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一種去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法與流程

文檔序號:11838192閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于包括以下步驟:

菌種活化和發(fā)酵培養(yǎng):將菌株進(jìn)行活化培養(yǎng),然后進(jìn)行放大誘導(dǎo)發(fā)酵培養(yǎng),收集發(fā)酵液中的菌體細(xì)胞,利用超聲破碎法獲得表達(dá)出的包涵體;

包涵體變復(fù)性:向包涵體中加入變性液進(jìn)行變性,離心收集變性完全的變性蛋白溶液,然后將收集到的變性蛋白溶液加入復(fù)性液中進(jìn)行復(fù)性;

硫酸銨沉淀:復(fù)性結(jié)束后,向復(fù)性液中添加硫酸銨固體,然后將復(fù)性液離心,收集上清液,得到去除多聚體后的復(fù)性蛋白溶液;

蛋白精制:根據(jù)工藝要求,進(jìn)行純化工藝,最終獲得目的蛋白制品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟包涵體變復(fù)性中先使用lysis buffer對包涵體進(jìn)行清洗,然后向清洗后的包涵體中加入預(yù)冷到2℃~8℃的變性液進(jìn)行變性。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟包涵體變復(fù)性中將離心收集到的變性蛋白溶液逐滴加入預(yù)冷到7℃~12℃的復(fù)性液中進(jìn)行蛋白復(fù)性,復(fù)性液在7℃~12℃條件下低溫復(fù)性14~18小時(shí)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟包涵體變復(fù)性中離心收集到的變性蛋白溶液與復(fù)性液的體積比為1:100。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于步驟包涵體變復(fù)性中所述復(fù)性液的組份包括:1.4mM GSH、1mM EDTA、0.5M 精氨酸、0.5M 尿素。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述復(fù)性液的pH值為8.5。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟硫酸銨沉淀中復(fù)性結(jié)束后,在250~300rpm的攪拌速度下,向復(fù)性液中緩慢添加烘干并研磨成粉的硫酸銨固體,待硫酸銨固體完全溶解后繼續(xù)攪拌10~30分鐘,在2℃~8℃條件下靜置12~18小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟硫酸銨沉淀中將復(fù)性液在10000~12000rpm、2℃~8℃條件下離心30~45分鐘。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟硫酸銨沉淀中添加硫酸銨固體至硫酸銨達(dá)到15%~45%飽和度。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的去除因原核包涵體表達(dá)變復(fù)性產(chǎn)生的多聚體的方法,其特征在于所述步驟硫酸銨沉淀中添加硫酸銨固體至硫酸銨達(dá)到30%飽和度。

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