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利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法與流程

文檔序號(hào):11860939閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,獲取需要檢測(cè)的水域中的魚(yú),并采用所述魚(yú)的GSH與GSSG的比值作為敏感生物標(biāo)記物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,所述魚(yú)的GSH與GSSG的比值大小與CO2酸化水體的pH值大小呈正相關(guān)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,建立魚(yú)的GSH與GSSG的比值與CO2酸化水體的pH值大小關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后將待檢測(cè)水域中的同種同大小的魚(yú)的GSH與GSSG的比值大小與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì),得到待檢測(cè)水域中CO2酸化水體的pH值大小。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,魚(yú)的GSH含量與GSSG含量分別用GSH試劑盒和GSSG試劑盒測(cè)定。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,所述魚(yú)的GSH與GSSG的比值測(cè)定包括如下步驟:

步驟一、待測(cè)樣本處理:制備全魚(yú)勻漿,然后離心分層,取上層清液為待測(cè)樣本;

步驟二、測(cè)定GSSG含量;

步驟三、測(cè)定GSH含量;

步驟四、將GSH含量除以GSSG含量得到GSH與GSSG的比值。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,所述步驟一中全魚(yú)勻漿為全魚(yú)與濃度0.65%的魚(yú)用生理鹽水按質(zhì)量比為1:9配置,且所述離心分層用冷凍離心機(jī),11028g,4℃,離心10min。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,用GSSG試劑盒測(cè)定GSSG含量的具體步驟為:

1)、將稀釋n倍的待測(cè)樣本100ul加入測(cè)定管中,將濃度為50umol/L的GSSG標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)管中,然后在測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管中分別各加入試劑五2ul和試劑六5ul,然后漩渦混勻1分鐘,37℃反應(yīng)30分鐘;

2)、在測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管中各自只留50ul液體測(cè)定,然后在測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管中分別各加入試劑一400ul和試劑二50ul,然后混勻室溫靜置2分鐘;

3)、在測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管中分別各加入試劑三200ul,加試劑三時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),混勻后,于1cm光徑4mm內(nèi)徑的玻璃比色皿中,于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)412nm處,30秒時(shí)分別讀取測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值記為A3,室溫靜置5分鐘,然后到5分30秒時(shí)分別讀取測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值記為A4,然后代入如下公式計(jì)算得魚(yú)的過(guò)GSSG含量:

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,用GSH試劑盒測(cè)定GSH含量的具體步驟為:

1)、將稀釋m倍的待測(cè)樣本50ul加入測(cè)定管中,將濃度為50umol/L的GSH標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)管中,然后在測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管中分別各加入試劑一400ul和試劑二50ul,然后混勻室溫靜置2分鐘;

2)、在測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管中分別各加入試劑三200ul,加試劑三時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí),混勻后,于1cm光徑4mm內(nèi)徑的玻璃比色皿中,于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)412nm處,30秒時(shí)分別讀取測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值記為A1,室溫靜置5分鐘,然后到5分30秒時(shí)分別讀取測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值記為A2,然后代入如下公式計(jì)算得魚(yú)的過(guò)GSH含量:

GSH含量=T-GSH含量-2×GSSG含量。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,n=m=10。

10.根據(jù)權(quán)利要求4-9任一項(xiàng)所述的利用魚(yú)的GSH與GSSG的比值監(jiān)測(cè)CO2酸化水體的方法,其特征在于,所述魚(yú)為海水青鳉或淡水青鳉。

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