別為9.3，0.7，0.6，0.9和4.8。
得自雄性Sprague-Dawley鼠的紋狀體組織在10倍體積含有Complete蛋白酶抑制劑混劑、1mM二硫蘇糖和10％蔗糖的10mM HEPES和1mM EGTA，pH7.4中用手勻漿。稀釋勻漿液6倍，4℃以1000g離心10分鐘。保存上清液，沉淀如上所述再勻漿和離心。以11,000g離心合并上清液20分鐘。將所得沉淀在40倍體積含1mM二硫蘇糖和1mM MgCl2的10mM HEPES和1mM EGTA，pH7.4中勻漿，以27,000g離心20分鐘。所得沉淀以1.5mg/ml蛋白濃度懸浮于相同緩沖液，冷凍等分液，80℃貯存。
GTPγ35S結(jié)合25℃，在96-孔Costar板中，在20mM HEPES，100mM NaCl和5mM MgCl2，pH7.4中進(jìn)行測定，總體積為200μl。加入含適當(dāng)濃度GDP的100微升膜制品(25μg蛋白/孔(細(xì)胞膜)和9-15μg/孔(腦膜))，接著加入50μl緩沖液±受試激動劑和拮抗劑，其后加入50μl GTPγ35S，試驗的終濃度對于CHO膜和腦膜分別為200pM和500pM。對于CHO膜，使用0.1μM GDP用于M1，M3和M5受體測定，而對于M2和M4測定則使用1μM的GDP。就腦膜而言，在使用anti-Gαq/11的測定中使用0.1μM GDP，而對于使用anti-Gαi(1-3)和anti-Gμo的測定則使用50μM GDP。CHO細(xì)胞膜在25℃與激動劑和拮抗劑一起培育30分鐘，然后加入GTPγ35S，另外培育30分鐘。腦膜在25℃與激動劑和拮抗劑一起培育20分鐘，接著加入GTPγ35S，另外培育60分鐘。為保證激動劑和拮抗劑在標(biāo)記期間保持平衡，采用預(yù)培育方式。
為測定總膜結(jié)合，加入50μl懸浮小麥胚凝集素(WGA)-包被的SPA微珠。15分鐘后，以1000g離心板15分鐘，用Wallac板計數(shù)器測定放射活性。為測定與特異性G蛋白的結(jié)合，用0.27％Nonidet P-40(20μl/孔溶液，含1.5ml 10％Nonidet P-40，對于每批3.5ml測定緩沖液)增溶35S-標(biāo)記膜30分鐘，然后加入需要抗體(10μl/孔)，得到1/400-1/1000的最終稀釋倍數(shù)，并進(jìn)一步培育60分鐘。每孔加入50微升懸浮anti-lgG-包被SPA微珠，培育板3小時，然后如上所述離心并測定放射活性。將每瓶WGA包被的SPA微珠懸浮在10ml測定緩沖液中，將每瓶anti-lgG包被的SPA微珠懸浮在20ml測定緩沖液中。使用二金雞鈉酸(bicinchoninic acid)試驗測定蛋白。
材料35S-GTPγS(1000-2000Ci/mmol)，抗兔-IgG和抗小鼠-IgG包被的SPA微珠，和WGA包被的SPA微珠購自Amersham(ArlingtonHeights，IL)。兔anti-Gαq/11和兔anti-Gαi(1-3)購自Santa CruzBiotechnologies(Santa Cruz，CA)。小鼠單克隆anti-Gαo購自Chemicon(Temecula，CA)。氧化震顫素M和哌嗪二氮得自ResearchBiochemicals Inc.(Natick，MA)。11-{[2-((二乙基氨基)甲基)-1-哌啶基]乙?；鵠}-5，11-二氫-6H-吡啶并[2，3b][1，4]苯并二氮雜-6-酮(AFDX 116)由Eli Lilly合成。競爭蛋白酶抑制劑合劑和10％Nonidet P-40得自Boehringer Mannheim(Indianapolis，IN)。
M1激動劑的選擇性通過篩選其它毒蕈堿受體亞型(M2，M3，M4和M5)進(jìn)行評價。同樣也通過多種蛋白靶和結(jié)構(gòu)相關(guān)的G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)靶對化合物進(jìn)行篩選，以保證對M1受體的選擇性。
權(quán)利要求
1.下式化合物或其可藥用鹽 其中Q，X，Y，和Z獨立地選自CR1和N，條件是Q、X、Y、和Z中至多兩個是N，且Q、X、Y和Z中至少兩個為CH；或者Y為CH，Z為CH，而“Q＝X”部分表示“S”以形成噻吩環(huán)；R1在每次出現(xiàn)時獨立選自氫，鹵素，C1-C4烷氧基和C1-C4烷基；R2選自鹵素；C1-C4烷氧基；C1-C4烷基；C3-C8環(huán)烷基；氰基；三氟甲基；任選被一個或兩個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的吡啶基；任選被一個選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的噻吩基；任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基和氰基的取代基取代的苯基；以及任選被一個或兩個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的吡咯基；R3選自任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代的苯基；任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代的萘基；任選被一個或兩個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的雜芳基；或任選被一個選自鹵素、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的取代基取代的1，3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基；R4選自氫，羥基和氟；R5選自氫，鹵素，C1-C4烷氧基，和C1-C4烷基；Ra選自氫和甲基；t為1，2，或3；和m為1或2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Ra為甲基，R5為氫，R4為羥基，t為1，m為1，并且如下所示在1-和2-位具反式立體化學(xué)
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項的化合物，其中Q，X，Y和Z各自為CH。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任一項的化合物，其中Q、X、Y和Z中一個為CF，其余的為CH。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中Q為CF，且X、Y、和Z各自為CH。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項的化合物，其中R2為任選被1-3個獨立選自鹵素、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、三氟甲基和氰基的取代基取代的苯基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中R2為苯基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項的化合物，其中R3為被一個選自鹵素、三氟甲基、氰基和硝基的取代基取代的苯基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中R3為被鹵素單取代的苯基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中R3為被氟單取代的苯基。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R3為被氟在對位上單取代的苯基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其為聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其為3-氟聯(lián)苯-4-羧酸(R)-(6-(1-((4-氟芐基)甲基氨基)亞乙基氨基)-2(R)-羥基-2，3-二氫化茚-1-基)酰胺。
14.一種藥物組合物，其包括權(quán)利要求1的化合物和可藥用的稀釋劑。
15.一種治療與毒蕈堿受體有關(guān)的疾病的方法，包括對需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
16.一種治療認(rèn)知疾病的方法，包括對需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
17.一種治療阿爾茨海默病的方法，包括對需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
18.一種治療精神分裂癥的方法，包括對需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
19.一種治療輕度認(rèn)知缺損的方法，包括對需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
20.一種治療與精神分裂癥相關(guān)的認(rèn)知缺損的方法，包括對需要的患者給藥有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I化合物。這些式I化合物為M－1毒蕈堿受體的激動劑。
文檔編號C07D207/32GK1556788SQ02818550
公開日2004年12月22日 申請日期2002年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月21日
發(fā)明者J·R·阿倫, S·A·希奇科克, 劉斌, W·W·小圖爾納, J·A·亞米森, J R 阿倫, 亞米森, 小圖爾納, 希奇科克 申請人:伊萊利利公司