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一種逆轉(zhuǎn)錄方法、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及其應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12697116閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種逆轉(zhuǎn)錄方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)通過裂解試劑對(duì)樣本進(jìn)行裂解,

(2)通過逆轉(zhuǎn)錄試劑對(duì)裂解后的樣本直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆轉(zhuǎn)錄方法,其特征在于,所述的裂解試劑為NP-40裂解液,所述的NP-40裂解液配方為:RNase-Free H2O,NP-40,RNasin,其中NP-40的質(zhì)量濃度為0.2%-5%,RNasin的濃度為1-10U。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的逆轉(zhuǎn)錄方法,其特征在于,步驟1)的裂解操作具體為:裂解操作在冰上進(jìn)行,采用RNase-free槍頭輕輕吹打,裂解10-30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆轉(zhuǎn)錄方法,其特征在于,所述的裂解試劑為堿裂解試劑,所述的堿裂解試劑配方為:RNase-Free H2O,KOH,其中KOH的濃度為0.00001-0.01M。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的逆轉(zhuǎn)錄方法,其特征在于,步驟1)的裂解操作具體為:裂解操作在冰上進(jìn)行,采用RNase-free槍頭輕輕吹打,裂解5-20min,之后加入等量的HCl中和,再加入1-10U的RNasin。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆轉(zhuǎn)錄方法,其特征在于,所述的樣本為細(xì)胞、組織或血液。

7.一種逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,其特征在于,包含裂解試劑,所述的裂解試劑為NP-40裂解液或堿裂解試劑;所述的NP-40裂解液配方為:RNase-Free H2O,NP-40,RNasin,其中NP-40的質(zhì)量濃度為0.2%-5%,RNasin的濃度為1-10U;所述的堿裂解試劑配方為:RNase-Free H2O,KOH,其中KOH的濃度為0.00001-0.01M。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,其特征在于,還包含逆轉(zhuǎn)錄試劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,其特征在于,所述的逆轉(zhuǎn)錄試劑包含逆轉(zhuǎn)錄酶,所述的逆轉(zhuǎn)錄酶是MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶或AMV逆轉(zhuǎn)錄酶。

10.權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒在從樣本中獲得cDNA的過程中的應(yīng)用。

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