一種具抗腫瘤活性的巖白菜素氮雜肉桂酸酯類化合物及其合成方法與流程

本發(fā)明涉及一種具抗腫瘤活性的巖白菜素氮雜肉桂酸酯類化合物及其合成方法，屬于醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

腫瘤已嚴(yán)重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標(biāo)。隨著藥物化學(xué)的發(fā)展，尋找高效低毒的天然抗腫瘤化合物或進行結(jié)構(gòu)改造合成其衍生物成為當(dāng)前抗腫瘤藥物研究中的一個重要趨勢。

巖白菜素（bergenin）是虎耳草科植物的主要活性成分，是一種二氫異香豆素類化合物，其結(jié)構(gòu)中包含兩個酚羥基和三個羥基，因此易被修飾，有研究報道，巖白菜素衍生物能夠誘導(dǎo)細胞周期阻滯，促進細胞凋亡，有明顯的抗腫瘤作用，其結(jié)構(gòu)如下所示，

近年來，對于抗腫瘤活性的巖白菜素衍生物，藥物化學(xué)家和生物學(xué)家進行了大量的研究，合成篩選出各種不同基團修飾的有抗腫瘤活性的巖白菜素衍生物，為進一步開發(fā)有效低毒的抗腫瘤藥物打下了堅實基礎(chǔ)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具抗腫瘤活性的巖白菜素氮雜肉桂酸酯類化合物及其合成方法。

本發(fā)明的實現(xiàn)過程如下：

結(jié)構(gòu)通式（I）所示的化合物，

其中，X₁、X₂和X₃任意之一為N，其余二者為C，R₁、R₂和R₃選自為氫，C1-C4的烷基。

結(jié)構(gòu)通式（I）所示化合物的合成方法，其特征在于：以巖白菜素、氮雜肉桂酸及其衍生物為原料，在有機溶劑中進行合成。

具體包含如下步驟：

（1）向反應(yīng)器中加入巖白菜素和芐基溴，加入碳酸鉀和二甲基甲酰胺，室溫攪拌；

（2）反應(yīng)完全后，加入氮雜肉桂酸或其衍生物，加有機溶劑混合均勻，加二甲氨基吡啶的吡啶溶液， 50℃~90℃回流反應(yīng)；

（3）向步驟（2）所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫攪拌；

（4）將步驟（3）反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

步驟（1）中所述的巖白菜素與芐基溴的摩爾比為1:2~1:2.5；步驟（2）中所述的巖白菜素與氮雜肉桂酸或其衍生物的摩爾比為1:1~1:2。

步驟（1）中所述的巖白菜素與芐基溴的摩爾比優(yōu)選為1:2~1:2.3。

步驟（2）中所述的巖白菜素與氮雜肉桂酸或其衍生物的摩爾比優(yōu)選為1:1.2~1:1.5。

步驟（2）中所述的有機溶劑為乙腈或DMF；反應(yīng)溫度優(yōu)選為60℃~80℃。

所述的化合物在治療人前列腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、肝癌中的應(yīng)用。

所述的BnBr為芐基溴；DMF為二甲基甲酰胺；DMAP為4-二甲氨基吡啶；CH₃CN為乙腈；Pd/C為在碳上負載鈀后得到的復(fù)合材料；

本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，可實現(xiàn)反應(yīng)原料的充分利用，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，所得產(chǎn)物抗腫瘤活性高。

具體實施方式：

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述。這些實施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發(fā)明的范圍和實質(zhì)。

一種具抗腫瘤活性的巖白菜素氮雜肉桂酸酯類化合物的合成方法具體包含如下步驟：

（1）向反應(yīng)器中加入巖白菜素和芐基溴，加入碳酸鉀和二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌；

（2）反應(yīng)完全后，加入氮雜肉桂酸或其衍生物，加乙腈或DMF混合均勻，其中溶劑體積小于反應(yīng)器容積的2/3，加二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到50℃~90℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)；

（3）反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；

（4）向步驟（2）所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌；

（5）將步驟（4）反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。

本發(fā)明部分優(yōu)選實施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：

實施例1

11-O-4-氮雜肉桂醛巖白菜素（1）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加4-氮雜肉桂酸1.94g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（2.36克），總收率51.4%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

白色結(jié)晶粉末，M.P.182-184 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ: 9.82 (1H, s), 8.57 (1H, s), 8.52 (2H, d, J=6.8 Hz), 7.49 (2H, d, J=8.5 Hz), 7.46 (1H, d, J=10.4 Hz), 6.98 (1H, s), 6.62 (1H, d, J=9.2 Hz), 5.49 (1H, d, J=10.6 Hz), 4.52 (1 H, m), 4.45 (1H, d, J=15.7 Hz), 4.12-4.24 (1H, m), 3.96-4.08 (1H, m), 4.02 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.43 (1H, dd, J=11.2, 11.2 Hz);¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 149.7,149.1, 146.7, 145.9, 144.7, 125.9, 123.2, 122.9, 117.9, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9; HRMS (ESI) calcd. for C₂₂H₂₁NO₁₀ [M + H]⁺, 459.4028; found, 450.4031。

實施例2

11-O-3-氮雜肉桂醛巖白菜素（2）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-氮雜肉桂酸1.94g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到60℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.58克），總收率34.8%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（2）

白色結(jié)晶粉末，M.P.201-203 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ:9.78 (1H, s),9.24 (1H, s),8.63 (1H, d, J=6.2 Hz), 8.47 (1H,d, J=8.9 Hz),7.95 (2H, t), 7.81 (1H, d, J=11.2 Hz), 6.98 (1H, s), 6.32 (1H, d, J=9.6 Hz), 5.49 (1H, d, J=11.0 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.42 (1H, d, J=13.8 Hz), 4.16-4.25 (1H, m), 3.98-4.09 (1H, m), 4.04 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.45 (1H, dd, J=10.8, 10.8 Hz); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 149.7, 149.0, 148.2, 146.7, 145.9, 140.3, 132.7, 129.8,125.9, 124.0, 122.4, 117.9, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9; HRMS (ESI) calcd. forC₂₂H₂₁NO₁₀ [M + H]⁺, 459.4028; found, 450.4033。

實施例3

11-O-2-氮雜肉桂醛巖白菜素（3）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加2-氮雜肉桂酸1.94g(13mmol)，加50mL DMF作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到80℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.92克），總收率42.1%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（3）

白色結(jié)晶粉末，M.P.>250 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ:9.82 (1H, s), 8.63 (1H, d, J=7.0 Hz), 8.47 (1H,d, J=9.4 Hz),7.86 (1H, d, J=11.8 Hz), 7.29-7.42 (3 H, m), 6.98 (1H, s), 6.90 (1H, d, J=10.4 Hz), 5.49 (1H, d, J=11.8 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.42 (1H, d, J=14.2 Hz), 4.16-4.25 (1H, m), 3.96-4.07 (1H, m), 4.01 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.47 (1H, dd, J=12.5, 12.5 Hz); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 154.8, 149.0, 148.9, 146.7, 145.9, 139.5, 137.2,125.9, 124.5, 122.9, 117.9, 116.2, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9; HRMS (ESI) calcd. forC₂₂H₂₁NO₁₀ [M + H]⁺, 459.4028; found, 450.4033。

實施例4

11-O-3-(3-吡啶基)-3-甲基丙烯醛巖白菜素（4）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3-吡啶基)-3-甲基丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到90℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.35克），總收率28.5%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（4）

白色結(jié)晶粉末，M.P.179-181 °C. ¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.83 (1H, s), 8.89 (1H, s), 8.44 (1H, s), 8.63 (1H, d, J=6.9 Hz), 8.21 (1H,d, J=7.2 Hz),7.69 (1H, t), 6.98 (1H, s), 6.13 (1H, s), 5.48 (1H, d, J=10.6 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.42 (1H, d, J=12.6 Hz), 4.16-4.27 (1H, m), 3.98-4.09 (1H, m), 4.04 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.42 (1H, dd, J=11.8, 11.8 Hz),2.45 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 155.6, 153.1, 149.7, 149.0, 146.7, 145.9, 133.9, 125.9, 124.0, 122.4, 121.9, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9,13.6; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4298。

實施例5

11-O-3-(5-甲基-3-吡啶基)丙烯醛巖白菜素（5）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(5-甲基-3-吡啶基)丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mL DMF作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到50℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.71克），總收率36.2%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（5）

白色結(jié)晶粉末，M.P.155-157 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.91 (1H, s), 9.25 (1 H, s), 8.68 (1H, s), 8.59 (1H, s), 8.22 (1H, s), 7.82 (1 H, d, J=9.4 Hz), 6.97 (1 H, s), 6.32 (1H, d, J=10.6 Hz), 5.48 (1H, d, J=12.2), 4.54 (1H, m), 4.27-4.41 (1 H, m), 4.25 (1H, m),3.91-4.00 (1H, m), 3.84 (3 H, s), 3.56 (2H, s), 3.42 (1H, dd, J=12.4, 12.4 Hz), 2.33 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 151.4, 150.2, 149.2, 146.7, 145.9, 140.3, 133.9, 133.0, 129.2, 125.9, 122.4 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 61.0, 18.5; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4299。

實施例6

11-O-3-(6-甲基-3-吡啶基)丙烯醛巖白菜素（6）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(6-甲基-3-吡啶基)丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.20克），總收率25.4%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（6）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 201-203 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.86 (1H, s), 8.90 (1 H, s), 8.59 (1H, s), 8.30 (1H, d, J=9.8 Hz),7.82 (1 H, d, J=10.2 Hz), 7.36 (1H, d, J=8.6 Hz), 6.97 (1 H, s), 6.32 (1H, d, J=10.8 Hz), 5.48 (1H, d, J=10.2), 4.54 (1H, m), 4.27-4.41 (1 H, m), 4.26 (1H, m),3.94-4.05 (1H, m), 4.04 (1H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.43 (1H, dd, J=11.8, 11.8 Hz), 2.53 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.7, 166.4, 150.2, 149.2, 146.7, 145.9, 145.3, 137.9, 133.3, 126.9, 125.9, 122.4 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 61.0, 19.3; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4296。

實施例7

11-O-3-(4-甲基-3-吡啶基)丙烯醛巖白菜素（7）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(4-甲基-3-吡啶基)丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mLDMF作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.50克），總收率31.6%。結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（7）

白色粉末，M.P. 210-212 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.74 (1H, s), 8.75 (1 H, s), 8.68 (1H, s), 8.12 (1H, d, J=8.8 Hz),7.82 (1 H, d, J=11.2 Hz), 7.53 (1H, d, J=12.6 Hz), 6.97 (1 H, s), 6.32 (1H, d, J=6.4 Hz), 5.48 (1H, d, J=10.2), 4.54 (1H, m), 4.27-4.41 (1 H, m), 4.26 (1H, m),3.94-4.05 (1H, m), 4.04 (1H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.43 (1H, dd, J=11.4, 11.4 Hz), 2.55 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.7, 166.4, 160.9, 149.8, 149.1, 146.7, 145.9, 140.3, 133.1, 128.8, 125.9, 124.3, 122.4 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 23.9; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4298。

實施例8

11-O-3-(5-乙基-3-吡啶基)丙烯醛巖白菜素（8）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(5-乙基-3-吡啶基)丙烯酸2.30g(13mmol)，加50mLDMF作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.99克），總收率40.9%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（8）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 197-199 °C. ¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.88 (1H, s), 9.24 (1 H, s), 8.63 (1H, s), 8.59 (1H, s), 8.22 (1H, s), 7.82 (1 H, d, J=11.0 Hz), 6.97 (1 H, s), 6.32 (1H, d, J=10.8 Hz), 5.48 (1H, d, J=10.2), 4.54 (1H, m), 4.27-4.41 (1 H, m), 4.25 (1H, m),3.91-4.02 (1H, m), 3.89-3.96 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.56 (2H, s), 3.42 (1H, dd, J=12.8, 12.8 Hz), 2.74 (2 H, q), 1.27 (3 H, t); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 150.9, 149.7, 149.1, 146.7, 145.9, 140.3, 139.6, 133.3, 129.5, 125.9, 122.4 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 61.0, 26.5, 14.7; HRMS (ESI) calcd. for C₂₄H₂₅NO₁₀ [M + H]⁺, 487.4560; found, 487.4564。

實施例9

11-O-3-(4-吡啶基)-3-甲基丙烯醛巖白菜素（9）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(4-吡啶基)-3-甲基丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mLDMF作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.06克），總收率22.5%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（9）

白色結(jié)晶粉末，M.P.186-188 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.73 (1H, s), 8.61 (1H, s), 8.55 (2H, d, J=8.3 Hz), 7.48 (2H, d, J=9.6 Hz), 6.97 (1 H, s),6.43 (1 H, s), 5.48 (1H, d, J=10.6), 4.54 (1H, m), 4.27-4.42 (1 H, m), 4.27 (1H, m),3.91-4.04 (1H, m), 3.89-3.98 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.56 (2H, s), 3.42 (1H, dd, J=12.8, 12.8 Hz), 2.43 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 155.3, 149.7, 149.1, 146.7, 145.9, 144.5, 125.9, 123.0, 120.8, 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 18.3; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4299。

實施例10

11-O-3-(4-吡啶基)-2-甲基丙烯醛巖白菜素（10）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(4-吡啶基)-2-甲基丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mLDMF作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.63克），總收率34.4%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（10）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 145-147 °C °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.82 (1H, s), 8.69 (1H, s), 8.55 (2 H, d, J=6.9 Hz), 7.60 (1 H, s), 7.48 (2 H, d, J=7.6 Hz), 6.97 (1 H, s),5.48 (1H, d, J=10.8), 4.54 (1H, m), 4.29-4.44 (1 H, m), 4.28 (1H, m),3.93-4.06 (1H, m), 3.92-3.99 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.44 (1H, dd, J=11.8, 11.8 Hz), 2.13 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 168.8, 166.4, 149.7, 149.1, 146.7, 145.9, 144.6, 139.3, 133.7, 125.9, 123.0, 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 11.5; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4301。

實施例11

11-O-3-(3-甲基-4-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（11）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3-甲基-4-吡啶基)-丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（2.08克），總收率43.9%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（11）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 156-158 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.86 (1H, s), 8.71 (1H, s), 8.62(1 H, d, J=6.8 Hz), 7.48 (1H, d, J=8.6 Hz), 7.41 (1 H, s), 7.05 (1 H, d, J=6.7 Hz), 6.97 (1 H, s),6.62 (1 H, d, J=8.8 Hz), 5.48 (1H, d, J=11.2), 4.55 (1H, m), 4.29-4.43 (1 H, m), 4.26 (1H, m),3.93-4.04 (1H, m), 3.90-3.99 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.44 (1H, dd, J=11.8, 11.8 Hz), 2.54 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 161.5, 149.1, 146.7, 145.9, 144.5, 125.9, 123.0, 119.0, 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 24.4; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4296。

實施例12

11-O-3-(3-乙基-4-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（12）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3-乙基-4-吡啶基)-丙烯酸2.30g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.59克），總收率32.6%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（12）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 214-216 °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.78 (1H, s),8.57(1 H, d, J=6.4 Hz), 8.35 (1H, s), 7.48 (1 H, d, J=8.9 Hz), 7.43 (1 H, s), 7.05 (1 H, d, J=7.8 Hz), 6.97 (1 H, s),6.62 (1 H, d, J=8.8 Hz), 5.48 (1H, d, J=11.2), 4.55 (1H, m), 4.29-4.44 (1 H, m), 4.27 (1H, m),3.93-4.06 (1H, m), 3.90-3.97 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.45 (1H, dd, J=12.3, 12.3 Hz), 3.42 (2 H, q), 1.26 (3 H, t); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 160.3, 149.1, 148.7, 146.6, 145.9, 144.9, 142.5, 125.9, 123.0, 119.0, 117.6, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 30.9, 13.2; HRMS (ESI) calcd. for C₂₄H₂₅NO₁₀ [M + H]⁺, 487.4560; found, 487.4564。

實施例13

11-O-3-(3,5-二甲基-4-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（13）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3,5-二甲基-4-吡啶基)-丙烯酸2.30g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.30克），總收率26.7%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（13）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 187-189 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.72 (1H, s), 8.15(1 H, s),7.48 (1 H, d, J=8.9 Hz), 7.25 (2H, s), 6.97 (1 H, s),6.62 (1 H, d, J=9.8 Hz), 5.48 (1H, d, J=10.6), 4.55 (1H, m), 4.29-4.45 (1 H, m), 4.27 (1H, m),3.92-4.02 (1H, m), 3.90-3.96 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.45 (1H, dd, J=12.6, 12.6 Hz), 2.56 (6 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 158.1, 149.1, 146.6, 145.9, 144.9, 142.5, 125.9, 123.0, 117.8, 115.8, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 20.6; HRMS (ESI) calcd. for C₂₄H₂₅NO₁₀ [M + H]⁺, 487.4560; found, 487.4565。

實施例14

11-O-3-(5-甲基-2-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（14）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(5-甲基-2-吡啶基)-丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.56克），總收率32.9%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（14）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 202-204 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.86 (1H, s), 8.56 (1H, s), 8.47 (1H, d, J=7.4 Hz), 7.86 (1H, d, J=12.1 Hz), 7.33-7.39 (2 H, m), 6.98 (1H, s), 6.90 (1H, d, J=10.6 Hz), 5.49 (1H, d, J=11.6 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.42 (1H, d, J=13.2 Hz), 4.16-4.25 (1H, m), 3.96-4.07 (1H, m), 4.01 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.47 (1H, dd, J=13.6, 13.6 Hz), 2.37 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 166.4, 155.3, 149.1, 148.5, 147.2, 146.7, 145.9, 139.5, 137.2, 125.9, 117.9, 116.2, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9, 21.8; HRMS (ESI) calcd. forC₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4298。

實施例15

11-O-3-(5-乙基-2-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（15）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(5-乙基-2-吡啶基)-丙烯酸2.30g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（2.51克），總收率41.5%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（15）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 213-215 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.88 (1H, s), 8.42 (1H, s), 8.47 (1H, d, J=8.7 Hz), 7.86 (1H, d, J=12.6 Hz), 7.33-7.40 (2 H, m), 6.98 (1H, s), 6.93 (1H, d, J=10.8 Hz), 5.49 (1H, d, J=12.6 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.43 (1H, d, J=13.2 Hz), 4.16-4.25 (1H, m), 3.96-4.05 (1H, m), 4.01 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.47 (1H, dd, J=13.6, 13.6 Hz), 2.62 (2 H, q), 1.26 (3 H, t); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 166.4, 155.3, 154.7, 149.2, 146.7, 145.9, 146.5, 139.6, 125.9, 124.6, 122.6, 117.8, 116.2, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9, 28.8, 14.6; HRMS (ESI) calcd. forC₂₄H₂₅NO₁₀ [M + H]⁺, 487.4560; found, 487.4565。

實施例16

11-O-3-(3,5-二甲基-2-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（16）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3,5-二甲基-2-吡啶基)-丙烯酸2.30g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.14克），總收率23.3%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（16）

白色結(jié)晶粉末，M.P.193-195 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.67 (1H, s), 8.36 (1H, s), 7.86 (1H, d, J=11.8 Hz), 7.23-7.29 (2 H, m), 6.98 (1H, s), 6.93 (1H, d, J=10.6 Hz), 5.49 (1H, d, J=11.9 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.43 (1H, d, J=12.8 Hz), 4.17-4.26 (1H, m), 3.96-4.04 (1 H, m), 4.01 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.47 (1H, dd, J=13.6, 13.6 Hz), 2.54 (3 H, s), 2.38 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 166.4, 158.4, 154.9, 149.2, 146.7, 145.9, 139.5, 125.9, 123.7, 122.6, 117.8, 116.2, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9, 22.1, 20.6; HRMS (ESI) calcd. forC₂₄H₂₅NO₁₀ [M + H]⁺, 487.4560; found, 487.4569。

實施例17

11-O-3-(5-異丙基-2-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（17）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(5-異丙基-2-吡啶基)-丙烯酸2.49g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.07克），總收率21.4%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（17）

白色結(jié)晶粉末，M.P.182-184 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.84 (1H, s), 8.53 (1H, s), 8.47 (1 H, d, J=9.7 Hz), 7.86 (1H, d, J=12.9 Hz), 7.34-7.40 (2 H, m), 6.98 (1H, s), 6.92 (1H, d, J=11.2 Hz), 5.49 (1H, d, J=12.7 Hz), 4.54 (1 H, m), 4.43 (1H, d, J=12.5 Hz), 4.18-4.27 (1H, m), 3.96-4.05 (1 H, m), 4.03 (1H, m), 3.85 (3H, s), 3.59 (2 H, s), 3.47 (1H, dd, J=13.8, 13.8 Hz), 2.88 (1 H, q), 1.23 (6 H, d); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d6) δ: 166.6, 166.4, 155.3, 154.7, 149.2, 146.7, 145.9, 146.5, 139.6, 125.9, 124.6, 122.6, 117.8, 116.2, 109.0, 81.4, 79.7, 75.3, 74.5, 72.1, 63.4, 60.9, 28.8, 14.6; HRMS (ESI) calcd. forC₂₅H₂₇NO₁₀ [M + H]⁺, 501.4826; found, 501.4829。

實施例18

11-O-3-(3-甲基-2-吡啶基)-2-甲基丙烯醛巖白菜素（18）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3-甲基-2-吡啶基)-2-甲基丙烯酸2.30g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.78克），總收率36.5%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（18）

白色結(jié)晶粉末，M.P. 136-138 °C °C.¹H-NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ: 9.69 (1H, s), 8.33 (1H, s), 7.52-7.58 (3H, m), 7.28 (1 H, d, J=9.6 Hz),6.97 (1 H, s),5.48 (1H, d, J=10.3), 4.54 (1H, m), 4.29-4.44 (1 H, m), 4.28 (1H, m),3.93-4.06 (1H, m), 3.92-3.98 (1 H, m), 3.85 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.42 (1H, dd, J=12.5, 12.5 Hz), 2.54 (3 H, s), 2.13 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 168.8, 166.4, 157.9, 154.4,149.1,146.6, 145.9, 137.3, 132.5, 125.9, 123.0, 122.4, 117.9, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 24.5, 14.2; HRMS (ESI) calcd. forC₂₄H₂₅NO₁₀ [M + H]⁺, 487.4560; found, 487.4564。

實施例19

11-O-3-(3-甲基-2-吡啶基)-丙烯醛巖白菜素（19）的制備。

向反應(yīng)器中加入巖白菜素3.28g(10mmol)和芐基溴3.93g(23mmol)，加適量2.07g(15mmol)碳酸鉀和50mL二甲基甲酰胺，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。反應(yīng)完全后加3-(3-甲基-2-吡啶基)-丙烯酸2.12g(13mmol)，加50mL乙腈作反應(yīng)溶劑，加適量二甲氨基吡啶的吡啶溶液，加熱到70℃，在攪拌條件下回流反應(yīng)。反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時監(jiān)測反應(yīng)的進行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置。向上述所得的反應(yīng)體系中加入二氯甲烷、Pd/C，通入氫氣，室溫下攪拌。將上述反應(yīng)體系的混合物經(jīng)減壓濃縮后，過濾，柱層析分離提純，干燥得到白色結(jié)晶粉末（1.97克），總收率41.6%。目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及其表征如下：

（19）

白色結(jié)晶粉末，M.P.227-229 °C.¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.74 (1H, s), 8.25(1 H, s),7.86 (1 H, d, J=6.9 Hz), 7.51-7.55 (2 H, m), 7.28 (1H, d,J=8.4 Hz), 6.97 (1 H, s),6.62 (1 H, d, J=9.1 Hz), 5.48 (1H, d, J=10.6), 4.55 (1H, m), 4.29-4.45 (1 H, m), 4.27 (1H, m),3.92-4.02 (1H, m), 3.90-3.96 (1 H, m), 3.84 (3 H, s), 3.58 (2H, s), 3.45 (1H, dd, J=13.6, 13.6 Hz), 2.55 (3 H, s); ¹³C-NMR (100MHz, DMSO-d₆) δ: 166.6, 166.4, 158.0, 154.4, 149.1, 146.6, 145.9, 139.5, 137.4, 125.9, 123.0, 121.4, 117.8, 116.2, 109.2, 81.4, 79.6, 75.3, 74.6, 72.0, 63.4, 60.9, 24.5; HRMS (ESI) calcd. for C₂₃H₂₃NO₁₀ [M + H]⁺, 473.4294; found, 473.4299。

實施例20

本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測試

對本發(fā)明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法采用常規(guī)的MTT法。

細胞株選用：人前列腺癌(PC-3)，人胃腺癌細胞(SGC-7901)，人肺癌細胞(A-549)。培養(yǎng)液為DMEM+15%NBS+雙抗。

樣品液的配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成的100 μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然后用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100 μmol/L。

將抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)以同樣的條件配成對照品溶液。

細胞培養(yǎng)：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養(yǎng)于含10% 滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素（各100萬U/L）的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5% CO₂，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞貼壁生長，每2～3 天傳代1 次，傳代時首先倒出培養(yǎng)液，PBS洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對數(shù)生長期細胞用于實驗。

MTT法檢測細胞活性及IC₅₀的測定：

實驗原理：活細胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶于水的藍紫色產(chǎn)物甲臜 (MTT formazan)，并沉積在細胞中，生成的量與活細胞數(shù)目成正比，而死細胞沒有這種功能。DMSO能溶解藍紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標(biāo)儀測定的光吸收值可反映細胞存活率。

實驗方法：取對數(shù)生長期細胞，消化、計數(shù)，以3×10⁵/mL 的密度接種于 96 孔培養(yǎng)板中，每孔100 μl。培養(yǎng) 24小時后，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/L濃度處理細胞。實驗組每個濃度設(shè)5個復(fù)孔，以含0.4% DMSO的培養(yǎng)液作對照。藥物作用 48小時后，去上清，每孔加入100 μl MTT（2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽）(1mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng) 4小時，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在570 nm處測定吸光度值，采用 IC₅₀計算軟件求出半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)。

試驗結(jié)果詳見表1，其中，樣品是指相應(yīng)實施例中制備的巖白菜素氮雜肉桂酸酯類化合物，樣品編號對應(yīng)制備實施例中所得到的化合物的具體編號。

表1化合物對不同腫瘤細胞的半數(shù)抑制濃度IC₅₀（單位：μmol/L）

表1結(jié)果顯示，化合物1-19在所測試的3種細胞株中均表現(xiàn)出了不同程度的抗腫瘤活性，其中化合物11、12和5的活性較好，對細胞呈現(xiàn)較強的抑制效果，在特定細胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于5-氟尿嘧啶，對不同腫瘤細胞株具有明顯選擇性。綜上，本發(fā)明的巖白菜素氮雜肉桂酸酯類化合物可作為抗腫瘤候選藥物進一步進行臨床前研究，也可以做為抗腫瘤先導(dǎo)化合物進一步研究。