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一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基以及其使用方法與流程

文檔序號:11145003閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,包括KO-DMEM、B-27supplement、NAA、nucleosides、GlutaMAX II、β-巰基乙醇、卵清蛋白、OVT、肝素鈉、Activin A、TGF-β1、BMP4、FGF-2、IGF-1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,并添加20-30ng/ml的BMP4、20-30ng/ml的TGF-β1、20-30ng/ml的Activin A、5-20ng/ml的OVT、1-5ng/ml的FGF-2。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,還包括其1-2%的50X B-27supplement、1%的100X NAA、1%的100X nucleosides、2.0mM GlutaMAX II、0.1mMβ-巰基乙醇、1-2%卵清蛋白、0.5%-2%肝素鈉,均為體積比。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基,其特征在于,還含有以KO-DMEM為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,體積比0.5%-2%的三抗,所述三抗由青霉素、鏈霉素、兩性霉素B組成。

5.一種培養(yǎng)cPGCs的完全培養(yǎng)基的使用方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)采集的14HH雞胚血液置入含有cPGCs完全培養(yǎng)液的培養(yǎng)體系中培養(yǎng),原代培養(yǎng)10-15d即可純化細(xì)胞;

(2)將純化后cPGCs細(xì)胞重新置入cPGCs完全培養(yǎng)基進行體外培養(yǎng)擴增;

(3)對體外培養(yǎng)擴增的cPGCs進行計數(shù)、間接免疫熒光檢測,包括SSEA-1和DAZL表面標(biāo)記。

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