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一個(gè)新的植物耐鹽基因ZmDUF1644及其表達(dá)載體和應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12411947閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.溝葉結(jié)縷草耐鹽基因ZmDUF1644,其特征在于該基因的序列為SEQ ID NO. 1。

2.含有權(quán)利要求1所述的溝葉結(jié)縷草耐鹽基因ZmDUF1644的植物表達(dá)載體,其特征在于由權(quán)利要求1所述的溝葉結(jié)縷草耐鹽基因ZmDUF1644與植物表達(dá)載體構(gòu)成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含有權(quán)利要求1所述的溝葉結(jié)縷草耐鹽基因ZmDUF1644的植物表達(dá)載體,其特征在于所述的植物表達(dá)載體為BamHⅠ和Not I雙酶切ZmDUF1644后插入到gateway入門載體pENTR1A,經(jīng)線性化后與pEarleyGate103表達(dá)載體質(zhì)粒進(jìn)行重組反應(yīng)得到。

4.權(quán)利要求3所述的溝含有權(quán)利要求1所述的溝葉結(jié)縷草耐鹽基因ZmDUF1644的植物表達(dá)載體的構(gòu)建方法,其特征在于包括如下步驟:

(1)ZmDUF1644基因全長(zhǎng)編碼區(qū)的獲得:設(shè)計(jì)引物ZmDUF1644-F: SEQ ID NO.2和ZmDUF1644-R: SEQ ID NO.3,以溝葉結(jié)縷草cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng),PCR產(chǎn)物連接到pMD19-T Simple載體,轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)細(xì)胞,提取陽(yáng)性質(zhì)粒并測(cè)序獲得ZmDUF1644全長(zhǎng)序列SEQ ID NO. 1;

(2)pENTR1A-ZmDUF1644質(zhì)粒構(gòu)建:設(shè)計(jì)引物ZmDUF1644-BamH???: C:\Program Files (x86)\gwssi\CPC?????\cases\inventions\fdf392d8-1e94-45b8-8e81-c635a73b7ec8\new\100001\dest_path_image002.jpg-F: SEQ ID NO.4和ZmDUF1644-Not I-R: SEQ ID NO.5,PCR擴(kuò)增獲得在上游和下游分別引入BamH???: C:\Program Files (x86)\gwssi\CPC?????\cases\inventions\fdf392d8-1e94-45b8-8e81-c635a73b7ec8\new\100001\256377dest_path_image002.jpgNot I酶切位點(diǎn)的ZmDUF1644基因,PCR產(chǎn)物連接到pMD19-T Simple載體,轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)細(xì)胞,提取陽(yáng)性質(zhì)粒pMD19-T Simple-ZmDUF1644; BamH???: C:\Program Files (x86)\gwssi\CPC?????\cases\inventions\fdf392d8-1e94-45b8-8e81-c635a73b7ec8\new\100001\435685dest_path_image002.jpgNot I分別對(duì)陽(yáng)性質(zhì)粒pMD19-T Simple-ZmDUF1644和pENTR1A進(jìn)行雙酶切,取酶切后的ZmDUF1644片段與BamH???: C:\Program Files (x86)\gwssi\CPC?????\cases\inventions\fdf392d8-1e94-45b8-8e81-c635a73b7ec8\new\100001\710809dest_path_image002.jpg和Not I雙酶切的pENTR1A連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)細(xì)胞;37 ℃過夜培養(yǎng),挑取陽(yáng)性單克隆擴(kuò)大培養(yǎng),提取質(zhì)粒pENTR1A-ZmDUF1644;

(3)提取的陽(yáng)性質(zhì)粒pENTR1A-ZmDUF1644經(jīng)PvuI單酶切線性化后與pEarleyGate103載體質(zhì)粒進(jìn)行LR重組反應(yīng),轉(zhuǎn)化,提取陽(yáng)性質(zhì)粒,電泳檢測(cè)并測(cè)序驗(yàn)證為SEQ ID NO. 1,植物表達(dá)載體pEarleyGate103-ZmDUF1644構(gòu)建成功。

5.權(quán)利要求1所述的溝葉結(jié)縷草耐鹽基因ZmDUF1644在創(chuàng)建耐鹽新種質(zhì)中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求2所述的植物表達(dá)載體在創(chuàng)建耐鹽新種質(zhì)中的應(yīng)用。

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