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一種TaqMan熒光定量RT-PCR試劑盒及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:40615637發(fā)布日期:2025-01-07 21:04閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,所述taqman熒光定量rt-pcr試劑盒能夠同時檢測豬繁殖與呼吸綜合征中的c-prrsv、hp-prrsv和nl-prrsv;

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,還包括反應(yīng)液,所述反應(yīng)液包括緩沖液和反轉(zhuǎn)錄酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,還包括陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品,所述陽性對照標(biāo)準(zhǔn)品包括c-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品、hp-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品和nl-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,所述c-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的核苷酸序列如seq?id?no.10所示;所述hp-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的核苷酸序列如seq?id?no.11所示;所述nl-prrsv質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的核苷酸序列如seq?id?no.12所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒,其特征在于,還包括陰性對照液,所述陰性對照液為去rna酶水。

6.如權(quán)利要求1~5任一項所述的一種taqman熒光定量rt-pcr試劑盒在豬繁殖與呼吸綜合征檢測中的應(yīng)用,其特征在于,檢測的毒株包括c-prrsv、hp-prrsv和nl-prrsv。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)程序為:預(yù)變性?95?℃,10?s;變性?95?℃,10?s;退火延伸?55~58?℃,30?s,40個循環(huán)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)程序為:預(yù)變性?95?℃,10?s;變性?95?℃,10?s;退火延伸?57?℃,30?s,40個循環(huán)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)體系為:用于檢測c-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.2~1.2μl,用于檢測c-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.1~1μl;用于檢測hp-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10μmol/l、體積均為0.2~1.2μl,用于檢測hp-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.2~1.2μl;用于檢測nl-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.1~0.6μl,用于檢測nl-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.2~1.2μl。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,rt-pcr反應(yīng)體系為:用于檢測c-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為1.0μl,用于檢測c-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.4μl;用于檢測hp-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.6μl,用于檢測hp-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.8μl;用于檢測nl-prrsv的上游引物和下游引物的濃度均為10?μmol/l、體積均為0.2μl,用于檢測nl-prrsv的探針濃度為10?μmol/l、體積為0.6μl。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及分子生物技術(shù)領(lǐng)域,具體公開了一種TaqMan熒光定量RT?PCR試劑盒及其應(yīng)用,包括分別用于檢測C?PRRSV、HP?PRRSV和NL?PRRSV的引物及探針;用于檢測C?PRRSV的引物和探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1~3所示;用于檢測HP?PRRSV的引物和探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4~6所示;用于檢測NL?PRRSV的引物和探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7~9所示。本發(fā)明能夠同時檢測出豬繁殖與呼吸綜合征的三種毒株C?PRRSV、HP?PRRSV和NL?PRRSV,且具有特異性好、靈敏度高和重復(fù)性好的優(yōu)點,尤其是能夠大幅度降低檢測下限、提高靈敏度。

技術(shù)研發(fā)人員:高緒芳,林華,楊苗,張婧,晏澎湖,陳弟詩,鹿茸,曠聃,王成,覃芳葵
受保護的技術(shù)使用者:成都市疾病預(yù)防控制中心
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/1/6
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